Page 88 - 《中国药房》2026年9期

2.3.2 色谱条件 0.003 93x+0.000 115（r＝0.998 0），其在 0.5～100 ng/mL
采用Kinetex F5 100Å（50 mm×2.1 mm，5 μm）色谱 浓度范围内具有良好线性。
柱，以含 0.2 mmol/L 甲酸的 0.1 mmol/L 醋酸铵溶液（A 2.4.3 准确度和精密度
相）和甲醇（B相）为流动相进行梯度洗脱（0～0.40 min， 取“2.1.2”项下定量下限和低、中、高质量浓度的QC
50%B；0.40～0.41 min，50%B→90%B；0.41～0.85 min， 样品各适量，每个质量浓度平行 6 份，按“2.2”项下方法
90%B→100%B；0.85～1.80 min，100%B；1.80～2.20 处理后，再按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，以评
min，100%B→50%B；2.20～3.00 min，50%B），流 速 为 估准确度和精密度（同批样品重复测定6次考察日内准
0.4 mL/min，进样体积为5 μL。 确度和精密度，连续测定 3 d 考察日间准确度和精密
2.4 方法学验证 度）。结果显示，TAC在4个质量浓度下的日内准确度为
参考2020年版《中国药典》（四部）“生物样品定量分
95.60%～106.00%（n＝6），日 间 准 确 度 为 96.60%～
析方法验证指导原则”及美国 FDA 发布的“生物分析方
106.00%（n＝3）；日内精密度的 RSD＜8.10%（n＝5），日
法验证指南”进行方法学验证 [12―13] 。
间精密度的RSD＜18.90%（n＝3）。
2.4.1 专属性与残留考察
2.4.4 提取回收率和基质效应
取6份不同来源的空白全血样品适量，混匀后取50
取“2.1.2”项下低、中、高质量浓度的 QC 样品各适
μL，按“2.2”项下方法处理，制备只含内标不含待测物的
量，每个质量浓度平行6份，按“2.2”项下方法处理后，再
零浓度样品。取“2.1.1”项下定量上限浓度（2 000 ng/mL）
按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析。以QC样品（A）
的标准曲线工作溶液适量，除不加内标外，按“2.2”项下
与空白全血提取后加 QC 工作溶液（B）的峰面积比值计
方法处理，制备不含内标的定量上限样品。取6份不同
算提取回收率（提取回收率＝A/B×100%），同法计算内
来源的空白全血样品各 50 μL，除不加内标外，按“2.2”
标的提取回收率。以空白全血提取后加 QC 工作溶液
项下方法处理，制成双空白样品（不含待测物与内标）。
（B）与相同浓度纯溶液样品（C）的峰面积比值表示基质
取上述只含内标不含待测物的零浓度样品和不含内标
效应（基质效应＝B/C×100%）。结果显示，待测物 3 个
的定量上限样品各适量，按“2.3”项下色谱与质谱条件进
质量浓度 QC 样品的提取回收率为 73.40%～78.70%
样分析，考察待测物与内标之间的干扰。在定量上限样
（RSD 均小于 8.30%，n＝6），内标归一化的基质因子的
品后进样双空白样品，以评估系统残留。结果（图 1）显
RSD均小于15.00%，未出现明显的基质效应。
示，全血中内源性物质对待测物与内标均无显著干扰，
待测物与内标间也无显著干扰，表明该方法专属性良 2.4.5 稳定性考察
好。另外，双空白样品中未出现明显待测物色谱峰，表 取适量“2.1.2”项下低、高质量浓度的QC样品，每个
明系统残留符合验证标准。 质量浓度平行6份，分别于室温下放置24 h、4 °C条件下
2.4.2 线性关系与定量下限考察 放置24 h、－80 °C条件下冷冻60 d、－80 °C条件下反复
取“2.1.2”项下标准曲线样品及 QC 样品各适量，按 冻融3次（每次冷冻超8 h），然后按“2.2”项下方法处理，
“2.2”项下方法处理后，再按“2.3”项下色谱与质谱条件 再按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，以考察样品的
进样分析，测定待测物的峰面积。以待测物质量浓度为 稳定性。结果显示，所有样品在各储存条件下的测定值
横坐标（x，ng/mL），待测物与内标的峰面积比值为纵坐 与理论值的相对偏差均在±15%范围内，表明样品稳定
标（y）进行线性回归。结果显示，TAC的线性方程为y＝ 性良好。
250 TAC 2 000 1.91 TAC 800 TAC 4×10 5
1.92 TAC
强度 125 强度 1 000 强度 400 强度 2×10 5

0 0 0 0
0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3
t/min t/min t/min t/min
800 子囊霉素 1×10 6 1.91 子囊霉素 1×10 6 1.93 子囊霉素 1 500 子囊霉素

强度 400 强度 5×10 5 强度 5×10 5 强度 750 1.92

0 0 0 0
0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3
t/min t/min t/min t/min
A.双空白样品 B.定量下限样品 C.零浓度样品 D.定量上限样品
图1 典型MRM色谱图

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