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表1 精密度和准确度试验结果 6
Tab 1 Results of precision and accuracy tests 患者1

日内（n=5） 日间（n=3） 4
标示质量浓 μ
度，ng/mL 实测质量浓度， RSD，％ 准确度，％ 实测质量浓度， RSD，％ 准确度，％ 质量浓度，g/mL 患者2
ng/mL ng/mL
62.5 63.10 3.62 98.20 63.23 1.65 97.63 2
250 250.30 1.63 97.32 257.49 3.46 95.34
1 250 1 250.35 0.61 95.39 1 255.55 0.91 98.76
0
表2 提取回收率试验结果（n＝3） 0 10 20 30
时间，h
Tab 2 Results of extraction recovery tests（n＝3）
图3 2例肿瘤患者恶性腹水中紫杉醇的药-时曲线图
标示质量浓度，ng/mL 提取回收率，％ RSD，％ Fig 3 Plasma concentration-time curve of paclitaxel
62.5 79.58 3.35
250 85.39 3.72 in malignant ascites of 2 tumor patients
1 250 91.31 3.19 为乙腈/甲醇-甲酸水溶液、乙腈/甲醇-醋酸铵水溶液、乙

表3 基质效应考察结果（n＝3） 腈/甲醇-甲酸与醋酸铵混合水溶液时，对紫杉醇含量测
Tab 3 Results of matrix effect（n＝3） 定的影响，结果显示，紫杉醇在水溶液（含 0.1％甲酸和
标示质量浓度，ng/mL 基质效应，％ CV，％ 10 mmol/L 醋酸铵）-乙腈溶液（40 ∶ 60，V/V）等度洗脱的
62.5 101.21 1.52 条件下响应、峰形均较好；柱温为 20、25、30 ℃时，对紫
250 97.24 2.15
1 250 99.33 2.93 杉醇含量测定的影响，结果显示，柱温越高紫杉醇的出
峰时间越早，且对峰形与峰面积无明显影响，故为了节
温条件下放置 6 h，然后按“2.2”项下方法处理，再按照
省分析时间选择了柱温为30 ℃；流速为0.25、0.3 mL/min
“2.3”项下条件进样测定；（2）自动进样室中放置24 h，再
时，对紫杉醇含量测定的影响，结果显示，紫杉醇峰面积
处理后进样测定；（3）－20 ℃下冷冻，室温融解，反复冻
在0.3 mL/min流速下存在峰面积下降的情况，故选择了
融 3 次，再处理后进样测定；（4）－20 ℃下放置 30 d，再
流速为0.25 mL/min。
处理后进样测定。结果显示，所有质控样品均未出现降
3.2 样品的前处理
解、变质等变化，稳定性良好。稳定性试验结果见表4。
笔者在腹水处理过程中参考并借鉴了相关文献中
表4 稳定性试验结果（n＝3）
紫杉醇在血浆样本中的处理方法 [13-15] ，结果显示，相对于
Tab 4 Results of stability tests（n＝3）
液-液萃取法，本实验采用的蛋白沉淀法更加简单快
标示质量 室温下放置6 h 自动进样室中放置24 h 反复冻融3次 -20 ℃下放置30 d
浓度， 实测质量浓度， RE， 实测质量浓度， RE， 实测质量浓度，RE， 实测质量浓度，RE， 捷。其中，相比于乙腈，甲醇的沉淀效果更好，不易导致
ng/mL ng/mL ％ ng/mL ％ ng/mL ％ ng/mL ％ 仪器系统压力过高，并且在甲醇中加入少许甲酸可获得
62.5 62.74 0.39 60.90 -2.55 61.69 -1.30 61.41 -1.74
250 257.21 2.89 243.73 -2.50 248.83 -0.47 243.54 -2.58 较高的提取回收率，最终确定沉淀剂为含 0.1％甲酸的
1 250 1 260.69 0.86 1 248.89 -0.09 1 235.72 -1.14 1 236.18 -1.11 甲醇溶液。依据相关文献[16-18]，选择了多种沉淀剂比
2.10 肿瘤患者恶性腹水中紫杉醇的含量测定 例V 腹水 ∶V 沉淀剂 （1 ∶ 2、1 ∶ 3、1 ∶ 4、1 ∶ 5、1 ∶ 6），结果发现，当二
取 2 例肿瘤患者腹腔注射紫杉醇后 0、6、8、12、24 h 者比例超过1∶4后，提取回收率均无明显变化，故最终选
2
的腹水样品，紫杉醇的给药剂量为 20 mg/m ，将腹水样 择沉淀剂与含0.1％甲酸的甲醇体积比为1∶4的方案。
品按“2.2”项下方法处理后，再按照“2.3”项下条件进样 3.3 内标的选择
测定，代入回归方程计算恶性腹水中紫杉醇的含量。2 在内标选用时，笔者参考相关文献[19]，选用了与紫
例肿瘤患者恶性腹水中紫杉醇的药-时曲线图见图3。 杉醇物理化学性质相似的，且响应好、稳定的文多灵作
3 讨论 为内标。
3.1 LC-MS/MS条件的确定 4 结语
笔者参考文献[10-12]，在预实验中分别考察了色谱 综上所述，本实验通过对腹水样品处理及色谱、质
柱 为 Agilent ZORBAX SB C18 （100 mm × 2.1 mm，3.5 谱条件进行了良好的优化后，基于LC-MS/MS法建立了
μm）、Agilent poroshell SB C18 （75 mm×2.1 mm，2.7 μm）、 恶性腹水中紫杉醇的定量检测方法。该方法的精密度
Waters XBridge BEH C18 （50 mm×2.1mm，2.5 μm）时，对 和准确度良好，线性、稳定性、提取回收率及基质效应等
®
紫杉醇含量测定的影响，结果显示，当色谱柱为 Agilent 符合2015年版《中国药典》生物样本检测方法的要求，为
ZORBAX SB C18时，紫杉醇及内标的峰形最佳；流动相 未来肿瘤患者恶性腹水中紫杉醇的代谢研究、量效关系

中国药房 2020年第31卷第1期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1 ·89 ·