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LC-MS/MS 法测定抑郁症患者晨尿中 9 种氨基酸类内源性物质

的浓度 Δ

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宋红艳 ，夏敬胜 ，纪刚剑 ，任章焘 ，张相林 ，柳 芳 ，陈 灵 （1.武汉市第三医院/武汉大学附属同仁医院药
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学部，武汉 430060；2.中日友好医院药学部，北京 100029）
中图分类号 R969 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）01-0091-08
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.01.16
摘 要 目的：建立测定人体尿液中5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、酪胺、缬氨酸浓度的方
法。方法：采集抑郁症患者的晨尿，加入内标可的松，以乙腈处理后取上清液进行浓缩，采用液相色谱-质谱串联法（LC-MS/MS）进
行分析。色谱柱为XTerra RP18；流动相A相为0.1％乙酸-水，流动相B相为0.1％乙酸-乙腈（梯度洗脱）；柱温为40 ℃；流速为0.45
mL/min；采用电喷雾离子源（ESI），以多反应监测方式（MRM）进行定量分析，5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、
酪氨酸、色氨酸、酪胺、缬氨酸和内标可的松在正离子模式下定量分析离子对分别为质荷比（m/z）192.2→146.1、147.2→130.0、
180.1→105.1、161.1→125.2、116.1→70.2、205.2→188.2、138.2→121.1、182.0→123.0、118.2→72.1、361.2→163.0。结果：5-羟基吲哚
乙酸、谷氨酰胺、缬氨酸、庚二酸、脯氨酸、酪胺的检测质量浓度范围为10.00～3 200 ng/mL（r＝0.993 8～0.998 9，n＝6），定量下限
为10 ng/mL；色氨酸、酪氨酸、马尿酸的检测质量浓度范围为1 600～51 200 ng/mL（r＝0.999 2～0.999 7，n＝6），定量下限为1 600
ng/mL，准确度试验结果为 86.29％～98.65％（n＝6），日内、日间精密度试验的 RSD 均不高于 14.65％（n＝6），基质效应的 CV 为
6.18％～14.37％（n＝6），提取回收率为86.21％～98.14％（n＝6），稳定性试验的RE均＜14.71％（n＝3～6）。结论：该方法灵敏、准
确，可用于测定人体内上述9种物质的浓度。
关键词 抑郁症患者；尿液浓度；液相色谱-质谱串联法；氨基酸类物质

Determination of 9 Amino Acid Endogenous Substances in Morning Urine of Depression Patients by
LC-MS/MS
SONG Hongyan ，XIA Jingsheng ，JI Gangjian ，REN Zhangtao ，ZHANG Xianglin ，LIU Fang ，CHEN Ling 1
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（1.Dept. of Pharmacy，Wuhan Third Hospital/Tongren Hospital Affiliated to Wuhan University，Wuhan 430060，
China；2.Dept. of Pharmacy，China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the determination of 5-hydroxyindole acetic acid（5-HIAA），glutamine，
hippurate，pimelate，proline，tryptophan，tyramine，tyrosine and valine in human urine. METHODS：Morning urine samples were
collected from depression patients. The sample was extracted with acetonitrile after addition of internal standard cortisone. LC-MS/
MS method was adopted. The determination was performed on XTerra RP18 column with mobile phase consisted of 0.1％ acetic
acid-water as mobile phase A and 0.1％ acetic acid-acetonitrile as mobile phase B（gradient elution）. The column temperature was
set at 40 ℃，and flow rate was 0.45 mL/min. Electrospray ion source（ESI）was used for quantitative analysis by multiple reaction
monitoring （MRM）. The precursor/product ion transitions （m/z） were monitored at m/z 192.2→146.1，m/z 147.2→130.0，m/z
180.1→105.1，m/z 161.1→125.2，m/z 116.1→70.2，m/z 205.2→188.2，m/z 138.2→121.1，m/z 182.0→123.0，m/z 118.2→72.1 and
m/z 361.2→163.0（+ion-mode）for 5-HIAA，glutamine，hippurate，pimelate，proline，tryptophan，tyramine，tyrosine，valine and
cortisone，respectively. RESULTS：The linear range of 5-HIAA，glutamine，pimelate，proline，tyramine and valine were 10.00-3
200 ng/mL（r＝0.993 8-0.998 9，n＝6）. The lower limit of quantification was 10 ng/mL；the linear range of hippurate，tryptophan
and tyrosine were 1 600-51 200 ng/mL（r＝0.999 2-0.999 7，n＝6）. The lower limit of quantitation was 1 600 ng/mL. The results
of accuracy tests were 86.29％-98.65％（n＝6）. RSDs of intra-day and inter-day precision tests were no more than 14.65％（n＝6）.
CV of matrix effect were 6.18％-14.37％（n＝6）. Extraction recovery rates were 86.21％-98.14％（n＝6）. RE of stability tests
were no more than 14.71％（n＝3-6）. CONCLUSIONS：The method is sensitive，accurate and suitable for the determination of 9
substances in human.
KEYWORDS Depression patients；Urine concentration；LC-MS/MS；Amino acid substances

抑郁症神经生物化学方面的研究是近几十年来的
Δ 基金项目：湖北省自然科学基金资助项目（No.2019CFC886）
＊药师。研究方向：临床药学。电话：027-68894880。E-mail： 研究的热点，取得了很大的进展，通过对抑郁症临床治
2531248621@qq.com
疗的有效药物进行研究，几乎所有在临床上有效的抗抑
# 通信作者：主管中药师，硕士。研究方向：临床中药学。电话：
027-68894886。E-mail：57776228@qq.com 郁剂都能够影响人体内物质含量的变化 [1-2] 。 目前临床

中国药房 2020年第31卷第1期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1 ·91 ·