Page 34 - 2019年1月第30卷第2期

ng/mL）质控样品，每个质量浓度平行操作 5 次，再按 “2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，计算各体系中辣薄
“2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，考察日内精密度； 荷基厚朴酚的质量浓度。以孵育0 min时辣薄荷基厚朴
连续测定3 d，考察日间精密度；将实测质量浓度与理论 酚的质量浓度为参照，其他时间点的质量浓度与之相比
质量浓度进行比较，考察准确度。结果显示，低、中、高 计算其药物剩余百分比；以药物剩余百分比为纵坐标、
质量浓度质控样品的日内、日间RSD均小于10％，准确度 时间为横坐标，采用 Excel 2016 软件绘制辣薄荷基厚朴
分别为91.11％～100.37％、87.40％～103.75％、87.06％～ 酚在 5 种肝微粒体孵育体系中的孵育曲线，详见图 3。
[9]
98.67％，符合生物样品定量分析的相关要求 ，详见 各种属肝微粒体孵育体系均平行操作3次。
表 1。 120.00 小鼠
表1 精密度、准确度与基质效应试验结果 100.00 犬
大鼠
Tab 1 Results of precision，accuracy and matrix ef- ％ 80.00 人
fect tests 60.00 猴

理论质量浓度， 精密度，％ 准确度 基质效应 药物剩余百分比，
ng/mL 日内RSD（n＝5） 日间RSD（n＝15） （x±s，n＝5），％ （x±s，n＝5），％ 40.00
7.81 6.90 8.03 107.16±5.25 96.99±3.68 20.00
62.50 7.06 5.77 95.66±6.01 95.52±6.49
400.00 5.39 4.84 93.52±4.48 94.60±4.11 0
0 10 20 30 40 50 60 70
2.4.4 基质效应 按“2.4.2”项下方法配制辣薄荷基厚 时间，min
图3 辣薄荷基厚朴酚在人、大鼠、小鼠、猴、犬肝微粒体
朴酚低、中、高质量浓度（7.81、62.50、400.00 ng/mL）质控
中的孵育曲线
样品，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，得相应
Fig 3 Incubation curves of piperitylmagnolol in liver
峰面积（A）；另用流动相配制与上述质控样品理论质量
microsomes of human，rat，mouse，monkey
浓度对应的对照品溶液，进样测定，得相应峰面积（B）。
and dog
每个质量浓度平行操作 5 次。基质效应＝A/B×100％。
结果显示，辣薄荷基厚朴酚的基质效应为 85.40％～ 由图3可见，辣薄荷基厚朴酚在人、大鼠、小鼠、犬等
103.75％（RSD 为 3.72％～6.79％，n＝5），内标基质效应 4 种肝微粒体中的代谢明显，而在猴肝微粒体中的代谢
为99.96％～100.37％（RSD为1.21％～2.03％，n＝5），表 不明显。孵育30 min后，其在各种属肝微粒体中的药物
剩余百分比变化较小，代谢逐渐趋于稳定。
明本法受基质效应的影响较小，详见表1。
2.5.2 体外半衰期（t1/2 ）与固有清除率（CLint ）的计算 计
2.4.5 稳定性试验 按“2.4.2”项下方法配制辣薄荷基
算辣薄荷基厚朴酚人、大鼠、小鼠、猴、犬肝微粒体中的
厚朴酚低、中、高质量浓度（7.81、62.50、400.00 ng/mL）质
代谢相关参数：将各时间点的药物剩余百分比的自然对
控样品，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，每个
数（y）与孵育时间（x）作线性回归，得相应回归方程；以
质量浓度平行操作5次，考察各质控样品于室温及自动
上述线性回归方程的斜率（k）根据公式t1/2＝－0.693/k计
进样室（4 ℃）内放置24 h的稳定性。结果显示，在上述
算得其t1/2，并按公式CLint＝0.693×孵育液体积（mL）/[t1/2×
条件下，辣薄荷基厚朴酚各质控样品起止时间点峰面积
肝微粒体质量（mg）]计算得其CLint ，结果见表3。
[10]
的比值为 86.98％～96.51％（RSD 为 0.79％～3.70％，
表3 辣薄荷基厚朴酚在人、大鼠、小鼠、猴、犬肝微粒体
n＝5），表明其稳定性良好，详见表2。
表2 稳定性试验结果（x±±s，n＝5，％％） 中的回归方程、t1/2和CLint
Tab 3 Regression equations，t1/2 and CLint of piperityl-
Tab 2 Results of stability tests（x±±s，n＝5，％％）
magnolol in liver microsomes of human，rat，
理论质量浓度，ng/mL 室温 自动进样室（4 ℃）
7.81 88.95±2.88 88.12±1.87 mouse，monkey and dog
62.50 92.85±1.92 91.51±1.33 种属 回归方程 R 2 t1/2，min CLint，mL/（min·mg）
400.00 90.06±0.79 95.57±2.01 人 y＝－0.057 4x+4.635 6 0.967 0 12.07 0.115
2.5 辣薄荷基厚朴酚体外代谢特征研究 大鼠 y＝－0.039 2x+4.648 2 0.953 4 17.68 0.078
小鼠 y＝－0.039 4x+4.547 0 0.954 9 17.59 0.079
2.5.1 代谢稳定性 取“2.2.1”项下辣薄荷基厚朴酚贮 猴 y＝－0.003 2x+4.554 4 0.766 1 216.56 0.006
备液适量，用甲醇稀释至 40 μg/mL，取上述稀释后的溶 犬 y＝－0.011 2x+4.535 2 0.942 0 61.88 0.022
液2 μL，加至“2.3.1”项下孵育体系中，于37 ℃水浴中预 2.6 辣薄荷基厚朴酚的代谢途径分析
孵育 5 min 后，加入肝微粒体 5 μL 启动反应。分别于孵 参照“2.5”项下确定的辣薄荷基厚朴酚在不同种属
[11]
育 0、2、5、10、15、20、30、45、60 min 时加入 4 ℃甲醇（含 肝微粒体中的代谢相关参数，采用化学抑制剂法 对其
内标 10 ng/mL）各 400 μL 终止反应，涡旋混匀 3 min 代谢途径进行初步探讨。在“2.3.1”项下孵育体系中分
后，于 4 ℃下以 13 000 r/min 离心 15 min，取上清液，按 别加入“2.5.1”项下 40 μg/mL 辣薄荷基厚朴酚溶液 1 μL

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