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床试验表明，猴头菌多糖及其制剂在治疗溃疡性结肠炎                            g，购自吉林大学动物中心，动物生产许可证号：SCXK
        中具有显著效果 ；已有药理学研究也显示，猴头菌多糖                          （吉）2016-0001。大鼠均在 SPF 级动物室（室温为 20～
                       [3]
        可能通过调节免疫、抗氧化活性、抗炎等不同机制发挥                            25 ℃，湿度为60％～70％，昼夜交替照明）适应性饲养1
                                 [4]
        其治疗溃疡性结肠炎的作用 。然而，对猴头菌多糖的                            周，期间给予普通饲料、饮水。本实验条件和方法已通
        确切活性成分及作用机制尚缺乏深入的研究，一定程度                            过长春中医药大学动物实验中心伦理委员会审查合格。
        限制了其临床应用。                                           2 方法
            本课题组前期制备了猴头菌多糖，并通过动物模型                          2.1 猴头菌多糖提取物的制备
        及细胞模型实验证实该多糖具有明显的抗溃疡性结肠                                 取猴头菌菌丝提取物粉末适量，加5倍量水（mL/g）
               [5]
        炎活性 。中药多糖属于大分子化合物，一般情况下不                            溶解，在50 ℃条件下持续搅拌12 h后，以3 000 r/min离
        能经肠黏膜吸收入血，故其药理作用的发挥很可能与调                            心 5 min，取上清液；重复上述操作2次，合并上清液，浓
                                             [6]
        节肠道内细菌种群代谢及其代谢产物有关 。肠道菌群                            缩；加入 95％乙醇直至乙醇终体积分数为 80％，进行沉
        中某些特定细菌可将多糖降解为短链脂肪酸（SCFAs）                          淀；过滤，取醇沉物，冷冻干燥，粉碎，即得猴头菌多糖提
        这一最终代谢产物形式，主要包括乙酸、丙酸、丁酸等 ，                          取物（每 1 g 提取物相当于原菌丝提取物 5 g，收率约为
                                                      [7]
        这些 SCFAs 被吸收进入机体后可调节宿主的生理功能                         20％）。
        （如乙酸、丁酸等在维持上皮屏障功能、调节上皮细胞增                           2.2  猴头菌多糖对溃疡性结肠炎模型大鼠的改善作用
        殖、调节免疫应答、预防结直肠癌等方面发挥了重要作                            考察
          [8]
        用 ）。然而，猴头菌多糖抗溃疡性结肠炎的活性作用机                           2.2.1  分组及给药      取 SD 大鼠 40 只，禁食不禁水 24 h
        制是否与其调节肠道 SCFAs 含量有关尚未见相关研究                         后，随机分为空白组、模型组和猴头菌多糖低、高剂量组
        报道。基于此，本研究通过乙酸灌肠诱导建立溃疡性结                           （0.5、1.0 g/kg，以猴头菌多糖提取物计算；剂量根据人体
        肠炎大鼠模型，考察猴头菌多糖的抗炎活性；同时，建立                           用药剂量按文献方法 折算后制定），每组 10 只。各组
                                                                               [9]
        大鼠肠道内容物中SCFAs的含量测定方法，以探讨猴头                          大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（30 mg/kg）麻醉，然后将直径
        菌多糖治疗溃疡性结肠炎与其影响肠道内 SCFAs 含量                         3 mm 的灌肠硅胶管经其肛门缓慢插入约 8 cm，用注射
        的相关性，为阐明猴头菌多糖是否通过调节肠道菌群代                            器缓慢注入生理盐水（空白组）或10％乙酸溶液（模型组
        谢物 SCFAs 的含量来发挥抗溃疡性结肠炎的作用机制                         和给药组）1.5 mL，计时 10～15 s 后，用生理盐水灌肠冲
        提供实验基础。                                             洗。大鼠清醒后常规饲养，次日起给药组大鼠灌胃猴头
        1 材料                                                菌多糖提取物溶液（以水为溶剂配制成 0.1、0.2 g/mL 的
        1.1  仪器                                             药液，灌胃前混匀），空白组和模型组大鼠灌胃相应体积
             HT GC-TOFMS 型气相色谱-飞行时间质谱联用系                    的水，连续给药10 d。
        统（美国Pegasus HT公司）；TG18G型台式高速冷冻离心                    2.2.2  猴头菌多糖对大鼠结肠组织病理学变化的影响
        机（美国Beckman公司）；BT 125D型电子天平（德国Sar-                  观察    给药完毕后次日，各组大鼠在禁食不禁水 12 h
        torius仪器有限公司）；PY-45型恒温振荡器（中国智城仪                     后，称定体质量，按“2.2.1”项下方法麻醉，迅速剖腹，取
        器公司）；Milli-Q 型超纯水机（法国 Millipore 公司）；                其部分结肠组织，用 4％甲醛固定 24 h 以上，然后以 HE
        CX31型显微镜（日本Olympus公司）。                              染色，在显微镜下观察结肠黏膜上皮组织病理学变化。
        1.2  药品与试剂                                          2.2.3  猴 头 菌 多 糖 对 大 鼠 溃 疡 性 结 肠 炎 的 疗 效 评
            猴头菌菌丝提取物（山西康欣药业有限公司，批号：                         价   取大鼠部分结肠段，用生理盐水清洗后，以肉眼观
        2018001）；乙酸标准品（批号：71251，纯度：＞99.5％）、丙                察其黏膜病变情况并进行评分，以评价疗效。溃疡评分
        酸标准品（批号：402907，纯度：＞99.5％）、丁酸标准品                     标准：结肠段未见损伤、形态完整，记0分；结肠段充血，
        （批号：19215，纯度：＞99.5％）、异丁酸标准品（批号：                     记 1 分；结肠段溃疡面积小于总肠段面积的 25％，记 2
        58360，纯度：＞99.5％）、戊酸标准品（批号：75054，纯                   分；结肠段溃疡面积占总肠段面积的 25％～50％，记 3
                                                                                                        [10]
        度：＞99.5％）、异戊酸标准品（批号：78651，纯度：＞                      分；结肠段溃疡面积大于总肠段面积的50％，记4分 。
        99.5％）、2，4-二硝基苯肼盐酸盐溶液（衍生化试剂，批                       2.3 大鼠结肠内容物中SCFAs的含量测定
        号：18189，浓度：0.005 mol/L）均购自美国Sigma公司；戊                   采用气相色谱（GC）-质谱（MS）联用法测定 SCFAs
        巴 比 妥 钠（成 都 思 天 德 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：            含量。
        57-33-0）；苏木素-伊红（HE）试剂（北京索莱宝科技有限                     2.3.1  样品预处理      在进行大鼠解剖的过程中，各组取
        公司，批号：G1120）；甲醇、氢氧化钠为色谱纯，其余试剂                       8 只大鼠收集其结肠内容物 1～2 粒，液氮冻存，备用。
        均为分析纯；生理盐水为本课题组自制，水为超纯水。                            取肠道内容物，冰浴中解冻（减少待测成分的降解），参
                                                                      [11]
        1.3  动物                                             照文献方法 操作，取样约 50 mg，加入 1 mol/L 的氢氧
            清洁级 SD 大鼠 40 只，雌雄各半，体质量 200～220                 化钠溶液 300 μL 匀浆后，在 4 ℃下以 500 r/min 离心 20


        ·2764  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 20                                中国药房    2019年第30卷第20期
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