Page 87 - 《中国药房》2026年9期

（correlation coefficient of 0.848 1） and good agreement （average relative deviation of 6.5%）. CONCLUSIONS A reliable LC-MS/
MS method for the determination of TAC concentration in human whole blood is successfully established. This method demonstrates
strong correlation and good agreement with the EMIT method， making it suitable for clinical therapeutic drug monitoring.
KEYWORDS tacrolimus； LC-MS/MS method； EMIT method； whole blood； therapeutic drug monitoring

他克莫司（tacrolimus，TAC）是一种大环内酯类钙调 （批号 19M-ARA-25-0，纯度 99.7%）购自天津一方科技
磷酸酶免疫抑制剂，可通过与 FK506 结合蛋白结合，抑 有限公司；色谱级甲醇购自德国 Merck 公司；色谱级二
制钙调磷酸酶活性和T细胞活化，进而发挥免疫抑制作 甲基亚砜购自上海麦克林生化科技股份有限公司；ASC
[1]
用 。该药物广泛用于预防移植后器官排斥反应，近年 级甲酸购自美国 Tedia 公司；ASC 级醋酸铵购自美国
来也逐步用于难治性肾病综合征、特应性皮炎等疾病的 Sigma公司。
治疗。然而，TAC具有治疗窗狭窄、个体变异性显著、潜 2 方法与结果
在药物相互作用等特点，这些因素使其临床应用面临挑 2.1 溶液的配制
战。2021 年《改善全球肾病预后组织指南》建议对 TAC 2.1.1 储备液和工作溶液
[2]
进行治疗药物监测 ，相关研究也建议根据血药浓度调 精密称取 TAC 标准品适量，以甲醇为溶剂，配制成
[3]
整患者个体化给药方案 。因此，建立准确、稳定、可靠 质量浓度为 1 mg/mL 的 TAC 储备液。量取适量 TAC 储
的TAC血药浓度分析方法对指导用药具有重要意义。 备液，使用50%甲醇溶液稀释成质量浓度分别为10、40、
目前，TAC 的治疗药物监测主要依赖免疫分析方 100、400、800、1 200、2 000 ng/mL 的标准曲线工作溶液
法，如酶放大免疫分析（enzyme multiplied immunoassay 和质量浓度分别为10、30、600、1 600 ng/mL的质控（QC）
[6]
technique，EMIT）法 [4―5] 、化学发光微粒子免疫分析法 及 工作溶液，均保存于－80 °C冰箱。
[7]
抗体偶联磁性免疫分析法等 。然而，免疫分析法因无 精密称取子囊霉素标准品适量，以甲醇-二甲基亚
法区分 TAC 母体药物与其代谢物，存在特异性不足、易 砜（体积比为 2∶1）溶液为溶剂，配制成质量浓度为 1.25
受交叉反应干扰的局限性，可能导致测定结果出现偏 mg/mL的子囊霉素储备液。取适量子囊霉素储备液，以
差 。近年来，液相色谱-串联质谱（liquid chromatography- 甲醇稀释成质量浓度为50 ng/mL的内标工作溶液，保存
[7]
tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法 因 其 高 特 异 于－20 °C冰箱。
性、高灵敏度和高通量等优势，已成为临床生物分析的 2.1.2 标准曲线样品和QC样品
核心技术 [8―9] 。然而，现有用于测定人全血中 TAC 浓度 量取“2.1.1”项下系列标准曲线工作溶液和QC工作
的LC-MS/MS技术，在样本前处理上多依赖固相萃取或 溶液各 10 μL，分别加入 190 μL 空白全血（由南京医科
液液萃取，步骤繁琐、耗时较长 [10―11] ，限制了其在常规临 大学附属儿童医院提供），配制成质量浓度分别为 0.5、
床治疗药物监测中的广泛应用。基于此，本研究拟建立 2、5、20、40、60、100 ng/mL 的标准曲线样品和质量浓度
一种简单、快速、稳定的用于检测人全血中 TAC 浓度的 分别为 0.5（定量下限）、1.5（低质量浓度）、30（中质量浓
方法，并将该方法应用于临床，同时与传统EMIT法进行 度）、80（高质量浓度）ng/mL的QC样品。
比较，以期为TAC的治疗药物监测提供新的参考。 2.2 全血样品处理
1 材料 量取 50 μL 全血样品至 1.5 mL 离心管中，加入 200

1.1 主要仪器 μL 含有内标的甲醇溶液，涡旋混合 5 min，再于 4 °C 条
TM
TM
Jasper 型高效液相色谱和TripleQuad 4500MD型 件下以12 000 r/min离心5 min；移取上清液50 μL，加入
质谱均购自美国 AB SCIEX 公司；Milli-Q Gradient 型超 100 μL 50%甲醇溶液，涡旋混合5 min，取适量上清液进
纯水系统购自美国 Millipore 公司；Fresc021 型低温离心 行LC-MS/MS定量分析。
机购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；MS205DU 型 2.3 色谱与质谱条件
百万分之一分析天平购自瑞士 Mettler Toledo 公司； 2.3.1 质谱条件
AYAN-30L 型氮气发生器购自杭州安研仪器制造股份 采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行多反应监
有限公司；Viva-E 型全自动药物浓度分析仪购自德国 测，碰撞气压力为 7 units；气帘气压力为 30 psi（1 psi＝
Siemens公司。 6.895 kPa），喷雾气压力为 60 psi，辅助加热气压力为 55
1.2 主要药品与试剂 psi，离子喷雾电压为 5 500 V，离子源温度为 500 °C。
TAC 标准品（批号 1-HBS-107-1，纯度 98%）购自加 TAC 和子囊霉素的离子对分别为 m/z 821.6→768.6 和
拿大 Toronto Research Chemicals 公司；子囊霉素标准品 m/z 809.4→756.1。

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