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床试验表明,猴头菌多糖及其制剂在治疗溃疡性结肠炎 g,购自吉林大学动物中心,动物生产许可证号:SCXK
中具有显著效果 ;已有药理学研究也显示,猴头菌多糖 (吉)2016-0001。大鼠均在 SPF 级动物室(室温为 20~
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可能通过调节免疫、抗氧化活性、抗炎等不同机制发挥 25 ℃,湿度为60%~70%,昼夜交替照明)适应性饲养1
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其治疗溃疡性结肠炎的作用 。然而,对猴头菌多糖的 周,期间给予普通饲料、饮水。本实验条件和方法已通
确切活性成分及作用机制尚缺乏深入的研究,一定程度 过长春中医药大学动物实验中心伦理委员会审查合格。
限制了其临床应用。 2 方法
本课题组前期制备了猴头菌多糖,并通过动物模型 2.1 猴头菌多糖提取物的制备
及细胞模型实验证实该多糖具有明显的抗溃疡性结肠 取猴头菌菌丝提取物粉末适量,加5倍量水(mL/g)
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炎活性 。中药多糖属于大分子化合物,一般情况下不 溶解,在50 ℃条件下持续搅拌12 h后,以3 000 r/min离
能经肠黏膜吸收入血,故其药理作用的发挥很可能与调 心 5 min,取上清液;重复上述操作2次,合并上清液,浓
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节肠道内细菌种群代谢及其代谢产物有关 。肠道菌群 缩;加入 95%乙醇直至乙醇终体积分数为 80%,进行沉
中某些特定细菌可将多糖降解为短链脂肪酸(SCFAs) 淀;过滤,取醇沉物,冷冻干燥,粉碎,即得猴头菌多糖提
这一最终代谢产物形式,主要包括乙酸、丙酸、丁酸等 , 取物(每 1 g 提取物相当于原菌丝提取物 5 g,收率约为
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这些 SCFAs 被吸收进入机体后可调节宿主的生理功能 20%)。
(如乙酸、丁酸等在维持上皮屏障功能、调节上皮细胞增 2.2 猴头菌多糖对溃疡性结肠炎模型大鼠的改善作用
殖、调节免疫应答、预防结直肠癌等方面发挥了重要作 考察
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用 )。然而,猴头菌多糖抗溃疡性结肠炎的活性作用机 2.2.1 分组及给药 取 SD 大鼠 40 只,禁食不禁水 24 h
制是否与其调节肠道 SCFAs 含量有关尚未见相关研究 后,随机分为空白组、模型组和猴头菌多糖低、高剂量组
报道。基于此,本研究通过乙酸灌肠诱导建立溃疡性结 (0.5、1.0 g/kg,以猴头菌多糖提取物计算;剂量根据人体
肠炎大鼠模型,考察猴头菌多糖的抗炎活性;同时,建立 用药剂量按文献方法 折算后制定),每组 10 只。各组
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大鼠肠道内容物中SCFAs的含量测定方法,以探讨猴头 大鼠腹腔注射戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉,然后将直径
菌多糖治疗溃疡性结肠炎与其影响肠道内 SCFAs 含量 3 mm 的灌肠硅胶管经其肛门缓慢插入约 8 cm,用注射
的相关性,为阐明猴头菌多糖是否通过调节肠道菌群代 器缓慢注入生理盐水(空白组)或10%乙酸溶液(模型组
谢物 SCFAs 的含量来发挥抗溃疡性结肠炎的作用机制 和给药组)1.5 mL,计时 10~15 s 后,用生理盐水灌肠冲
提供实验基础。 洗。大鼠清醒后常规饲养,次日起给药组大鼠灌胃猴头
1 材料 菌多糖提取物溶液(以水为溶剂配制成 0.1、0.2 g/mL 的
1.1 仪器 药液,灌胃前混匀),空白组和模型组大鼠灌胃相应体积
HT GC-TOFMS 型气相色谱-飞行时间质谱联用系 的水,连续给药10 d。
统(美国Pegasus HT公司);TG18G型台式高速冷冻离心 2.2.2 猴头菌多糖对大鼠结肠组织病理学变化的影响
机(美国Beckman公司);BT 125D型电子天平(德国Sar- 观察 给药完毕后次日,各组大鼠在禁食不禁水 12 h
torius仪器有限公司);PY-45型恒温振荡器(中国智城仪 后,称定体质量,按“2.2.1”项下方法麻醉,迅速剖腹,取
器公司);Milli-Q 型超纯水机(法国 Millipore 公司); 其部分结肠组织,用 4%甲醛固定 24 h 以上,然后以 HE
CX31型显微镜(日本Olympus公司)。 染色,在显微镜下观察结肠黏膜上皮组织病理学变化。
1.2 药品与试剂 2.2.3 猴 头 菌 多 糖 对 大 鼠 溃 疡 性 结 肠 炎 的 疗 效 评
猴头菌菌丝提取物(山西康欣药业有限公司,批号: 价 取大鼠部分结肠段,用生理盐水清洗后,以肉眼观
2018001);乙酸标准品(批号:71251,纯度:>99.5%)、丙 察其黏膜病变情况并进行评分,以评价疗效。溃疡评分
酸标准品(批号:402907,纯度:>99.5%)、丁酸标准品 标准:结肠段未见损伤、形态完整,记0分;结肠段充血,
(批号:19215,纯度:>99.5%)、异丁酸标准品(批号: 记 1 分;结肠段溃疡面积小于总肠段面积的 25%,记 2
58360,纯度:>99.5%)、戊酸标准品(批号:75054,纯 分;结肠段溃疡面积占总肠段面积的 25%~50%,记 3
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度:>99.5%)、异戊酸标准品(批号:78651,纯度:> 分;结肠段溃疡面积大于总肠段面积的50%,记4分 。
99.5%)、2,4-二硝基苯肼盐酸盐溶液(衍生化试剂,批 2.3 大鼠结肠内容物中SCFAs的含量测定
号:18189,浓度:0.005 mol/L)均购自美国Sigma公司;戊 采用气相色谱(GC)-质谱(MS)联用法测定 SCFAs
巴 比 妥 钠(成 都 思 天 德 生 物 科 技 有 限 公 司 ,批 号 : 含量。
57-33-0);苏木素-伊红(HE)试剂(北京索莱宝科技有限 2.3.1 样品预处理 在进行大鼠解剖的过程中,各组取
公司,批号:G1120);甲醇、氢氧化钠为色谱纯,其余试剂 8 只大鼠收集其结肠内容物 1~2 粒,液氮冻存,备用。
均为分析纯;生理盐水为本课题组自制,水为超纯水。 取肠道内容物,冰浴中解冻(减少待测成分的降解),参
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1.3 动物 照文献方法 操作,取样约 50 mg,加入 1 mol/L 的氢氧
清洁级 SD 大鼠 40 只,雌雄各半,体质量 200~220 化钠溶液 300 μL 匀浆后,在 4 ℃下以 500 r/min 离心 20
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