Page 49 - 202006
P. 49

components， with good sensitivity， precision， repeatability， stability and accuracy. The quality of the finished product of
        Oxiracetam capsules can be well controlled by using above method.
        KEYWORDS     Two-dementional UPLC-IT-TOF-MS； HPLC；Oxiracetam capsule；Oxiracetam acid； Impurity； Identification；
        Content determination




            奥拉西坦为吡拉西坦的类似物，其化学名为 4-羟                        2 方法与结果
        基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺（化学结构式见图1），临床上                      2.1 奥拉西坦胶囊中主要杂质的定性分析
        主要用于改善老年性痴呆和记忆障碍患者的记忆功                             2.1.1  色谱条件 （1）一维液相色谱条件：色谱柱为 ST
        能 ，其作用机制是通过促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺的                           PAK C18 ES 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为 0.02
          [1]
        合成，提高大脑中腺苷三磷酸（ATP）/腺苷二磷酸（ADP）                      mol/L 磷酸二氢钠溶液，流速为 0.5 mL/min，柱温为
                                            [2]
        的比值，增加大脑中蛋白质和核酸的合成 。按照 2015                        30 ℃，检测波长为 210 nm，进样量为 20 μL。（2）二维液
                                        [3]
        年版《中国药典》（四部）相关指导原则 开展的稳定性试                         相色谱条件和质谱条件：色谱柱为Techmate C18-STⅡ柱
        验结果显示，奥拉西坦胶囊在贮存过程中杂质含量有逐                           （150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.02 mol/L醋酸铵溶
        渐增加的趋势。奥拉西坦原料药现行注册质量标准对                            液（用冰醋酸调节pH为4.8），流速为0.5 mL/min，柱温为
        其有关物质采用高效液相色谱（HPLC）自身对照法进行                         30 ℃；离子源为电喷雾离子源（ESI），离子源温度为
        测定  [4-5] ，但无法对有关物质的含量进行准确控制；而奥                    500 ℃，接口电压为4 500 V（正离子模式）、－4 500 V（负
        拉西坦胶囊质量标准则未对有关物质进行控制 。基于                           离子模式），扫描方式为一级质谱全扫描（正、负离子模
                                                [6]
        此，本课题组参考相关文献            [7-8] ，建立了超高效二维液相          式），去簇电压为 55 V（正离子模式）、－45 V（负离子模
        色谱-离子阱-飞行时间质谱法，对奥拉西坦胶囊中的主                          式）。
        要未知杂质进行定性分析，确定杂质的结构，并对该杂                           2.1.2  溶液的制备 （1）供试品溶液：精密称取奥拉西
        质进行含量测定，为提高奥拉西坦胶囊质量控制标准、                           坦胶囊内容物适量，加 0.02 mol/L 磷酸二氢钠溶液溶解
        确保其临床使用的有效性和安全性提供技术支持。                             并稀释制成每 1 mL 中含奥拉西坦 1 mg 的溶液，即得。
                                                           （2）自身对照溶液：精密量取上述供试品溶液0.5 mL，置
                                                           于100 mL量瓶中，加0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液稀释至
                                                           刻度，摇匀，即得。
                                                           2.1.3  主要未知杂质定性分析            精密量取“2.1.2”项下
                                                           自身对照溶液和供试品溶液各 20 μL，按“2.1.1”项下条
                 A.奥拉西坦              B.奥拉西坦酸               件注入液相色谱仪，经一维液相色谱条件分离确定主要
              图1   奥拉西坦和奥拉西坦酸化学结构式                         未知杂质的保留时间为 6.607 min，详见图 2。将该未知
        Fig 1  Chemical structure of oxiracetam and oxirace-  杂质（保留时间为6.607 min的部分）切换到LOOP环中，
              tam acid                                     进行二维脱盐分析，记录总离子流图和未知杂质质谱
        1 材料                                               图，详见图3、图4。结果显示，在奥拉西坦一维液相色谱
        1.1  仪器                                            图中保留时间为 6.607 min 的未知杂质峰，其分子离子
            2D-LC-IT-TOF/MS型超高效二维液相色谱-离子阱-                 峰分别为m/z 159.9[M+H] 和m/z 158.1[M-H] ，分子量为
                                                                                 +
                                                                                                 －
        飞行时间质谱系统、SPD-M20A 型二极管阵列检测器                        159。 采 用 2D-LC-IT-TOF/MS 系 统 的 LCMS Solution
       （用于定性分析）、LC-20AD 型液相色谱仪（用于含量测                       Ver 3.70 色谱工作站中的分子式预测模块“Accurate
        定）均购自日本Shimadzu公司；Mercury-400型核磁共振                 Mass Calculator”，结合化合物氢碳比、氮规则、质谱信息
                                                                                    [9]
       （NMR）仪（美国 Varian 公司）；CP225D 型十万分之一电                 以及奥拉西坦杂质合成路线 ，预测该杂质的可能分子
        子天平（德国Sartorius公司）。                                式为C6H9NO4，初步推断该杂质为奥拉西坦酸（化学结构
        1.2 药品与试剂                                          式见图1）。
            奥拉西坦胶囊（厂家 A，批号：20180701、20180702、              2.1.4  破坏试验      取奥拉西坦原料药适量，经0.2 mol/L
        20180921；厂 家 B，批 号 ：264180627、264180268、           盐酸溶液或0.2 mol/L氢氧化钠溶液分别进行酸、碱破坏
        264180269；厂家 C，批号：180801、180802、180803；规格          后，按“2.1.2（1）”项下方法制成两种破坏样品供试品溶
        均为 0.4 g）；奥拉西坦原料药[石药集团欧意药业（石家                      液后，再按“2.1.1（1）”项下色谱条件进样测定（图略）。
        庄）有限公司，批号：264100627，纯度：99.3％]；醋酸铵、                 结果显示，在一维色谱图保留时间约 6.6 min 处的色谱
        冰醋酸、二氯甲烷、甲醇均为色谱纯，氢氧化钠、浓盐酸、                         峰明显增大，经二极管阵列检测器检测后显示，其最大
        磷酸二氢钠均为分析纯，水为超纯水。                                  吸收波长为 197 nm；然后按“2.1.1（2）”项下条件检测后


        中国药房    2020年第31卷第6期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6  ·683  ·
   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53   54