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and mannose metabolism signaling pathway（P＜0.05）. CONCLUSIONS：The ethyl acetate fraction of D. Moldavica is the
        antibacterial active fraction，and its activity may be related to the microbial metabolism and cell glycometablism.
        KEYWORDS     Dracocephalum moldavica；Ethyl acetate extract；Inhibition zone；Minimal inhibitory concentration；Differential
        ly expressed protein；Bioinformatic analysis


            香青兰（Dracocephalum Moldavica Linn.）为唇形科         公司）；Protease inhibitor cocktail 蛋白酶抑制剂（美国
        青兰属1年生植物，分布于我国华北、西北和东北等地。                          APExBIO Technology 公司）；pH 7.4 的磷酸盐缓冲液
        作为民族药，民间常以其干燥地上部位入药。研究发                            （PBS，北京博迈德基因技术有限公司）；0.9％氯化钠注
        现，香青兰富含黄酮类、挥发油类、糖类、氨基酸类、萜类                         射液（贵州科伦药业有限公司，作生理盐水用）；十二烷
        和微量元素等多种成分，具有改善心肌缺血、降低血液                           基磺酸钠（SDS）、尿素、二甲基亚砜（DMSO）、无水乙醇、
        黏度和血小板聚集率、抗脂质过氧化损伤等作用，可用                           石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等试剂均为分析
        于心脑血管疾病等的临床治疗             [1-2] 。                  纯，水为蒸馏水。
            天然产物由于其来源广泛、不易耐药等优点成为近                         1.3 菌株
        年来抗菌药物研究的热点之一。既往研究显示，香青兰                               供试病原菌肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia）、
                                         [3]
        挥发油具有抗菌、抗流感病毒的作用 ；同时有研究表                           大肠埃希菌（Escherichia coli）、鲍曼不动杆菌（Acineto-
        明，植物中大多数抑菌活性物质均为次生代谢产物，其                           bacter baumannii）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aerugi-
        中黄酮类化合物受到国内外学者的普遍关注                    [4-6] 。本课   nosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、表皮葡
        题组在前期研究的基础上，以临床来源的多重耐药病原                           萄球菌（S. epidermidis）、腐生葡萄球菌（S. saparophyt-
        菌为对象，对其乙醇提取物各萃取部位的抗菌活性进行                           ics）、人葡萄球菌（S. hominis）、溶血葡萄球菌（S. haemo-
        筛选，并对差异表达蛋白进行基因本体（GO）功能富集                          lyticus）均为临床检出多重耐药菌，由包头医学院第二附
        和 KEGG 信号通路分析，以初步挖掘其潜在抗菌机制，                        属医院检验科提供；金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC
        为香青兰抑菌活性的研究提供物质基础和科学依据。                            25923）由国家卫生健康委员会临床检验中心提供。
        1 材料                                               2 方法
        1.1  仪器                                            2.1  不同溶剂萃取物供试溶液的制备
            MCO-18AC 型 CO2 培养箱（日本 Panasonic 公司）；               取香青兰药材，粉碎，称取粉末 100 g，加入 65％乙
        Phoenix TM  100 型全自动微生物鉴定及药敏系统（美国                  醇 1 000 mL，于 60 ℃水浴中加热提取 2 h，滤过，残渣按
        BD 公 司）；iMarK 型 酶 标 仪（美 国 Bio-Rad 公 司）；            上述方法再提取1次；合并滤液，减压浓缩至无醇味，得
        Easy-nLC 1000 型纳升级高效液相色谱（HPLC）系统、                  乙醇提取物。取上述提取物依次使用同体积石油醚、二
        Q-Exactive 型质谱仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公      氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取2次，合并相同萃取部位，
        司）；750型超声仪（美国Sonics公司）；RE-2000A型旋转                 减压浓缩干燥，得石油醚部位 0.766 1 g、二氯甲烷部位
        蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-Ⅲ型循环式真空水                        1.402 8 g、乙酸乙酯部位 0.916 g、正丁醇部位 0.913 5 g。
        泵（上海知信实验仪器技术有限公司）；DZKW-S-8 型电                      取各部位样品适量，用 DMSO 稀释，制成质量浓度均为
        热恒温水浴锅（上海科恒实业发展有限公司）；BSC-1500                      250 mg/mL（以提取部位质量计，下同）的溶液，即得不同
        ⅡB2-X 型生物安全柜（济南鑫贝西生物技术有限公                          溶剂萃取物供试溶液。
        司）；TG16-WS型台式高速离心机（湖南湘仪实验室仪器                       2.2 药敏试验
        开发有限公司）；HZ 系列恒温振荡器（江苏省太仓市实                             供试菌株经革兰氏染色初步分类后，采用全自动微
        验设备厂）；MLS-3780型高压灭菌锅（日本Sanyo公司）。                   生物鉴定及药敏系统鉴定菌种，以纸片扩散法、琼脂倍
        1.2 药材与试剂                                          比稀释法等进行药敏试验，严格按照美国临床和实验室
                                                                                    [7]
            供试药材由内蒙古通辽市扎鲁特旗产野生香青兰                          标准协会（CLSI）2017年标准 操作并判定结果。
        种子经人工培育所得，并经包头医学院公共卫生学院靳                           2.2.1  抑菌圈测定       采用纸片扩散法 。将含有不同溶
                                                                                            [7]
        敏 副 教 授 鉴 定 为 唇 形 科 植 物 香 青 兰（D. Moldavica         剂萃取物供试溶液（250 mg/mL，剂量参考本课题组前期
        Linn.）的地上部位。药材经粉碎后，取适量样品粉末保                        预试验结果设定）20 μL 的无菌药敏纸片置于含标准量
        存于包头医学院公共卫生学院。                                     病原菌接种物（1.5×10 CFU/mL）的 MH 琼脂培养基中，
                                                                              8
            哥伦比亚血琼脂培养基（济南百博生物技术股份有                         并以 DMSO 为阴性对照，于 37 ℃、5％CO2条件下培养
        限公司）；MH琼脂培养基（温州市康泰生物科技有限公                          18 h，使用游标卡尺测量药敏纸片周围的抑菌圈直径，以
        司）；LB 培养基（本实验室自制）；药敏纸片（英国 Oxoid                    筛选具有抗菌活性的萃取部位。判定标准——抑菌圈


        中国药房    2020年第31卷第6期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6  ·667  ·
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