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中重要的品质因子。药材颜色是中药传统性状鉴别中                            甲醇超声溶解并制成每1 mL含0.410 mg的山柰酸对照
        的重要内容之一，其与药材内在成分含量也存在某种关                           品溶液。所制对照品溶液均于 4 ℃中冰箱避光保存，
        联，颜色的差异常反映药材质量的差异，但颜色评价存                           备用。
        在很大的主观性。而利用色差原理可以将颜色信息定                                          表1 红花药材来源信息
        量化，药材色度的差异可以反映其内在质量的差异，这                                 Tab 1 Source information of C. tinctorius
                    [7]
                                   [9]
              [6]
                                            [10]
                                                     [11]
                           [8]
        在红花 、木香 、黄连 、北豆根 、广陈皮 、牡丹皮 、                       样品 采集      采集地     常温保存 样品 采集      采集地      常温保存
              [12]
                             [14]
                    [13]
        西红花 、丹参 、桑白皮 等药材中均已得到了证实。                          编号 年份               年限，年 编号 年份              年限，年
                                                           S1  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S13 2017 成都中医药大学药用植物园  1
            根据产地的不同，红花可分为四川的“川红花”、河
                                                           S2  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S14 2017 成都中医药大学药用植物园  1
        南的“怀红花”、浙江的“杜红花”、云南的“云红花”以及                        S3  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S15 2017 成都中医药大学药用植物园  1
                          [15]
        新疆的“新疆红花”等 。当前，我国的红花以新疆和云                          S4  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S16 2017 成都中医药大学药用植物园  1
                                                           S5  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S17 2016 成都中医药大学药用植物园  2
                        [16]
        南两地的产量较大 。本课题组经多年实地调研发现，
                                                           S6  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S18 2016 成都中医药大学药用植物园  2
        市场上红花药材存在鲜品与陈货参杂售卖的现象。然                            S7  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S19 2016 成都中医药大学药用植物园  2
        而，目前未见国内外文献报道不同保存年限对红花质量                           S8  2018 成都中医药大学药用植物园  0  S20 2016 成都中医药大学药用植物园  2
                                                           S9  2017 成都中医药大学药用植物园  1  S21 2016 成都中医药大学药用植物园  2
        的影响。为了保证红花药材质量及其临床疗效，有必要
                                                           S10 2017 成都中医药大学药用植物园  1  S22 2016 成都中医药大学药用植物园  2
        开展不同保存年限的红花质量研究。                                   S11 2017 成都中医药大学药用植物园  1  S23 2016 成都中医药大学药用植物园  2
            本课题组前期对不同产地红花中黄酮类成分进行                          S12 2017 成都中医药大学药用植物园  1  S24 2016 成都中医药大学药用植物园  2
        了测定，并分析了其与颜色值之间的相关性，发现颜色                           2.1.2  供试品溶液的制备          ①供 HSYA 含量测定的供
        值可作为红花品质评价的指标之一 。本研究在前期研                           试品溶液（记为供试品溶液 1）：精密称取红花药材粉末
                                      [6]
        究基础上，以不同保存年限的 24 批红花药材为研究对                         0.4 g，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入25％甲醇50 mL，
        象，通过其保存年限、有效成分（HSYA、山柰酚）含量与                        称定质量，25 ℃下超声处理，放冷，再次称定质量，用
        颜色的相关性，重点分析不同保存年限红花的质量差                            25％甲醇补足损失的质量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤
        异，为红花药材的储存及优质红花药材的外观性状鉴别                           过，取续滤液，即得。②供山柰酚含量测定的供试品溶
        提供依据。                                              液（记为供试品溶液2）：精密称取红花药材粉末0.5 g，置
        1 材料                                               于 50 mL 具塞锥形瓶中，加入甲醇 25 mL，称定质量，在
        1.1  仪器                                            80 ℃下加热回流30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇补
            SQP 型电子天平（德国 Sartorius 公司，精度：0.01              足损失的质量，摇匀，滤过；精密量取续滤液15 mL，置于
        mg）；KQ-500DE型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限                      50 mL锥形瓶中，加盐酸溶液（15→37）5 mL，摇匀，80 ℃
        公司）；HX-200 型高速中药粉碎机（浙江省永康市溪岸                       水浴加热水解30 min，立即冷却，转移至25 mL量瓶中，
        五金药具厂）；U3000 型高效液相色谱仪、DAD-3000 型                   用甲醇定容，摇匀，滤过；临用前用 0.45 μm 微孔滤膜滤
        紫外检测器（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）；CM-5         过，取续滤液，即得。
        型分光测色计（日本Konica Minolta公司）。                        2.1.3  色谱条件      参考本课题组前期测定红花中黄酮
                                                                                 [6]
        1.2  药品与试剂                                         类成分含量的条件和方法 。色谱柱：均为Agilent Zorb-
            HSYA 对照品（批号：PS011339，纯度：＞98％）、山                ax Eclipse XDB-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相：
        柰酚对照品（批号：PS001201，纯度：＞98％）均购自成都                    HSYA为甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液（26 ∶ 2 ∶ 72，V/V/V），等
        普思生物科技股份有限公司；甲醇、乙腈（美国 Fisher 公                     度洗脱；山柰酚为0.4％磷酸溶液（A）-甲醇（B）（V/V），梯
        司，色谱纯）；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。                            度洗脱（0～3 min，47％A；3～5 min，47％A→55％A；5～
            24批红花药材采自成都中医药大学药用植物园，经                        25 min，55％A→47％A）。检测波长：HSYA 为 403 nm，
        成都中医药大学裴瑾教授鉴定均为菊科植物红花（C.                           山柰酚为 367 nm。流速：均为 1.0 mL/min。柱温：均为
        tinctorius L.）的干燥花（样品收集后于鼓风干燥箱中                    25 ℃。进样量：均为10 μL。
        45 ℃烘干，打粉，过 3 号筛，于硅胶干燥器中保存，备                       2.1.4  方法学考察       按照前期建立的方法 及相关要求
                                                                                                [6]
        用）。红花药材来源信息见表1。                                    进行方法学考察。结果，HSYA回归方程为y＝14.629x+
        2 方法与结果                                            0.271（r＝1.000），山柰酚回归方程为 y＝25.610x－0.342
        2.1 HSYA和山柰酚含量测定                                   （r＝1.000），HSYA、山柰酚分别在质量浓度为 0.041 8～
        2.1.1  对照品溶液的制备          精密称取 HSYA 对照品 4           0.418 0、0.041 0～0.410 0 μg/mL范围内与其峰面积线性
        mg，加入 25％甲醇超声（功率：300 W，频率：50 kHz，时                 关系良好（式中y为峰面积，x为质量浓度）；精密度、重复
        间：40 min，下同）溶解并制成每 1 mL 含 0.418 mg 的               性 、稳 定 性（24 h）试 验 中 RSD 均 小 于 2.0％（n＝6）；
        HSYA对照品溶液。精密称取山柰酚对照品4 mg，加入                        HSYA、山柰酚的平均加样回收率分别为99.7％、99.6％，


        中国药房    2020年第31卷第5期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5  ·555  ·
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