Page 34 - 2019年10月第30卷第20期

min；取上清液，与2，4-二硝基苯肼盐酸盐进行2次衍生 减少，上皮细胞变性和坏死现象明显改善，详见图1。
化反应；在 4 ℃下以 1 000 r/min 离心 15 min，取上清液，
加入等体积氯仿萃取，然后量取0.5 mL氯仿萃取层转移
至具盖顶空进样瓶中，备测。
TM
2.3.2 色谱条件 色谱柱：Restek Rxi -5MS 色谱柱
（30 m×250 µm）；程序升温（45 ℃保持 1 min；从 45 ℃以
20 ℃/min 升 至 260 ℃ ；从 260 ℃ 以 40 ℃/min 升 至
320 ℃；320 ℃保持2 min）；进样口温度：270 ℃；载气：氦
气；进样口温度：270 ℃；流速：1.0 mL/min；顶空进样。 A.空白组 B.模型组
2.3.3 质谱条件 采用电子轰击离子源；电子轰击能
量：70 eV；离子源温度：220 ℃；检测器温度：270 ℃；检
测电压：1 450 V；质谱图采集速率：20 spectra/s；质谱扫
描质量范围：38～550 Da。
2.3.4 方法学考察 参照前期研究方法 [12-13] ，取乙酸、丙
酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸标准品适量，以水配制成
不同浓度梯度的系列单一标准品溶液（质量浓度范围见
C.猴头菌多糖低剂量组 D.猴头菌多糖高剂量组
表1，临用现配），按“2.3.1”项下“与2，4-二硝基苯肼盐酸 图1 各组大鼠结肠黏膜上皮组织显微图（HE染色，×40）
盐进行 2 次衍生化反应……转移至具盖顶空进样瓶中” Fig 1 Micrograph of colonic mucosal epithelial tissue
的步骤进行预处理操作，再按“2.3.2”和“2.3.3”项下色谱 of rats in each group（HE staining，×40）
和质谱条件进样分析。以各待测SCFAs的信号强度（x）
3.1.2 大鼠结肠黏膜外观及溃疡评分 空白组大鼠结
为横坐标、质量浓度（ng/mL，y）为纵坐标进行线性回归，
肠黏膜完整，无明显充血或炎症现象；模型组大鼠结肠
得标准曲线方程，详见表1。结果显示，标准曲线方程的
黏膜充血，黏膜上皮明显糜烂；猴头菌多糖各剂量组大
2
R 均大于0.993，表明6种SCFAs在相应质量浓度范围内
鼠结肠黏膜仅见轻微充血，上皮皱褶基本恢复到无病变
线性关系良好。同时，进行精密度、检出限、稳定性、加
状态。与空白组比较，模型组大鼠结肠黏膜溃疡评分显
样回收率等考察，结果表明该方法可行，可用于大鼠结
著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，
肠内容物中SCFAs的含量测定。 猴头菌多糖各剂量组大鼠结肠黏膜溃疡评分均显著降
表1 6种SCFAs的标准曲线方程及质量浓度范围
低，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01），详见
Tab 1 Standard curve equations and concentration 表2。
ranges of 6 kinds of SCFAs 表2 各组大鼠结肠黏膜溃疡评分（x±±s）
待测SCFAs 标准曲线方程 质量浓度范围，ng/mL R 2 Tab 2 Ulcer score of colonic mucosal epithelium of
乙酸 y＝63.761 1x－2 822.89 40～5 000 0.995 0 rats in each group（x±±s）
丙酸 y＝117.095x－5 526.71 10～2 500 0.993 7
丁酸 y＝12 011.7x+786.932 0.5～1 000 0.998 0 组别 n 溃疡评分
异丁酸 y＝58 135.8x+4 316.42 0.25～500 0.998 4 空白组 10 0.2±0.3
戊酸 y＝6 751.54x+5 534.85 0.5～1 000 0.994 8 模型组 10 2.6±0.3 ＊＊
异戊酸 y＝38 058.4x+522.216 0.1～200 0.995 3 猴头菌多糖低剂量组 10 2.1±0.5 #
猴头菌多糖高剂量组 10 1.4±0.6 ##
2.4 统计学方法
注：与空白组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
##
#
＊＊
所有试验至少独立重复3次。采用GraphPad Prism 7
#
Note：vs. blank group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group， P＜0.05，
统计软件对试验数据进行处理。大鼠结肠溃疡评分以 ## P＜0.01
x±s 表示，SCFAs 含量以中位数（M）表示。多组间比较 3.2 大鼠结肠内容物中SCFAs的含量测定结果
采用单因素方差分析，组间两两比较采用 Tukey’s 或 各组大鼠结肠内容物中检出的SCFAs主要为乙酸、
Dunnett’s检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 丙酸、丁酸、戊酸，其中乙酸含量最高，丙酸、丁酸次之，
3 结果 戊酸含量最低。以乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊
3.1 猴头菌多糖对溃疡性结肠炎模型大鼠的改善作用 酸的含量之和计算 SCFAs 总量。结果，与空白组比较，
3.1.1 大鼠结肠黏膜上皮组织病理学变化 显微镜下 模型组大鼠肠道内容物中除丙酸外的5种SCFAs及SC-
可见，空白组大鼠结肠黏膜上皮组织完整，杯状细胞清 FAs 总量均显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.01），
晰；模型组大鼠结肠黏膜上皮组织和隐窝呈囊性扩张， 其中乙酸、丁酸含量分别下降 22.68％、88.74％；与模型
中性粒细胞和单核炎症细胞浸润明显；猴头菌多糖各剂 组比较，猴头菌多糖各剂量组大鼠肠道内容物中除丙酸
量组大鼠结肠黏膜上皮组织中单核炎症细胞渗透明显 外的5种SCFAs及SCFAs总量均显著升高，差异均有统

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