Page 84 - 2019年1月第30卷第2期
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0.30 7 2.6 精密度试验
0.25 精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液 10 μL,按
0.20
AU 0.15 “2.1”项下色谱条件连续进样测定6次,记录峰面积。结
0.10 3 5 果,儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅
0.05 1 2 4 6
0 素、槲皮素峰面积的 RSD 值分别为 0.82%、0.64%、
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 1.22%、0.90%、0.38%、1.71%、0.84%(n=6),表明仪器
t,min
A.混合对照品溶液 精密度良好。
2.50 2.7 稳定性试验
2.00 取“2.2.2”项下供试品溶液(批号:20160130)10 μL,
3
1.50 4
AU 2 分别于室温下放置 0、2、4、12、24、48 h 时按“2.1”项下
1.00
色谱条件进样测定,记录峰面积。结果,儿茶素、栀子
0.50 1 5 6 7
0 苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素、槲皮素的峰面
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 积RSD值分别为0.67%、0.89%、1.00%、1.31%、0.51%、
t,min
B.供试品溶液 0.29%、1.90%(n=6),表明供试品溶液在室温下放置
48 h内稳定性良好。
2.50
2.8 重复性试验
2.00
1.50 精密称取同一批森登-4汤散样品(批号:20160130)
AU
1.00 适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,共 6 份,再按
0.50 “2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算样品平
0 均含量。结果,儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
t,min 芦丁、杨梅素、槲皮素峰面积 RSD 值分别为 0.16%、
C.阴性对照品溶液
注:1.儿茶素;2.栀子苷;3.二氢杨梅素;4.花旗松素;5.芦丁;6.杨梅素;7.槲皮素 0.18%、0.12%、0.007 5%、0.005 2%、0.004 8%、0.006 3%
Note:1. catechin;2. jasminoidin;3. dihydromyricetin;4. texifolin;5. rutin; (n=6),含量的平均值分别为1.592、3.978、3.866、0.367 8、
6. myricetin;7. quercetin 0.125 4、0.543 3、0.187 6 mg/g,表明本方法重复性良好。
图1 高效液相色谱图 2.9 加样回收率试验
Fig 1 HPLC chromatograms 取森登-4汤散样品(批号:20160130)适量,共6份,
6次,取平均值。以待测成分质量浓度(x,μg/mL)为横坐 每份约 1.000 0 g,共 6 份,精密称定,分别置于 25.00 mL
标、峰面积(y)为纵坐标进行线性回归,线性关系考察 量瓶中,分别精密加入儿茶素(0.358 5 mg/mL)、栀子苷
结果详见表1。 (0.215 5 mg/mL)、二氢杨梅素(0.545 0 mg/mL)、花旗松
表1 线性关系考察结果(n=6) 素(0.651 5 mg/mL)、芦 丁(0.265 5 mg/mL)、杨 梅 素
Tab 1 Results of linear relationship investigation(n=6) (0.375 3 mg/mL)和槲皮素(0.338 0 mg/mL)单一对照品
待测成分 回归方程 r 线性范围,μg/mL 溶液,其中低浓度组加1.00 mL、中浓度组加2.00 mL、高
7
儿茶素 y=1×10 x-1.013×10 3 0.999 6 8.590~2 290 浓度组加 3.00 mL。按“2.2.2”项下方法制备供试品溶
栀子苷 y=1×10 x+2.552×10 5 0.999 7 10.56~3 901 液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计
7
7
二氢杨梅素 y=2×10 x+4.845×10 5 0.999 2 13.00~3 958 算加样回收率,详见表2。
7
花旗松素 y=2×10 x-1.197×10 5 0.999 9 8.815~564.2
7
芦丁 y=1×10 x-6.300×10 4 0.999 7 4.030~257.8 2.10 样品含量测定
杨梅素 y=2×10 x+2.956×10 5 0.999 1 8.130~750.5 取 6 批样品各适量,分别按“2.2.2”项下方法制备供
7
7
槲皮素 y=3×10 x-1.417×10 5 0.999 4 7.075~454.2
试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,并行测定
结果表明,7种成分在一定浓度范围内,其质量浓度 3次,记录峰面积并计算样品平均含量,测定结果见表3。
与峰面积之间具有良好的线性关系。 3 讨论
2.5 检测限与定量限考察 3.1 供试品溶液制备方法的选择
精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,倍比稀 本试验分别用 95%乙醇回流提取法(回流提取 2
释,按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次,记录峰面 次,每次 1.5 h)和超声提取法提取(功率:300 W,频率:
积。当信噪比为3 ∶ 1时得检测限;当信噪比10 ∶ 1时得定 50 kHz,超声2次,每次20 min)供试品中7种成分,对所
量限。结果,儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦 得到的提取物的HPLC谱图做了比较,从中选择供试品
丁、杨梅素、槲皮素的检测限分别为 0.429 5、0.264 0、 提取方法。结果发现,采用超声提取法制备供试品溶液
0.325 0、0.220 4、0.201 5、0.203 2、0.176 9 μg/mL,定量限 的 HPLC 谱图中 7 种成分的干扰成分少,色谱峰形和分
分别为 1.030、1.321、1.302、1.397、1.637、0.813 0、0.707 5 离度均优于乙醇回流提取方法所提取物。因此,本试验
μg/mL。 选择超声提取法制备供试品溶液。
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