Page 74 - 《中国药房》2026年8期
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NC  group，  the  changes  in  the  aforementioned  indicators （except  for  Notch1  and  Hes1）  in  the  cells  of  the  TFRD+si-Prdx1  group
          were  significantly  reversed （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  TFRD  may  activate  the  Notch1/Hes1  signaling  axis，  and  up-regulate  the
          expression  of  the  downstream  target  molecule  Prdx1，  thereby  inhibiting  LPS-induced  chondrocyte  apoptosis，  promoting  protective
          autophagy， and consequently improving cartilage metabolic homeostasis.
          KEYWORDS     total flavonoids of Drynariae Rhizoma； chondrocyte； Notch1/Hes1 signaling axis； autophagy； apoptosis


              骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种慢性退行性疾               （monodansylcadaverine，MDC）染色试剂盒、人基质金属
          病，全球约有 3.5 亿人受 OA 病痛折磨，严重影响患者生                      蛋白酶13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）酶联免
                [1]
          活质量 。研究发现，软骨细胞退变是OA的核心病理环                           疫吸附测定（ELISA）试剂盒、人软骨寡聚基质蛋白（car‐
          节，其过程中的自噬与凋亡的平衡失调是导致软骨基质                            tilage  oligomeric  matrix  protein，COMP）ELISA 试 剂 盒
          降解和细胞功能丧失的关键             [2―3] 。因此，恢复自噬-凋亡         （批号分别为 ST1470、C0041、APOAF、T3203、C3018S、
          平衡已成为OA治疗的重要策略。                                     RAB0364、KOA0550）均购自上海碧云天生物技术有限
              骨 碎 补 总 黄 酮（total  flavonoids  of  Drynariae  Rhi‐  公司；人含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属
          zoma，TFRD）是从传统中药骨碎补中获取的活性成分，                        蛋白酶 5（a disintegrin and metalloproteinase with throm‐
          现代药理研究证实，其具有抗炎、抗氧化以及调控骨代                            bospondin  motifs  5，ADAMTS5）ELISA 试 剂 盒（批 号
                          [4]
          谢等多种生理活性 。TFRD 可通过促进成骨细胞生成                          ml038180）购自上海酶联科技生物有限公司；兔源 X 连
          和抑制脂肪细胞生成，进而在原发性骨质疏松症的治疗                            锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，
                        [5]
          中发挥显著潜力 。Notch1信号参与了软骨细胞增殖与
                                                              XIAP）、多 腺 苷 二 磷 酸 核 糖 聚 合 1[poly（ADP-ribose）
          分化的平衡调控，其下游效应分子发状分裂相关增强子
                                                              polymerase 1，PARP1]、Beclin-1、微管相关蛋白 1 轻链 3
          1（hairy and enhancer of split 1，Hes1）可抑制 SRY-box 转
                                                              Ⅱ/Ⅰ（microtubule-associated  protein  1  light  chain  3  Ⅱ/
          录因子 9（SRY-box transcription factor 9，Sox9）等成软骨
                                                              Ⅰ，LC3-Ⅱ/Ⅰ）、PTEN 诱导激酶 1（PTEN-induced puta‐
                      [6]
          相关基因表达 。过氧化物氧化还原酶 1（peroxiredoxin
                                                              tive kinase 1，PINK1）、Notch1、Hes1、Prdx1、β-肌动蛋白
          1，Prdx1）作为抗氧化蛋白，可通过改善氧化应激缓解
                                                             （β-actin）一抗和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球
          OA 进展和疼痛反应，其表达受 Notch1/Hes1 信号轴调
                                                              蛋白 G、Lipofectamine 3000 转染试剂（批号分别为 PA5-
            [7]
          控 。鉴于 TFRD 具有抗氧化和调控骨代谢的活性，推
                                                              29253、PA5-34803、PA1-16857、PA5-22731、PA5-86941、
          测其可能通过调控 Notch1/Hes1 信号轴，影响下游抗氧
                                                              MA5-32080、PA5-28802、MA5-53228、PA5-21396、31460、
          化蛋白 Prdx1 的表达，进而调节软骨细胞自噬与凋亡的
                                                              L3000015）均购自美国Thermo Fisher Scientific公司。
          平衡，缓解 OA 进展。基于此，本研究通过脂多糖（lipo‐
                                                              1.3 实验细胞
          polysaccharide，LPS）诱导人软骨细胞 C28/I2 建立 OA 细
                                                                  人软骨细胞系C28/I2（批号HTX2308C）购自深圳市
          胞模型，探讨 TFRD 通过调控 Notch1/Hes1 信号轴对软
                                                              华拓科技有限公司。
          骨细胞自噬与凋亡平衡的影响，旨在为 OA 的治疗提供
          参考。                                                 2 方法
          1 材料                                                2.1 细胞培养
                                                                  将 C28/I2 细胞接种于 DMEM 培养基中，培养至融
          1.1 主要仪器
              本研究所用主要仪器包括Synergy H1型酶标仪（美                     合度达 80% 以上后，用胰蛋白酶消化细胞进行传代培
                                                        TM
          国 BioTek 公司）、iBright CL1500 型成像系统和 Sorvall          养。实验中所用细胞均为传代 3～5 代且生长状态良好
          MTX 150 型微量超高速离心机（美国 Thermo Fisher                  的对数生长期细胞。
          Scientific公司）、CytoFLEX型流式细胞仪（美国Beckman              2.2 TFRD给药浓度的筛选
                                                                                                 3
          Coulter公司）、DMi8型荧光显微镜（德国Leica公司）。                       取 C28/I2 细胞接种于 96 孔板（5×10 个/孔）中，待
                                                                                                 [8]
          1.2 主要药品与试剂                                         细胞贴壁后，分别在无或有LPS（5 μg/mL ）的系统各孔
                                                                                                      [8]
              TFRD[国药准字 Z20133051，含量 70%（以柚皮苷                 中加入含0、50、100、200、400、800 μg/mL TFRD 的培养
          计）]购自北京岐黄制药有限公司；Prdx1小干扰RNA（si-                     基，每个浓度设6个复孔。培养24 h后，每孔加入10 μL
          Prdx1）及其阴性对照（si-NC）均由生工生物工程（上海）                     CCK-8试剂，孵育2 h，最后使用酶标仪在450 nm波长处
          股份有限公司合成；LPS、CCK-8 试剂盒、Annexin FITC/                检测各孔光密度（optical density，OD）值。选择对C28/I2
          PI 凋亡试剂盒、吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethi-             细胞无毒性且对 LPS 诱导的 C28/I2 细胞活性促进最强
          dium  bromide，AO/EB）双 染 试 剂 盒 、单 丹 磺 酰 尸 胺          的TFRD质量浓度进行后续实验。


          · 1028 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 8                              中国药房  2026年第37卷第8期
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