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别进样5、10、20、40、80 μL，记录峰面积。分别以奥拉西                   量（按胶囊规格0.4 g计算）：杂质含量＝（供试品溶液奥
        坦和奥拉西坦酸的进样量（X，ng）为横坐标、相应峰面积                        拉西坦酸峰面积×杂质对照品溶液浓度×样品平均装
       （Y）为纵坐标绘制标准曲线，得两者回归方程分别为：奥                          量）/（杂质对照品溶液峰面积×供试品溶液浓度×样品规
        拉西坦 Y＝2 007.2X－2 647.2（r＝1.000），奥拉西坦酸              格）×100％。每批样品平行2份测定，取平均值。结果，
        Y＝2 821.0X－15 783.0（r＝0.999 6）。结果表明，奥拉西            9批样品中均检出奥拉西坦酸，其测定结果详见表2。
        坦和奥拉西坦酸进样量均在 25～400 ng 范围内与其峰                          表2 样品中奥拉西坦酸的含量测定结果（n＝2）
        面积呈良好的线性关系。                                        Tab 2 Content determination results of oxiracetam
        2.3.6  精密度试验      精密量取“2.3.3”项下奥拉西坦和                       acid in samples（n＝2）
        奥拉西坦酸混合溶液 20 μL，按“2.1.1（1）”项下色谱条件                  厂 家               批号               奥拉西坦酸含量，％
        连续进样测定6次，记录峰面积。结果，奥拉西坦和奥拉                          A                20180701             0.07
                                                                            20180702             0.05
        西坦酸峰面积的 RSD 分别为 0.6％、0.9％（n＝6），表明                                   20180921             0.11
        仪器精密度良好。                                           B                264180627            0.16
        2.3.7  重复性试验      称取奥拉西坦胶囊内容物（批号：                                   264180268            0.12
                                                                            264180269            0.14
        180802）适量，共6份，按“2.3.2（1）”项下方法制备供试品                 C                180801               0.08
        溶液，同时取“2.3.2（3）”项下杂质对照品溶液，分别按                                       180802               0.05
       “2.1.1（1）”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，按外标                                       180803               0.06
        法计算奥拉西坦酸平均含量为 0.05％（RSD＝0.67％，                     3 讨论
        n＝6），表明本方法重复性良好。                                   3.1 色谱分析色谱柱的选择
        2.3.8  加样回收率试验        称取奥拉西坦胶囊内容物（批                    现行奥拉西坦胶囊标准中无有关物质测定项，而其
        号：180802）适量，共 9 份，精密称定，分别置于 25 mL 量                原料药注册质量标准中有关物质测定采用色谱柱为 C8
        瓶中，精密加入50 μg/mL杂质对照品溶液[按“2.3.2（3）”                 柱或氰基柱。本课题组在相同的色谱条件下，比较了C8
        项下方法重新配制]0.8、1.0、1.2 mL，每个质量浓度平行                   柱、氰基柱和C18柱的保留时间和分离效果。结果显示，
        3 份。加样后，按“2.3.2（1）”项下方法制备供试品溶液，                    因奥拉西坦的极性大、分子小，故在C8柱上保留时间短、
        再按“2.1.1（1）”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计                     分离效果欠佳，主峰无法与破坏试验中产生的杂质峰较
        算加样回收率。结果，奥拉西坦酸平均加样回收率为                            好地分离；采用氰基柱分离时，由酸、碱破坏试验所获得
        99.25％（RSD＝1.6％，n＝9），详见表1。                         的杂质色谱峰较少，且主峰的纯度不高；采用 ST PAK
                                                           C18 ES 色谱柱进行分析时，因该色谱柱进行了新型聚合
                 表1   加样回收率试验结果（n＝9）
               Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）        物包被，不仅使奥拉西坦有适当的保留时间，而且对杂
                                                           质的分离效果也好，故选择其作为一维色谱分析的色
        称样量， 杂质已知含量， 杂质加入量， 杂质测得量， 加样回收率， 平均加样回收率， RSD，
         mg     μg      μg     μg     ％        ％     ％     谱柱。
         25.04  12.52   40    52.62  100.25                3.2  色谱分析流动相的选择
         25.12  12.56   40    51.06   96.25                    在确定了色谱柱的基础上，笔者考虑到需准确定位
         25.08  12.54   40    52.04   98.75
         25.00  12.50   50    61.70   98.40                杂质的出峰时间，故重点对一维色谱流动相进行筛选。
         25.00  12.50   50    62.00   99.00   99.25  1.6   先后选用甲醇-水、乙腈-水、水、磷酸盐缓冲液等系统，并
         25.14  12.57   50    61.77   98.40                适当调节流动相比例后进行了一系列考察。结果显示，
         25.02  12.51   60    72.71  100.33
         25.10  12.55   60    72.35   99.67                流动相中如果含有机溶剂，则柱效低、保留时间短，主峰
         25.06  12.53   60    73.83  102.17                与相邻峰不能得到较好分离；采用水为流动相则会出现
        2.3.9  稳定性试验        取同一份供试品溶液（批号：                  较大的溶剂峰和倒峰；而采用磷酸盐缓冲液系统可避免
        180802），分别于室温下放置 0、2、4、6、8 h 时，按“2.1.1             出现以上情况。通过试验筛选后发现，以 0.02 mol/L 磷
       （1）”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，奥拉                          酸二氢钠缓冲盐为流动相时，主峰保留时间适宜，与各
        西坦酸峰面积的RSD为0.96％（n＝5），表明供试品溶液                      杂质峰的分离度良好，且峰宽较小，便于对目标杂质成
        在室温下放置8 h内基本稳定。                                    分进行峰切割后转入二维色谱分析。
        2.3.10  不同厂家 9 批样品中奥拉西坦酸的含量测定                      3.3 奥拉西坦杂质的产生
          取 3 个厂家共 9 批奥拉西坦胶囊样品内容物适量，按                          奥拉西坦含酰胺键，合成中在无水碳酸钠作用下易
       “2.3.2（1）”项下方法制备供试品溶液，同时取“2.3.2（3）”                 水解成羧酸，生成奥拉西坦酸（即4-羟基-2-氧代-1-吡咯
                                                                   [10]
        项下杂质对照品溶液，分别按“2.1.1（1）”项下色谱条件                      烷乙酸） 。奥拉西坦酸为合成过程中的主要副产物，
        进样测定，记录峰面积，采用外标法计算奥拉西坦酸含                           以及在酸性、碱性条件下的主要降解产物，可进一步与


        中国药房    2020年第31卷第6期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6  ·685  ·
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