Page 45 - 《中国药房》2026年10期
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肤呈粉红色且无破损，此时小鼠毛囊处于休止期），并在                          2.7 背部皮肤组织中TLR4/MyD88通路相关蛋白表达
          每天上午于其脱毛区皮下注射 5 mg/mL 的丙酸睾酮溶                          （1）免疫组化实验：取“2.5”项下各组小鼠的背部皮
                                   [11]
          液 2 mL（每天 1 次，持续 4 周） 。若 4 周后小鼠背部毛                 肤组织切片适量，脱蜡后，进行抗原修复；随后，加入过
          发生长稀疏且颜色暗淡、背部皮肤皮脂溢出，经组织病                           氧化氢，于室温下孵育 15 min；洗片后，加入 TLR4、
          理学检测可见毛囊数量减少、微型化，毛干色素变浅、直                          MyD88一抗（稀释比例均为1∶500），孵育过夜；洗片后，
                                             [11]
          径变小，则视为脂溢性脱发模型构建成功 。                               加入相应二抗（稀释比例为1∶1 000），孵育30 min；洗片
              造模完成后，黄芪颗粒组小鼠于每天下午灌胃 1.0                       后，加入二氨基联苯胺显色并使用光学显微镜观察，使
          g/kg 的黄芪颗粒药液（根据人与小鼠等效剂量换算，以                        用Image-Pro Plus软件分析，计算棕黄色染色区域（阳性
          生理盐水为溶剂）并腹腔注射等体积生理盐水 ；抑制剂
                                                 [8]
                                                             区域）的平均光密度值，用以反映 TLR4、MyD88 蛋白的
          组小鼠于每天下午腹腔注射 0.3 mg/kg 的 TAK-242 药液
                                                             表达情况。
                                                [12]
         （以生理盐水为溶剂）并灌胃等体积生理盐水 ；黄芪颗
                                                                （2）Western blot实验：取“2.4”项下各组小鼠冻存的
          粒+激活剂组小鼠于每天下午灌胃 1.0 g/kg 的黄芪颗粒
                                                             背部皮肤组织，加入RIPA裂解液以提取蛋白，经BCA法
          药液并腹腔注射2.5 mg/kg的LPS药液（以生理盐水为溶
                                                             测定蛋白浓度后进行变性处理。取变性蛋白适量，经电
             [12]
          剂） ；对照组和模型组小鼠于每天下午灌胃并腹腔注
                                                             泳 分 离 、转 膜 后 封 闭 ；洗 膜 后 ，加 入 TLR4、MyD88、
          射等体积生理盐水。上述处理每天1次，持续20 d。
                                                             GAPDH 一抗（稀释比例均为 1∶1 000），孵育过夜；洗膜
          2.2 毛发生长情况
                                                             后，加入相应二抗（稀释比例为 1∶2 000），孵育 1 h；以
              实验期间，每天观察各组小鼠的毛发生长情况，结
                                                             ECL 试剂显影、成像。使用 Image J 软件分析各蛋白的
          合毛囊皮肤颜色变化（粉红色变成黑色）时间判断其毛
                                                             条带灰度值，以 GAPDH 为内参计算各目的蛋白的相对
          发生长周期，记录皮肤颜色转变时间和毛发长出时间。
                                                             表达量。
          末次给药后，随机拔下各组小鼠新生毛发5根，测量其长
          度，取平均值。                                            2.8 统计学方法
          2.3 血清免疫因子、性激素水平测定                                     采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。数据以
              采用 ELISA 法检测。拔下毛发后，将各组小鼠麻                      x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两
          醉，并经腹主动脉采血，血样经离心后收集上层血清，使                          两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
          用酶标仪检测血清中免疫因子（IFN-γ、IL-4）和性激素                      3 结果
         （T、DHT）水平（严格按照相应试剂盒说明书操作）。                          3.1 黄芪颗粒对小鼠毛发生长的影响
          2.4 背部皮肤组织中毛发生长因子水平测定                                  与对照组比较，模型组小鼠的皮肤颜色转变时间、
              采用ELISA法检测。采血后，随机选取各组6只小                       毛发长出时间均显著延长，新生毛发长度显著缩短（P＜
          鼠，处死，分离其背部脱毛区皮肤组织（对照组选择相同                          0.05）。与模型组比较，抑制剂组和黄芪颗粒组小鼠的皮
          区域，后同），取部分组织，于－80 ℃保存，备用；取剩余                       肤颜色转变时间、毛发长出时间均显著缩短，新生毛发
          部分组织适量，经匀浆、离心后收集上清液，使用酶标仪                          长度均显著增长（P＜0.05）；且两组上述指标水平相当
          检测背部皮肤组织中毛发生长因子（IGF-1、VEGF、TGF-                   （P＞0.05）。与黄芪颗粒组比较，黄芪颗粒+激活剂组小
          β1 ）水平（严格按照相应试剂盒说明书操作）。                            鼠的皮肤颜色转变时间、毛发长出时间均显著延长，新
          2.5 毛囊组织形态学观察                                      生毛发长度显著缩短（P＜0.05）。结果见表1。
              取各组剩余6只小鼠，处死，剪取其背部脱毛区皮肤
                                                                表1 各组小鼠毛发生长情况比较（x±s，n＝12）
          组织（1 cm×1 cm），以4%多聚甲醛溶液固定后，行常规
                                                              组别           皮肤颜色转变时间/d     毛发长出时间/d  新生毛发长度/mm
          石蜡包埋、切片（厚度5 μm）；取切片适量，行脱蜡、脱水                        对照组            6.04±0.58     9.11±0.76  4.31±0.28
          后，进行 HE 染色；封片后，使用光学显微镜观察其毛囊                         模型组            9.15±1.12 a  12.96±1.05 a  2.17±0.24 a
                                                              抑制剂组           6.52±0.74 b   9.74±0.98 b  4.06±0.29 b
          组织形态，并记录毛囊数（每个样本随机选择10个视野
                                                              黄芪颗粒组          6.89±0.78 b  10.05±1.09 b  3.88±0.25 b
          进行观察，结果以单位视野内的平均毛囊数表示）。                             黄芪颗粒+激活剂组      8.91±1.03 c  12.63±1.14 c  2.42±0.21 c
          2.6 毛囊组织细胞凋亡情况测定                                      a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与黄芪颗
              取“2.5”项下各组小鼠的背部皮肤组织切片适量，脱                      粒组比较，P＜0.05。
          蜡后，加入 TUNEL 试剂 50 μL，避光孵育 60 min；清洗                3.2 黄芪颗粒对小鼠血清免疫因子、性激素水平的影响
          后，加入 4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染液复染；封                       与对照组比较，模型组小鼠血清 IFN-γ、T、DHT 水
          片后，使用荧光显微镜观察其细胞凋亡情况（凋亡细胞                           平均显著升高，IL-4水平显著降低（P＜0.05）。与模型组
          呈红色），并使用 Image-Pro Plus 软件分析，计算细胞凋                 比较，抑制剂组和黄芪颗粒组小鼠血清 IFN-γ、T、DHT
          亡率（即红色荧光细胞占细胞总数的比例）。                               水平均显著降低，IL-4 水平均显著升高（P＜0.05）；且两


          中国药房  2026年第37卷第10期                                              China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 10    · 1279 ·
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