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活性的二萜生物碱类化合物，在过去的几十年里，紫杉                           1.2 药品与试剂
        醇广泛用于卵巢癌、乳腺癌、肺癌等多种肿瘤的治疗，以                              紫杉醇对照品（批号：M1201AS，纯度：98％）、文多
        紫杉醇为基础的联合治疗是上述恶性肿瘤晚期腹水的                            灵对照品（批号：J1011AS，纯度：98％）均购自大连美仑
        主要治疗方案      [3-4] 。已有研究表明，全身化疗联合腹腔灌                生物技术有限公司；甲醇（批号：10951907818，质谱级）、
        注化疗方案对于全身多器官转移的晚期胃癌患者，尤其                           乙腈（批号：JA075930，质谱级）均购自德国默克公司；甲

        是腹膜转移胃癌患者，能够使抗癌药物在腹腔内维持较                           酸（批号：17033D，分析纯）、乙酸铵（批号：H1709024，色
                                          [5]
        高的血药浓度，从而抑制肿瘤细胞生长 。但目前尚未                           谱纯）均购自阿拉丁试剂（上海）有限公司；水为屈臣氏
        有相关研究开展紫杉醇恶性腹水浓度与疗效之间的关                            纯净水。
        系研究，而仅仅监测紫杉醇在血浆中的浓度不能准确反                           1.3 样品
        映其在恶性腹水中的浓度，因此，需建立稳定、可靠的检                              空白腹水及含药腹水均由上海长征医院肿瘤科提
        测方法，监测紫杉醇在恶性腹水中的药物浓度，为未来                           供，分别为2例肿瘤患者未给药和腹腔注射紫杉醇后6、
                                                                                                 2
        开展其浓度-疗效相关性研究提供检测技术。                               8、12、24 h的腹水样品，给药剂量为20 mg/m ，所有患者
            目前已有多种分析方法对紫杉醇进行测定，例如反                         都签署知情同意书。
        相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定大鼠血浆中紫杉醇                        2 方法与结果
        的浓度 、RP-HPLC法或液相色谱-质谱联用法（LC-MS/                    2.1 溶液的制备
              [6]
        MS）测定制剂中紫杉醇的含量             [7-8] 。但关于恶性腹水中         2.1.1  贮备液的制备         分别精密称取紫杉醇对照品
        紫杉醇含量的检测方法目前研究较少。LC-MS/MS 法                        2.01 mg、文多灵对照品2.00 mg，分别置于2 mL量瓶中，
        是一种灵敏度高、特异性强的紫杉醇含量测定方法。因                           用甲醇溶解并稀释成质量浓度为 1 mg/mL 的紫杉醇贮
        此，本课题组在前期研究 的基础上，采用 LC-MS/MS                       备液和内标贮备液，摇匀即得，于－20 ℃冰箱保存，
                              [9]
        法，以文多灵为内标，建立了测定肿瘤患者恶性腹水中                           备用。
        紫杉醇含量的方法，以期为临床监测相关患者恶性腹水                           2.1.2  工作液的制备        精密量取紫杉醇贮备液适量，以
        中紫杉醇的有效浓度提供检测技术。紫杉醇和文多灵                            10％甲醇溶液稀释，制备成质量浓度分别为0.25、0.625、
        化学结构图见图1。                                          1.25、2.5、6.25、12.5、25.0 μg/mL 的标准工作液，以及质
                                                           量浓度分别为 0.625、2.5、12.5 μg/mL 的质控工作液，现
                                                           配现用。
                                                           2.1.3  标 准 曲 线 溶 液 与 质 控 样 品 溶 液 的 制 备        取
                                                          “2.1.2”项下制备的7个水平的标准工作液和3个水平的
                                                           质控工作液，分别用生理盐水稀释10倍，即得紫杉醇质
                                                           量浓度分别为25、62.5、125、250、625、1 250、2 500 ng/mL
                  A.紫杉醇                    B.文多灵
                                                           的标准曲线溶液和质量浓度分别为 62.5、250、1 250
                图1   紫杉醇和文多灵的化学结构图                         ng/mL的质控样品溶液。
         Fig 1  Chemical structures of paclitaxe and vindoline
                                                           2.2  腹水样品的处理
        1 材料                                                   取腹水样品 100 μL，加 1 900 μL 生理盐水稀释，涡
        1.1 仪器                                             旋 30 s 混匀；取稀释样品 50 μL，置于 1.5 mL 的离心管
            1200型HPLC-G6410A型三重四级杆MS/MS仪，包                 中，加入含 100 ng/mL 内标的 0.1％甲酸甲醇溶液 200

        括 G1311A 型四元泵、G1322A 型真空脱气机、G1329A                 μL，涡旋混合 3 min，19 751.6 ×g 离心 10 min，取上清液
        型自动进样器、G1316A型柱温箱、MassHunter软件控制                   100 μL转移至自动进样小瓶，进样检测。
        系统及数据处理工作站 B.01.03（美国 Agilent 公司）；                 2.3 色谱条件与质谱条件
        BSA124S-CW 型天平、CPA225D 型天平（德国 Sartorius                色谱柱：Zorbax SB-C18 （100 mm×2.1 mm，3.5 μm）；
        公司）；Mini spin 型离心机（德国 Eppendorf 公司）；Lab-           流动相：水溶液（含 0.1％甲酸和 10 mmol/L 醋酸铵）-乙
        net VX-200 型定时可调速涡旋混合器（美国 Labnet 公                 腈溶液（40 ∶ 60，V/V）；流速：0.25 mL/min；柱温：30 ℃；进
        司）；SK7200H型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；                      样量：5 μL。
        UNIVERSAL32R 型台式冷冻离心机（德国 Hettich 公                     采 用 电 喷 雾 离 子 源（ESI），多 重 反 应 离 子 监 测
        司）。                                                （MRM）正离子模式，毛细管电压：4 000 V，干燥气温度：


        中国药房    2020年第31卷第1期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1  ·87  ·
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