Page 41 - 2019年8月第30卷第16期

（2）溶液的制备：①取大黄素、大黄酚对照品各适 素、大黄酚的定量限分别为 0.288、0.216 μg/mL，检测限
量，精密称定，加甲醇溶解，制得质量浓度分别为 12、24 分别为0.096、0.072 μg/mL。
µg/mL的混合对照品溶液。②取JYP样品适量，粉碎，精 （5）精密度、重复性、稳定性、回收率考察：①取
密称定 1.5 g，加入甲醇 25 mL，称定质量，加热回流 30 “2.1.2（2）”项下供试品溶液适量，按“2.1.2（1）”项下色谱
min，放冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过；精密量 条件连续进样测定6次，考察方法精密度。②取同一批
取续滤液 5 mL，挥去溶剂，残渣加 8％盐酸溶液 10 mL， JYP样品，按“2.1.2（2）”项下方法平行制备6份供试品溶
超声（功率：250 W，频率：40 kHz）处理 2 min，再加三氯 液，进样测定，考察重复性。③取上述重复性试验的同
甲烷 10 mL，加热回流 1 h；放冷，置分液漏斗中，用三氯 一份供试品溶液，分别于室温下放置 0、1、2、3、6、9、12、
甲烷振摇萃取 3 次，每次 10 mL；合并三氯甲烷萃取液， 18、24 h时进样测定，考察样品稳定性。④取JYP样品4
减压回收溶剂至干，残渣加甲醇复溶并定容至10 mL量 份，分别由两位研究者按前述方法制备供试品溶液，以
瓶中，摇匀，即得供试品溶液。③取缺大黄阴性对照样 同一仪器进样测定，考察中间精密度。⑤取9份已知含
品 1.5 g，精密称定，按上述供试品溶液制备方法制得阴 量的JYP样品0.75 g，精密称定，分别按质量比1∶0.5、1∶1、
性对照溶液。 1 ∶ 1.5加入大黄素、大黄酚对照品适量，再按前述方法制
（3）专属性试验：精密吸取上述对照品溶液、供试品 得低、中、高质量浓度样品溶液，进样测定，并计算加样
溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.1.2（1）”项下色谱条件 回收率。结果，精密度、重复性、稳定性试验中大黄酚、
进样测定，记录色谱图。结果，对照品溶液和供试品溶 大黄素含量（以标准曲线法计算）的 RSD 均小于 3.0％；
液在相同位置有同一色谱峰，且阴性对照溶液无干扰， 大黄素低、中、高质量浓度样品溶液的加样回收率分别
表明本方法专属性良好，详见图2。 为 99.78％ 、98.91％ 、97.18％ ，RSD 分 别 为 1.55％ 、

75 000 2 75 000 0.76％、0.51％；大黄酚低、中、高质量浓度样品溶液的加
2
50 000
U，V μ 25 000 1 U，V μ 25 000 1 样回收率分别为 98.29％、102.33％、98.94％，RSD 分别
50 000
0 0 为1.02％、0.32％、0.70％。
5 10 15 20 25 5 10 15 20 25
t，min t，min （6）样品含量测定：取 JYP 样品 1.5 g，平行 3 份，按
A.对照品溶液 B.供试品溶液
“2.1.2（2）”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.2（1）”项
75 000 下色谱条件进样测定，记录峰面积，按标准曲线法计算
U，V μ 50 000 得大黄素和大黄酚的含量分别为 0.341、0.770 mg/g，两
25 000
0
5 10 15 20 25 者总含量为1.111 mg/g；按“2.1.1（6）”项下公式计算得转
t，min 移率为 97.90％[其中，按 2015 年版《中国药典》（一部）
C.阴性对照溶液
[10]
注：1.大黄素；2.大黄酚 “大黄”项下总蒽醌含量测定方法 测得药材中大黄素
Note：1. emodin；2. chrysophanol 和大黄酚的总含量为 6.322 mg/g，每克 JYP 中含大黄药
图2 高效液相色谱图（大黄） 材0.179 5 g]。
Fig 2 HPLC chromatograms（Rheum palmatum） 2.2 JYP对CRF模型大鼠钙磷代谢和炎症因子等指标

（4）线性关系以及定量限和检测限考察：取大黄素、 的影响
大黄酚对照品各适量，精密称定，用甲醇溶解，制成质量 2.2.1 分组 所有大鼠均适应性喂养 7 d，然后随机分
浓度分别为 0.118 4、0.180 5 mg/mL 的单一贮备液。精 为正常组、模型组、尿毒清组以及JYP低、中、高剂量组，
密吸取上述大黄素贮备液 0.25、0.50、1.00、1.25、1.50、 每组10只，雌雄各半。
1.75 mL，大黄酚贮备液 0.35、0.70、1.40、1.75、2.10、2.45 2.2.2 给药剂量确定 按照《中药药理研究方法学》中
[12]
mL，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得大 的“体表面积比换算法” 换算，分别以尿毒清 1.80 g/kg
黄 素 质 量 浓 度 分 别 为 2.960、5.920、11.840、14.800、 （按成人临床等效剂量的 1 倍换算而得）以及 JYP 1.71、
17.760、20.720 μg/mL，大黄酚质量浓度分别为 6.318、 3.43、6.85 g/kg（分别按成人临床等效剂量的 1/4、1/2、1
12.635、25.270、31.588、37.905、44.223 μg/mL 的混合线 倍换算而得）作为后续实验的给药剂量。
性对照品溶液，按“2.1.2（1）”项下色谱条件进样测定，记 2.2.3 模型复制 采用5/6肾切除方法复制大鼠CRF模
录色谱图。以待测物质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰 型 [13-14] ：腹腔注射10％水合氯醛溶液进行麻醉，从右背部
面积（y）为纵坐标进行线性回归，得大黄素、大黄酚的 切开腹腔，用静脉夹夹住肾蒂后，使用高频电刀切除2/3
回归方程分别为 y＝43 557.7x－29 724.5（r＝0.999 1）、 右肾，止血后复位肾脏；2周后同法切除左肾。正常组大
y＝59 374.6x－70 701.2（r＝0.999 6），表明大黄素、大黄 鼠仅以相同步骤打开腹腔，暴露肾脏后复位，避免牵拉
酚 检 测 质 量 浓 度 线 性 范 围 分 别 为 2.960～20.720、 肾脏。造模4个月后，正常组和模型组大鼠均灌胃相应
6.318～44.223 μg/mL。另以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 测得大黄 体积水，各给药组大鼠灌胃相应药物（20 mL/kg，均以水

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