Page 45 - 2019年1月第30卷第2期
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（CCA），沿CCA向前分离右颈外动脉（ECA），结扎ECA                      部，用夹子将灌流管固定；在右心耳剪一小口用于灌流
        和 CCA 向心端，然后向颅底方向分离颈内动脉（ICA），                       液流出，先用 100 mL 生理盐水快速灌流，然后使用 4％
        在颅底小心分离出翼腭动脉（PPA）并结扎其根部，仅保                          中性多聚甲醛200 mL缓慢灌注。灌流完毕后迅速断头
        留 ICA 入颅底主干部分；然后在距远心端离结扎处约 1                        取脑，去除嗅球及小脑，置于 10％中性缓冲福尔马林液
        cm 处暂时夹闭 ICA，在右 CCA 结扎处和夹闭处之间剪                      中继续固定 24 h。然后在冠状位视交叉前后切取厚度
        一小口，插入导管，让少量血液流入导管并放置10 min，                        约为 2 mm 的脑组织块，常规脱水，石蜡包埋，连续冠状
        使之形成小的栓子；除假手术组大鼠注射等体积生理盐水                           切片（厚度为 4～5 μm）。将脑组织切片置于 37 ℃温箱
        外，其余组大鼠均将此栓子和复合诱导剂（1.25 mmol/L                      内过夜烤干，再进行苏木精-伊红（HE）染色。在光镜下
        ADP溶液、1.25万单位/L凝血酶溶液、1 g/L肾上腺素溶液                    选取右脑组织（梗死侧）3 个视野观察皮质的病理学变
                                                                                              2
                              [16]
        以体积比100∶200∶5混合 ）按0.1 mL/100 g（体质量）缓                化，并在40×10倍镜下计数单位面积（cm）中细胞膜和核
                                                            膜均完整的存活神经细胞数。
        慢注射入 ICA，注射时打开微动脉夹使血管再通，注射
                                                            2.5 统计学方法
        完毕后再夹闭，以复制实验性脑血栓模型。
                                                                采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。实验数
        2.2 大鼠脑组织水肿程度及脑血管通透性考察
                                                            据均以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析
            各组取8只大鼠，参考文献[17]方法，在注射生理盐
                                                           （One-Way ANOVA），组间两两比较采用最小显著差检
        水或复合血栓诱导剂 10 min 后，再从 CCA 的插入导管
                                                            验（LSD 检验）；不符合正态性或方差不齐的数据，采用
        按 0.5 mL/100 g（体质量）缓慢注入 0.2％EB 溶液。10
                                                            Mann-Whitney 检验比较。P＜0.05 表示差异有统计学
        min 后迅速断头取脑，用生理盐水洗去脑组织残血并以
                                                            意义。
        滤纸吸干，将大脑分成左右两半分别称定湿质量，并计                            3 结果
        算右脑/左脑的湿质量比，以考察梗死侧脑组织水肿程
                                                            3.1  BV涂膜剂对大鼠脑组织水肿程度和脑血管通透性
        度。
                                                            的影响
            将左右半脑组织分别置于匀浆器中，按5 mL/g加入
                                                                肉眼观察可见，假手术组大鼠脑组织无明显蓝染；
        0.5％Na2SO4溶液-丙酮混合液（体积比 3 ∶ 7），制成匀浆
                                                            模型组大鼠右侧脑组织有明显蓝染，染色部分涉及到整
        液。将样本匀浆液置于加盖试管中，密封，于4 ℃静置1
                                                            个脑半球，包括皮层大部分区域和尾壳核区，表明该侧
        h；然后以 4 000 r/min 离心 10 min，取上清液，以空白匀
                                                            脑组织发生梗死；尼莫地平组和 BV 涂膜剂各剂量组大
        浆液调零，在 620 nm 波长下测定吸光度（A）。另取 EB                     鼠右侧脑组织部分蓝染，但面积明显缩小。各组大鼠注
        适量，以 0.5％Na2SO4溶液-丙酮混合液（体积比 3 ∶ 7）制                 射EB后脑组织染色图见图1，大鼠脑组织冠状切片各部
        成 0.4、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0、4.8、5.6、6.4、7.8、8.0 μg/mL  位解剖示意图见图 2（注：图 1 中箭头处为蓝色；图 2 中
        的系列溶液，分别在 620 nm 波长处测定 A；以 EB 质量                    CX-1 为额顶骨皮层运动区，CX-2 为上侧部分额顶骨躯
        浓度（c，μg/mL）为横坐标、A 为纵坐标进行线性回归分                       体感觉区，CX-3为下侧部分额顶骨躯体感觉区，CP-m为
        析，得线性标准曲线A＝0.105 3c－0.005 4（r＝0.999 6）。             中部尾壳核区，CP-1为侧边尾壳核区）。
        将大鼠脑组织样本匀浆上清液所测 A 值代入该标准曲
        线，计算大鼠左右半脑 EB 含量，以考察大鼠脑血管通
        透性。
        2.3  大鼠血液流变学和凝血功能指标检测
            各组剩余8只大鼠在注射生理盐水或复合血栓诱导
                                                                A.假手术组             B.模型组        C.尼莫地平组
        剂后缝合，单笼饲养。24 h后，按0.35 mg/kg（体质量）腹
        腔注射 10％水合氯醛溶液麻醉大鼠。使用一次性负压
        肝素钠抗凝管在大鼠腹主动脉快速取血4 mL，采用全自
        动血液流变测试仪测定全血低切黏度（10 s ）、全血中
                                              －1
        切黏度（60 s ）、全血高切黏度（200 s ）、血浆黏度、红细
                                       －1
                   －1
        胞聚集指数和卡松黏度；另使用一次性负压枸橼酸钠抗                             D.BV涂膜剂低剂量组      E.BV涂膜剂中剂量组     F.BV涂膜剂高剂量组
        凝管于大鼠腹主动脉快速取血2 mL，采用全自动凝血分                                 图1 各组大鼠注射EB后脑组织染色图
        析仪测定凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）和活化                         Fig 1 Brain tissue staining pictures of rats in each
        部分凝血活酶时间（APTT）及纤维蛋白原（FIB）含量。                               group after injecting EB
        2.4  大鼠脑组织病理学观察                                         梗死侧脑组织水肿程度及脑组织中EB含量测定结
            取“2.3”项下麻醉取血后大鼠，开胸暴露心脏，在左                       果显示，与假手术组比较，模型组大鼠右脑/左脑湿质量
        心室心尖部位剪一小口，从该处插灌流管至升主动脉根                            比和右侧脑组织 EB 含量均显著升高，差异均有统计学


        ·184  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 2                                   中国药房    2019年第30卷第2期
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