Page 89 - 《中国药房》2026年9期
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2.5 临床应用                                                  15
          2.5.1 研究对象
              本研究纳入2025年9月1－30日于南京医科大学附                            （ ng/mL ）  10
          属儿童医院接受 TAC 治疗的 83 名患儿（临床诊断为肾                            质量浓度/  5
          病综合征、过敏性紫癜性肾炎、狼疮性肾炎、系统性红斑
          狼疮，或接受肾移植、肝移植、心脏移植）的86例全血样
                                                                     0
          本。该研究方案经南京医科大学附属儿童医院伦理委                                      肾小球疾病       移植    自身免疫性疾病  其他
                                                                       A.不同疾病患儿全血中TAC浓度分布
          员会批准（批准号202411030-1）。因本研究不涉及临床                            15
                                                                                                  LC-MS/MS法
          和个人数据的报道，因此被豁免了受试者或监护人的知                                                                EMIT法
          情同意。                                                     （ ng/mL ）  10
          2.5.2 TAC血药浓度检测及结果分析                                     质量浓度/
              本研究采用 EMIT 法（通过西门子公司 Viva-E 全自                         5
          动生化分析仪及其配套试剂盒进行常规测定）和 LC-
                                                                     0
          MS/MS 法测定 86 例全血样本中的 TAC 浓度。另外，根                            0      20     40     60     80   100
                                                                                样本编号
          据疾病类型与实体器官移植术后状态将全血样本分为4                                       B.所有患儿全血中TAC浓度分布
          种不同类型，即肾小球疾病（n＝47）、移植（n＝19）、自身                         图2 两种方法测定的全血中TAC浓度的分布
          免疫性疾病（n＝12）和其他（n＝8）。将所有全血样本按                       此，本研究采用甲醇一步沉淀法进行样品前处理。该方
         “2.2”项下方法处理，再按“2.3”项下色谱与质谱条件进                       法基于本课题组前期研究 ，通过加入沉淀剂（甲醇/乙
                                                                                    [15]
          样分析，记录峰面积，再根据标准曲线计算 TAC 血药浓                        腈），可有效裂解新鲜全血中的红细胞；对于冷冻保存的
          度。结果（图2）显示，LC-MS/MS法和EMIT法测定的患                     全血，即使仅与基质溶液混合，红细胞亦可完全裂解。
          儿全血中TAC浓度的中位值分别为4.4、4.0 ng/mL；其中                   因此，本方法将蛋白沉淀与红细胞裂解步骤合二为一，
          肾小球疾病患儿全血中 TAC 浓度的中位值分别为 4.1、                      显著简化了前处理流程，提高了分析效率。
          4.3 ng/mL，移植患儿全血中 TAC 浓度的中位值分别为                        在LC-MS/MS分析中，选用合适的内标对于补偿前
          4.6、4.4 ng/mL，自身免疫性疾病患儿全血中TAC浓度的                   处理损失、校正离子化效率波动及抵消基质效应至关重
          中位值分别为3.2、2.7 ng/mL。                               要 [13，16] 。子囊霉素因其在理化性质上与 TAC 高度相似，
              本研究进一步通过 Spearman 相关性分析、Bland-                 被广泛用作同位素内标的有效替代品 。除此之外，本
                                                                                              [17]
          Altman分析、Passing-Bablok回归分析，评估两种方法测                研究进一步对内标的浓度进行了优化，当内标浓度提高
          定的全血中TAC浓度的相关性和一致性。结果显示，两                          至 50 ng/mL 时，所建立方法的标准曲线线性关系良好，
          种方法具有强相关性（相关系数为 0.848 1）与良好的一                      精密度试验等考察结果均满足方法学考察要求。因此，
          致性（平均相对偏差为6.5%），且不存在显著的系统比例                        本研究最终选择50 ng/mL的子囊霉素作为内标。
          误差或恒定偏差。结果见图3。                                         为进一步优化TAC的色谱分离与质谱响应，本研究
          3 讨论                                               以甲醇为有机相，系统考察了不同浓度甲酸（0.04、0.1、
              LC-MS/MS法具有高特异性和高灵敏度，正逐渐成                      0.2、0.5、1 mmol/L）和醋酸铵（0.05、0.1、0.5、1、2 mmol/L）
          为临床治疗药物监测的金标准             [7，9] 。目前，已有多种基于         对TAC信号响应及峰形的影响。结果显示，甲酸可调节
          LC-MS/MS法测定全血中TAC浓度的报道，但其前处理                       流动相pH至酸性，有助于TAC质子化，不仅改善了其在
          通常涉及固相萃取、液液萃取或硫酸锌多步沉淀等操                            反相色谱柱上的保留行为和峰形，也提升了电喷雾离子
          作 [10，14] ，步骤繁琐，限制了临床常规应用的便利性。为                    化效率。另一方面，醋酸铵的引入则提供了铵离子
           （ ng/mL ）  /  15                   100                    +1.96 SD   （ ng/mL ）  14  Slope（95%CI）：
                                               80
                                                                                   0.891 6（0.803 6～1.002 2）
                                                                                12
                                                                                   Intercept（95%CI）：
                                               60
           （ LC-MS/MS法 ）  10 5               两种方法的偏差/%  －20 0          Mean     / （ EMIT法 ）  8 6
                                                                                   0.097 08（－0.348 7～0.608 9）
                                                                                10
                                               40
                                                                        46.8
                                               20
                                                                       －6.5
           TAC浓度             R 2 ＝0.848 1     －40                    －1.96 SD   TAC浓度  4 2
                             Y＝1.054X+0.089 77
                                              －60
                                                                       －59.8
             0                                －80                                0
              0       5       10       15       0       2     4     6     8    10   12   14  0       2     4     6     8    10   12   14
                    TAC浓度（EMIT法）/（ng/mL）                 两种方法的平均值                     TAC浓度（LC-MS/MS法）/（ng/mL）
                    A. Spearman相关性分析                   B. Bland-Altman分析               C. Passing-Bablok回归分析
                                 图3 两种方法测定全血中TAC浓度的相关性及一致性分析
          中国药房  2026年第37卷第9期                                                China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 9    · 1183 ·
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