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high- dose groups and the levels of TNF-α ，IL-6，IL-8 and MDA，protein and mRNA expression of NF-κ B in M. alba total
        flavonoids groups were significantly decreased；the levels of SOD，GSH and CAT，the expressions of PPARγ protein and mRNA，
        AMPK mRNA and p-AMPK protein were significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Total flavonoids from
        M. alba can improve the glycolipid metablism，inflammation and oxidative stress in GDM model rats，the mechanism of which
        may be related to the activation of PPARγ pathway.
        KEYWORDS     Gestational diabetes mellitus；Total flavonoids from Morus alba；PPARγ；Glycolipid metabolism；Inflammation；
        Oxidative stress；Rat


            妊娠期糖尿病（Gestational diabetes mellitus，GDM）       王华伟副研究员鉴定为桑科桑属植物桑（M. alba L.）
        为妊娠期的常见合并症，是指妊娠期首次发生或发现的                            的叶。
                                   [1]
        糖代谢异常，可增加母胎风险 。胰岛素抵抗加重是                                 链脲佐菌素（STZ，美国Sigma公司）；pH 4.5的枸橼
                                    [2]
        GDM患者重要的病理生理特征 ，但导致妊娠期胰岛素                           酸 缓 冲 液（青 岛 捷 世 康 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：
        抵抗加重的因素尚未完全阐明。有研究指出，脂代谢紊                            T2607）；肿瘤坏死因子α（TNF-α）（批号：ml002859）、白
        乱、炎症和氧化应激反应的过度激活均有可能影响胰岛                            细 胞 介 素 6（IL-6）（批 号 ：ml028583）、IL-8（批 号 ：
        素信号的转导，进而诱导胰岛素抵抗的发生，上述因素                            ml028580）酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒均购自上海
        可能与GDM的发生有关           [3-5] 。                       酶联生物科技有限公司；丙二醛（MDA）硫代巴比妥酸
            桑叶是桑科桑属植物桑（Morus alba L.）的干燥叶。                  法试剂盒（批号：A003-1-1）、超氧化物歧化酶（SOD）羟
        历代中医典籍中均记载该药可治疗消渴症。现代药理                             胺法试剂盒（批号：A001-1-2）、谷胱甘肽过氧化物酶
        研究证实，桑叶中的有效成分桑叶总黄酮无致畸作用，                           （GSH）微板法试剂盒（批号：A006-2-1）、过氧化氢酶
        且具有降脂、降糖的作用，在2型糖尿病的治疗中具有一                          （CAT）可见光法试剂盒（批号：A007-1-1）均购自南京建
        定价值   [6-7] 。由于GDM与2型糖尿病具有类似的病理生                    成生物工程研究所；超纯 RNA 提取试剂盒（批号：
                             [2]
        理特征（即胰岛素抵抗） ，故本课题组推测桑叶总黄酮                           CW0597）、SuperRT cDNA 第一链合成试剂盒（批号：
        可能对GDM具有一定的治疗作用。                                    CW0741）、UltraSYBR Mixture试剂盒（批号：CW2601S）
            过氧化物酶增殖体激活受体γ（PPARγ）是细胞内调                       均购自北京康为世纪生物科技有限公司；RIPA 裂解液
        节炎症和氧化应激反应的重要分子，可通过抑制下游核                           （批号：P0013E）、BCA 蛋白定量试剂盒（批号：P0012）、
        因子κB（NF-κB）的活化来减轻炎症反应的程度，亦可通                        上样缓冲液（批号：P0015L）均购自上海碧云天生物技术
        过促进下游腺苷一磷酸依赖的蛋白激酶（AMPK）的活                           有限公司；兔源PPARγ一抗（批号：ab23673）、兔源NF-κB
                                   [8]
        化来减少氧化应激反应的发生 。已有研究报道，GDM                           一 抗（批 号 ：ab32360）、兔 源 AMPK 一 抗（批 号 ：
        患者胎盘中PPARγ途径受到明显抑制，从而使得炎症细                          ab80039）、兔源磷酸化 AMPK（p-AMPK）一抗（批号：
        胞因子、氧化应激产物的释放增加，母体炎症反应和氧                            ab133448）、兔 源 β- 肌 动 蛋 白（β-actin）一 抗（批 号 ：
                                                   [9]
        化应激反应被激活，最终导致母体糖脂代谢紊乱 。鉴                            ab8827）、Alexa Fluor 488 标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批
                                                                              ®
        于此，本研究以 GDM 模型大鼠为对象，基于胎盘中                           号：ab150081）、ECL化学发光试剂（批号：ab65223）均购
        PPARγ途径的改变来探讨桑叶总黄酮对大鼠糖脂代谢、                          自美国 Abcam 公司；D101 型大孔吸附树脂（0.3～1.2
        炎症、氧化应激的改善作用，旨在挖掘桑叶总黄酮在                             mm，上海颖心实验室设备有限公司）；63428-84-2 型聚
        GDM治疗中的潜在价值。                                        酰胺（60～80 目，上海萌芽生物科技有限公司）；生理盐
        1 材料                                                水（本实验室自制）；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
        1.1 仪器                                              1.3 动物
            Selectra E型全自动生化分析仪（上海玉研科学仪器                        SPF 级雌、雄性 SD 大鼠，6 周龄，体质量 120～150
        有限公司）；Labserv K3型酶标仪（上海沃元科技有限公                      g，由北京维通利华实验动物公司提供，动物使用许可证
        司）；Veriti 96 型荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪（美国                   号 ：SYXK（京）2017-0022。 高 脂 饲 料（含 标 准 饲 料
        ABI公司）；5200型蛋白电泳系统及凝胶成像仪（上海天                        59.8％、白糖15％、猪油10％、食盐2％、胆固醇0.2％、酪
        能科技有限公司）；卓越纤巧型血糖仪（瑞士 Roche 公                        蛋白7％、蛋黄粉5％）购自上海睿安生物科技有限公司。
        司）；X6 型智能扫描紫外分光光度计（上海元析仪器有                          2 方法
        限公司）；TGL-16K型台式离心机（湖南湘仪实验室仪器                        2.1 桑叶总黄酮的制备
        开发有限公司）；YM-T2000CT型超声仪（上海豫明仪器                           取桑叶饮片 500 g，加入 25 倍量（g/mL）70％乙醇浸
        有限公司）。                                              泡 1 h，超声（功率：1 200 W，频率：20 kHz）处理 30 min
        1.2  药材与试剂                                          后，加热回流提取 1.5 h，滤过，药液减压回收至无醇味。
            桑叶饮片（批号：20170937）购自四川省中药饮片有                     将上述提取物经70％乙醇稀释后，用聚酰胺和大孔吸附
        限责任公司，经昆明医科大学第一附属医院生殖遗传科                            树脂进行联合精制，依次以水、20％乙醇洗脱后，再以


        ·672  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6                                   中国药房    2020年第31卷第6期
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