Page 35 - 2019年1月第30卷第2期

和各特异性抑制剂（按“2.2.3”项下方法配制，并折算为 混匀3 min后，于4 ℃下以13 000 r/min离心15 min，取上
摩尔浓度，即CYP2A6抑制剂硝酸毛果芸香碱25 μmol/L、 清液，在“2.1.1”项下色谱条件下，采用一级全扫描（MS
CYP2D6 抑制剂奎尼丁 10 μmol/L、CYP2C19 抑制剂盐 Scan）以正离子方式检测，扫描范围为 m/z 100～1 000，
酸噻氯匹定25 μmol/L、CYP3A4抑制剂酮康唑1 μmol/L、 比较上述两个时间点的色谱图差异，以初步判断辣薄荷
CYP2C9 抑制剂磺胺苯吡唑 20 μmol/L、CYP2E1 抑制剂 基厚朴酚的体外代谢产物。
二乙基二硫代氨基甲酸钠50 μmol/L以及CYP1A2抑制 结果显示，与0 min时的色谱图（图4A）比较，60 min
剂α-萘黄酮 1 μmol/L [12-13] ）1 μL，于 37 ℃水浴中预孵育 5 时的色谱图（图4B）新增2个色谱峰，其准分子离子峰分
+
+
min后，加入人肝微粒体5 μL启动反应，混匀后，于37 ℃ 别为m/z 441.2（[M+Na] ）、m/z 337.2（[M+H] ）；根据该化
水浴中继续孵育30 min，加入4 ℃甲醇（含内标10 ng/mL） 合物的碎片离子峰初步判断，4.347、6.903、10.653 min处
400 μL终止反应；同时设置未发生反应的阴性对照（即 的色谱峰则可能是由与肝微粒体有关的杂质所致，详见
不加 NADPH 孵育系统和特异性抑制剂，用甲醇补足剩 图4、图5。
余体积）和完全反应的阳性对照（即不加特异性抑制剂， 90 90
3 ％
但加 NADPH 孵育系统，用甲醇补足剩余体积），同法孵 ％ 3
育。按“2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，计算辣薄荷 相对强度， 相对强度， 1 2
基厚朴酚质量浓度和抑制率[抑制率＝[1－（阴性对照 －10 －10
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
样品质量浓度－试验组样品质量浓度）/（阴性对照样 时间，min 时间，min
A. 0 min B. 60 min
品质量浓度－阳性对照样品质量浓度）］×100％] [12-13] 。
注：1.代谢产物 m/z 337.2（[M+H] ）；2.代谢产物 m/z 441.2（[M+
+
各种属肝微粒体孵育体系均平行操作3次。
Na]）；3.辣薄荷基厚朴酚m/z 401.2
+
采用 Excel 2016 软件进行数据处理。结果显示，辣 Note：1. metabolite m/z 337.2（[M+H] ）；2. metabolite m/z 441.2
+
薄荷基厚朴酚的代谢是由多种 CYP 酶介导的，其中 （[M+Na]）；3. piperitylmagnolol m/z 401.2
+
CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9酶对辣薄荷基厚 图4 辣薄荷基厚朴酚在人肝微粒体中代谢的色谱图
朴 酚 代 谢 的 抑 制 率 较 高 ，分 别 为 93.94％ 、96.01％ 、 Fig 4 Metabolic chromatograms of piperitylmagnolol
93.69％、71.81％，表明上述 4 种酶可能是参与该化合物 in human liver microsomes
代谢的主要同工酶；而CYP2A6、CYP2E1、CYP1A2酶的 100 284.3 100 401.2 441.2
抑制率较低，分别为 55.76％、23.25％、28.04％，提示上 ％ 337.2 ％
述3种酶可能与该化合物的代谢无关，详见表4。 相对强度， 相对强度，
表4 各种同工酶抑制剂对人肝微粒体中辣薄荷基厚朴
0 0
酚代谢的影响（n＝3） 200 400 600 800 200 400 600 800
m/z m/z
Tab 4 Effects of various isozyme inhibitors on the me- A.代谢产物m/z 337.2（[M+H]） B.代谢产物m/z 441.2（[M+Na]）
+
+
tabolism of piperitylmagnolol in human liver 100 401.2
microsomes（n＝3） ％
孵育体系 辣薄荷基厚朴酚质量浓度（x±s），ng/mL RSD，％ 抑制率，％ 相对强度，
硝酸毛果芸香碱（CYP2A6） 157.82±10.77 6.82 55.76
奎尼丁（CYP2D6） 185.11±11.24 6.07 93.94
0
盐酸噻氯匹定（CYP2C19） 186.59±10.60 5.68 96.01 200 400 600 800
酮康唑（CYP3A4） 184.93±14.44 7.81 93.69 m/z
磺胺苯吡唑（CYP2C9） 169.29±10.51 6.21 71.81 C.辣薄荷基厚朴酚m/z 401.2
二乙基二硫代氨基甲酸钠（CYP2E1） 134.58±6.85 5.09 23.25 图5 辣薄荷基厚朴酚在人肝微粒体中代谢的特征性碎
α-萘黄酮（CYP1A2） 138.14±1.39 1.01 28.04 片离子峰
阴性对照 189.44±7.28 3.84 － Fig 5 Characteristic fragment ion peak of piperityl-
阳性对照 117.96±4.60 3.90 0
magnolol in human liver microsomes
注：“-”表示未发生反应
Note：“-”means no reaction 3 讨论
2.7 辣薄荷基厚朴酚体外代谢产物初探 在新药研发的早期阶段，学者可通过研究药物在体
按“2.3.1”项下方法，于冰浴上将质量浓度为2 mg/mL 外肝微粒体中的代谢特征来比较其在不同种属中代谢
的辣薄荷基厚朴酚工作液 2 μL（按“2.2.1”项下方法配 的差异，可为后期动物模型的选择和药物在人体内的代
制）加至孵育体系中，于37 ℃水浴中预孵育5 min后，加 谢特征研究提供一定的参考 [14-15] 。本研究建立了测定新
入人肝微粒体5 μL启动反应，混匀后，分别于孵育0、60 木脂素类化合物辣薄荷基厚朴酚质量浓度的UPLC-MS/
min 时加入 4 ℃甲醇（含内标）各 400 μL 终止反应，涡旋 MS法。该方法专属性强、灵敏度及准确度高、基质效应

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