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increased significantly in EG high-dose group（P＜0.01）. In the in vivo test，compared with blank control group，the micronucleus
formation rate of bone marrow polychromatic erythrocytes and hepatocytes，the tail DNA％ and tail distance of peripheral blood
lymphocytes and hepatocytes were all increased significantly in ethyl methanesulfonate group（P＜0.01）. Tail DNA％ of peripheral
blood lymphocytes was increased significantly in EG high-dose group （P＜0.01）. There was no statistical significance in the
micronucleus formation rate of bone marrow polychromatic erythrocytes and hepatocytes，the tail DNA％ and tail distance of
hepatocytes among EG groups（P＞0.05）；with the increase of dose，there was an increasing trend. CONCLUSIONS：The results
of this study suggest that in 2D cell model，EG not lead to chromosome breakage and DNA damage，but the long-term
administration and repeated administration in vivo of 3D cell model show that EG has a certain risk of DNA damage，so the
evaluation results of 3D HepaRG cell model are more similar to those of rats in vivo.
KEYWORDS Emodin-8-O-β-D-glucoside；Genotoxicity；Two-dimensional culture；Three-dimensional culture；Rat；Micronucleus
test

肝脏是人体最主要的代谢及解毒器官，药源性肝损 酶活性 ，从而更好地模拟药物体内代谢条件，提供更
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伤（Drug-induced liver injury，DILI）已成为药品监管机构 有价值的评价数据。
[1]
关注的重点 。随着近年来临床不断出现含蒽醌类成分 本研究同时利用体外 2D、3D 肝细胞培养模型和大
的中药致肝损伤的案例报道 ，学界对蒽醌的肝损伤机 鼠体内重复给药试验评价 EG 的遗传毒性，并比较 3 种
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制展开广泛研究。目前已有体外研究数据提示，蒽醌类 评价结果的差异，以期为 EG 的临床合理应用和毒性评
化合物存在遗传毒性风险和致突变作用 。课题组前期 价方法的选择提供参考。
[3]
研究中也证实大黄素可诱导正常人源肝细胞HepaRG染 1 材料
色体损伤和 DNA 断裂，在体外彗星及微核试验中呈阳 1.1 仪器
TM
TM
[4]
性结果 。蒽醌类的潜在遗传毒性，尤其是肝脏肿瘤发 悬 滴 GravityPlus 和 GravityTRAP 板（瑞 士 Ins-
生风险有待深入探索。 phero 公司）；VICTOR X5多功能酶标仪（英国Perkin El-
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（Emodin-8-O-β-D-gluco- mer 公司）；5180R 台式冷冻离心机（德国 Eppendorf 公
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side，EG）是大黄素在体内的主要代谢产物及形式 ，其 司）；NTS-1300 恒温振荡水槽（东京理化器械株式会
原型同样存在于大黄、何首乌、虎杖、决明子、冬凌草等 社）；DYCP-31F电泳仪（北京市六一仪器厂）；CX41三目
中药中且含量较高 。以何首乌为例，不同产地的何首 生物显微镜（日本 Olympus 公司）；eclipse 80i 荧光显微
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乌药材中EG的含量最高可达0.42％ 。文献报道EG可 镜（日本 Nikon 公司）；Komet 6.0 图像分析系统（英国安
有效提高中枢神经系统中乙酰胆碱含量，保护神经元损 道尔科技有限公司）。
伤，对阿尔茨海默病有一定改善，临床应用较为广泛。 1.2 药品与试剂
然而作为蒽醌类化合物，EG 含有的羟基蒽醌结构属于 EG（成 都 普 菲 德 生 物 技 术 有 限 公 司 ，批 号 ：
遗传毒性警示结构，该结构与DNA碱基类似，使其可嵌 17110201，纯 度 ：98.0％ ）；甲 磺 酸 乙 酯（ 批 号 ：
入 DNA 链并导致沙门氏菌（尤其是 TA1537 菌株）回复 141970611309162）、细胞松弛素B（批号：2989720）、二甲
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性突变 。EG 的遗传毒性风险不容小觑，但目前关于 基 亚 砜（DMSO，批 号 ：RNBG7476）均 购 自 美 国 Sig-
EG的毒性及致癌性风险缺乏充足的试验研究。 ma-Aldrich 公司；磷酸盐缓冲液（批号：AD19942268）、
啮齿类动物在毒性研究中独具优势，但是大量开展 RPMI 1640 培养基（批号：AE27856292）、Giemsa 染料
体内动物实验成本较高且不符合替代毒理学减少动物 （批号：SLBT6353）均购自美国 Hyclone 公司；胰蛋白酶
使用的理念，因此，使用体外模型进行药物毒性初筛及 消化液（批号：1974026）、胎牛血清（批号：1908121）均购
作用机制的初步研究十分必要。HepaRG细胞是从慢性 自美国 Gibco 公司；丝裂霉素 C（日本东京化成株式会
丙型肝炎病毒感染的肝癌患者体内非瘤组织分离而得 社，批号：AKZ8O-EF）；羧甲基纤维素钠（国药集团化学
的细胞株，能表现人肝细胞的大多数功能，其体外二维 试剂有限公司，批号：20170830）；彗星分析试剂盒（美国
（Two-dimension，2D）培养模型是常用的体外肝毒性评 Trevigen公司，批号：P191587）；Hanks平衡盐溶液（美国
价工具 。本课题组前期研究证实 HepaRG 细胞可在不 Corning公司，批号：28417007）；SYBR Gold 核酸凝胶染
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额外添加代谢活化剂的情况下较好地代谢药物，在了解 液（美国 Invitrogen 公司，批号：1987319）；吖啶橙（美国
以肝脏为靶器官遗传毒性方面独具优势 。但2D模型 Fluka公司，批号：930226）。
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缺乏细胞-细胞接触和细胞-胞外基质间的联系，长时间 1.3 细胞
培养会出现生长抑制现象 。利用悬滴技术构建的三 HepaRG人源肝细胞系购自美国Thermo Fisher Sci-
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维（Three-dimension，3D）HepaRG 多细胞聚球体模型则 entific公司，本试验所用细胞为第11～12代。
可长期培养，并能够保持较高的白蛋白分泌水平和肝药 1.4 动物

中国药房 2020年第31卷第1期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1 ·19 ·