Page 40 - 2019年8月第30卷第16期

建成生物工程研究所，批号分别为20171022、20170913、 （4）线性关系以及定量限和检测限考察：取黄芪甲
20171024、20171027）；乙腈、甲醇、磷酸均为色谱纯，其 苷对照品适量，精密称定，用甲醇溶解，制成质量浓度为
余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 0.779 1 mg/mL 的贮备液。精密吸取上述贮备液 0.07、
1.3 动物 0.14、0.28、0.35、0.42、0.49 mL，置于1 mL量瓶中，加甲醇
SPF 级 SD 大鼠，雌雄各半，8 周龄，体质量 180～ 定容，摇匀，得质量浓度分别为54.537、109.074、218.148、
220 g，由广东省医学实验动物中心提供，动物生产许可 272.685、327.222、381.759 μg/mL 的线性对照品溶液，按
证号：SCXK（粤）2013-0002。 “2.1.1（1）”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以质
2 方法与结果 量浓度（μg/mL）的自然对数（x）为横坐标、峰面积的自
2.1 健脾益肾丸指标成分的含量测定 然对数（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y＝
2.1.1 黄芪甲苷含量测定 由于 JYP 中的君药黄芪采 1.225 4x+8.057 3（r＝0.999 7），表明黄芪甲苷检测质量
用水煎煮提取，故针对此工艺路线，本研究建立了黄芪 浓度线性范围为 54.537～381.759 μg/mL。另以信噪比
[9]
所含指标成分黄芪甲苷 的含量测定方法，以保证其成 10∶1、3∶1测得定量限、检测限分别为0.010、0.003 μg/mL。
品质量的稳定均一。 （5）精密度、重复性、稳定性、回收率考察：①取
（1）色谱条件：色谱柱为 Agilent Zorbax SB-C18 （250 “2.1.1（2）”项下供试品溶液适量，按“2.1.1（1）”项下色谱
mm×4.6 mm，5 µm），检测器为蒸发光散射检测器（漂移 条件连续进样测定6次，考察方法精密度。②取同一批
管温度：55 ℃，氮气压力：360 kPa），流动相为乙腈-水 JYP样品适量，按“2.1.1（2）”项下方法平行制备6份供试
（36 ∶ 64，V/V），柱温为 30 ℃，流速为 1.0 mL/min，进样量 品溶液，进样测定，考察重复性。③取上述重复性试验
为20 μL。 的同一份供试品溶液，分别于室温下放置 0、3、6、9、12、
（2）溶液的制备：①取黄芪甲苷对照品适量，精密称 18 h时进样测定，考察样品稳定性。④取JYP样品4份，
定，加甲醇溶解，制成质量浓度为0.2 mg/mL的对照品溶 分别由两位研究者按前述方法制备供试品溶液，以同一
液。②取JYP样品适量，粉碎，精密称定10 g，加入甲醇 仪器进样测定，考察中间精密度。⑤取9份已知含量的
50 mL，加热回流 1 h，滤过，残渣用甲醇洗涤 3 次，每次 JYP样品5 g，精密称定，分别按质量比1 ∶ 0.5、1 ∶ 1、1 ∶ 1.5
20 mL；合并洗涤液，蒸干，残渣用水50 mL溶解，用经水 加入黄芪甲苷对照品适量，再按前述方法制得低、中、高
饱和的正丁醇振摇萃取4次，每次40 mL；合并正丁醇萃 质量浓度样品溶液，进样测定，并计算加样回收率。结
取液，用经正丁醇饱和的水洗涤 3 次，每次 40 mL，再用 果，精密度、重复性、稳定性试验中黄芪甲苷含量（以标准
1％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次40 mL；合并洗涤液，蒸 曲线法计算）的RSD均小于2.0％；低、中、高质量浓度样
干，残渣用甲醇溶解并定容至 5 mL 量瓶中，摇匀，即得 品溶液的平均加样回收率分别为 101.80％、100.37％、
供试品溶液。③取缺黄芪阴性对照样品 10 g，精密称 101.51％，RSD分别为2.13％、2.08％、1.23％。
定，按上述供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。 （6）样品含量测定：取 JYP 样品 10 g，平行 3 份，按
（3）专属性试验：精密吸取上述对照品溶液、供试品 “2.1.1（2）”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1（1）”项
溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.1.1（1）”项下色谱条件 下色谱条件进样测定，记录峰面积，按标准曲线法计算
进样测定，记录色谱图。结果，对照品溶液和供试品溶 得黄芪甲苷的平均含量为0.102 mg/g；按公式[转移率＝
液在相同位置有同一色谱峰，且阴性对照溶液无干扰， JYP样品中黄芪甲苷的含量/（黄芪药材中黄芪甲苷的含
表明本方法专属性良好，详见图1。 量×每克JYP中黄芪药材的质量）×100％]计算得转移率
300 000 1 300 000 为 47.13％[其中，按 2015 年版《中国药典》（一部）“黄
U，V μ 200 000 U，V μ 200 000 1 芪”项下黄芪甲苷含量测定方法 测得黄芪药材中黄
[10]
100 000
100 000
0 0 芪甲苷的含量为 0.402 mg/g，每克 JYP 中含黄芪药材
5 10 15 5 10 15
t，min t，min 0.538 4 g]。
A.对照品溶液 B.供试品溶液 2.1.2 大黄素和大黄酚含量测定 由于JYP中的大黄、
300 000 白术[2015年版《中国药典》（一部）中无含量测定指标成
U，V μ 200 000 分]、豆蔻（含量测定指标成分桉油精具有挥发性，稳定
100 000
0 性欠佳）等药味均经粉碎后入药，故针对此工艺路线，本
5 10 15
[11]
t，min 研究建立了大黄所含指标成分大黄素、大黄酚 的含量
C.阴性对照溶液
注：1.黄芪甲苷 测定方法，以保证其成品质量的稳定均一。
Note：1. astragaloside Ⅳ （1）色谱条件：色谱柱为 Agilent TC C18 （250 mm×
图1 高效液相色谱图（黄芪） 4.6 mm，5 µm），检测器为 PDA 检测器，检测波长为 254
Fig 1 HPLC chromatograms（Astragalus membrana- nm，流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液（75 ∶ 25，V/V），柱温为
ceus） 25 ℃，流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL。

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