Page 66 - 2019年10月第30卷第20期

4600型质谱仪（美国AB Sciex公司）；AB135-S型分析天
平（瑞士 Mettler Toledo 公司）；Centrifuge 5417R 型离心
机（德国 Eppendorf 公司）；Elix Essential 5 UV 型纯水仪
（德国Merck Millipore公司）；B8800型超声波清洗器（美
国Branson公司）；HYQ-2121A型涡旋混匀器（美国Crys-
tal 公司）；MTN-2800D 型氮吹浓缩装置（天津市泰斯特
仪器有限公司）。
1.2 药品与试剂
岩大戟内酯 B、岩大戟内酯 A 对照品均由本实验室
制备（经高效液相色谱法检测，纯度均大于98％）；甲醇、
乙腈为色谱纯，甲酸为质谱纯，其余试剂均为分析纯，水
为纯化水。
1.3 动物
清洁级健康SD大鼠，雄性，4～5周龄，体质量200～
220 g，购自辽宁长生生物技术有限公司，动物生产合格
证号：SCXK（辽）2015-0001。
2 方法与结果
2.1 岩大戟内酯B混悬液的制备
精密称取岩大戟内酯 B 对照品 300 mg，加 0.5％羧
甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液30 mL，摇匀，制成质量浓
度为10 mg/mL的混悬液，备用。
2.2 分组与给药
所有SD大鼠均适应性喂养1周后，随机分为空白组
和给药组，每组各8只。禁食、不禁水12 h后，给药组大
鼠单次灌胃“2.1”项下岩大戟内酯B混悬液（100 mg/kg，
剂量参照本课题组前期预实验结果确定），空白组大鼠
单次灌胃等体积0.5％ CMC-Na溶液。
2.3 样品采集与处理
2.3.1 粪便和尿液 随机选取空白组和给药组大鼠各4
只，分别收集其给药后 0～12、＞12～24、＞24～36 h 的
粪便以及给药后0～2、＞2～8、＞8～12、＞12～24、＞24～
36、＞36～48 h 的尿液，分别混合后于－20 ℃下冻存，
备用。
粪便样品采用超声提取法处理。将干燥后的粪便
样品研磨均匀，称取1.0 g，加甲醇20 mL超声（功率：280
W，频率：40 kHz）处理 30 min，然后以 3 500 r/min 离心
10 min；取上清液200 μL，在37 ℃下以氮气流吹干；残渣
加乙腈 200 μL 复溶，涡旋 30 s，以 14 000 r/min 离心 10
min，取上清液1 μL，进行UPLC-Q-TOF/MS分析。
尿液样品采用固相萃取法处理。将尿液样品于室
温下解冻，量取200 μL，以3 500 r/min离心10 min；取上
清液100 μL，经活化的Bond Elut C18 cartridges固相萃取
柱（填料量：500 mg，柱容量：3 mL；依次用甲醇2 mL、水
2 mL 反复洗脱 3 次以活化），依次用水 2 mL、甲醇 2 mL
洗脱，收集甲醇洗脱液，用氮气流吹干；残渣加甲醇 100
μL 复溶，涡旋 30 s，以 14 000 r/min 离心 10 min，取上清
液3 μL，进行UPLC-Q-TOF/MS分析。
2.3.2 血浆 选取空白组和给药组余下的大鼠各 4 只，
分别于给药后 1、2、8、12、24、36 h 自眼眶后静脉丛取血
中国药房 2019年第30卷第20期
0.5 mL，置于涂有肝素的离心管中，以 3 000 r/min 离心
10 min，分离血浆，混合后于－20 ℃冻存，备用。
血浆样品采用蛋白沉淀法处理。取血浆样品 200
μL，加甲醇 800 μL，涡旋 30 s，以 16 000 r/min 离心 10
min；取上清液，于 37 ℃下以氮气流吹干；残渣加乙腈
200 μL复溶，涡旋30 s，以14 000 r/min离心10 min，取上
清液3 μL，进行UPLC-Q-TOF/MS分析。
2.4 色谱与质谱条件
2.4.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18 （100 mm×
2.1 mm，1.7 μm）；流动相：水（含 0.1％甲酸，A 相）-乙腈
（含 0.1％甲酸，B 相），梯度洗脱（0～0.01 min，20％B；
0.01～1 min，20％B→30％B；1～7 min，30％B→50％B；
7～10 min，50％B→70％B；10～15 min，70％B→100％
B；15～16 min，100％B；16～16.1 min，100％B→20％B；
16.1～18 min，20％B）；柱温：40 ℃；流速：0.3 mL/min；进
样量：3 μL（尿液、血液）或 1 μL（粪便）。
2.4.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）；离子喷
雾电压：5.5 kV；离子源温度：600 ℃；去簇电压（DP）：
100 V；碰撞能（CE）：10 eV。雾化气、辅助气和气帘气：
氮气；雾化气压力：55 psi；辅助气压力：55 psi；气帘气压
力：35 psi。扫描模式：正离子；扫描范围：100～1 200
amu全扫描；累积扫描时间：250 ms。采用数据依赖采集
（IDA）模式进行分析，即对每个分析物中质谱响应超过
100 cps 的 15 个碎片离子进行子离子扫描，扫描范围为
100～1 200 amu，累积扫描时间为 100 ms。采用自动校
准系统（CDS）对质谱进行自动调谐和校正。
2.5 岩大戟内酯B的质谱裂解途径分析
称取岩大戟内酯 B 对照品适量，加入适量 0.5％
CMC-Na 溶液，制成质量浓度为 1.0 μg/mL 的对照品溶
液。取上述对照品溶液1 μL，按“2.4”项下色谱与质谱条
件进样分析，结果见图1。
2.0×10 6
cps 1.5×10 6 岩大戟内酯B
intensity， 1.0×10 6
5.0×10 0 5
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
t，min
A.提取离子流图
3 500 165.055 2
cps 3 000 295.169 3 303.195 9 331.190 1
2 500
intensity， 2 000 125.023 5 285.185 0 313.180 0
1 500
137.060 1
1 000
500 0 193.050 1 267.174 6
110 130 150 170 190 210 230 250 270 290 310 330
m/z
B.二级质谱图
图1 岩大戟内酯B的提取离子流图和二级质谱图
Fig 1 Extraction ion flow maps and MS/MS spectra
of jolkinolide B
由图 1 可见，岩大戟内酯 B 的保留时间（tR ）约为
+
11.8 min，其准分子离子峰[M+H] 为 m/z 331.190 1。其
碎片离子峰中，m/z 313.180 0、295.169 3推测是由准分子
离子依次脱去1分子H2O而得；m/z 303.195 9、285.185 0、
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