Page 98 - 《中国药房》2026年7期
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高等专科学校生物医学伦理委员会审核批准,批号为
SXYZ-A-2512-0003。
2 方法与结果
2.1 分组、造模与给药
将小鼠随机分为对照组、模型组、铁皮石斛组,每组
5只。对照组仅做剃毛处理。其余各组小鼠用异氟烷麻
醉,固定,充分暴露背部剃毛区域;将浸有丙酮-乙醚混
合液(丙酮和乙醚的质量比为1∶1)的化妆棉贴于小鼠背
部剃毛区域,计时15 s;随后立即把浸有纯水的化妆棉贴
于小鼠背部剃毛区域,计时30 s;每天重复上述操作2次
(间隔时间大于6 h),连续造模5 d,以复制干皮症模型小
鼠 。同时,铁皮石斛组小鼠于每天第 1 次造模后 2 h
[6]
时,涂抹200 μL铁皮石斛混悬液,对照组和模型组涂抹 对照组 模型组 铁皮石斛组
等体积纯水,每天1次,直至造模结束。 图1 各组小鼠皮肤损伤情况观察图
2.2 小鼠皮肤损伤情况和病理学形态观察
末次给药后,观察各组小鼠造模区域皮肤形态,并
进行皮肤鳞屑评分,评分越高表明皮肤损伤越重。处死
各组小鼠,剖取背部皮肤组织,一部分置于-80 ℃条件
下保存,一部分以4%多聚甲醛固定。取经4%多聚甲醛 A.对照组 B.模型组
固定后的皮肤组织适量,经脱水、包埋、切片后,取部分
切片进行HE染色处理;经脱水、透明、封片后,采用光学
显微镜观察皮肤组织病理学形态变化,并采用 Image J
软件测量表皮厚度。采用GraphPad Prism 8软件进行统 C.铁皮石斛组
计学分析,数据以 x±s 表示(符合正态分布),多组间比 图2 各组小鼠皮肤组织病理学形态观察显微图(HE
染色)
较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;
检验水准 α=0.05(下同)。结果(图 1、图 2、表 1)显示, 表1 各组小鼠皮肤鳞屑评分和表皮厚度比较(x±s,
对照组小鼠无搔抓行为,背部皮肤无鳞屑;与对照组比 n=5)
组别 皮肤鳞屑评分/分 表皮厚度/μm
较,模型组小鼠有明显的搔抓行为,皮肤有大量鳞屑,表
对照组 0 1.00±0.22
皮角化过度、棘层肥厚,皮肤鳞屑评分和表皮厚度均显 模型组 2.30±0.27 a 2.47±0.36 a
著增加(P<0.05);与模型组比较,铁皮石斛组小鼠搔抓 铁皮石斛组 0.90±0.22 b 1.15±0.17 b
a:与对照组比较,P<0.05;b:与模型组比较,P<0.05。
行为和鳞屑减少,皮肤角化程度明显改善,皮肤鳞屑评
分和表皮厚度显著降低或减小(P<0.05)。 对照组比较,模型组小鼠皮肤组织中 Ki67、Filaggrin、
2.3 小鼠皮肤组织中表皮增殖与分化相关蛋白表达 Loricrin 蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组
检测 比较,铁皮石斛组小鼠皮肤组织中上述蛋白表达水平均
采用免疫荧光法检测。取“2.2”项下剩余切片,经 显著降低(P<0.05)。
脱蜡复水后进行抗原修复,再以山羊血清封闭 1 h;加 2.4 铁皮石斛干预干皮症的核心通路筛选及验证
入 Ki67、Filaggrin、Loricrin 抗体(稀释度均为 1∶100)于 2.4.1 核心通路筛选
4 ℃条件下孵育过夜;次日,加入相应二抗(稀释度为 取“2.2”项下各组3只小鼠的背部皮肤适量,根据试
1∶300)于室温条件下孵育1 h,再加入DAPI工作液室温 剂盒说明书方法提取 RNA,再将提取的 RNA 送至上海
避光孵育10 min,最后加入抗荧光淬灭封片液封片。采 派森诺生物公司进行16S rRNA测序;使用DESeq2软件
用激光共聚焦荧光显微镜观察(阳性蛋白染色后为绿色 进行组间的差异表达分析,将各组满足差异倍数>1.2
荧光,细胞核染色后为蓝色荧光),并使用 Image J 软件 或者<0.83 且满足 P<0.05 的基因标记为差异基因,绘
对阳性蛋白的荧光强度值进行定量分析(荧光强度值越 制火山图,然后进行KEGG和GO富集分析。
大,表示蛋白表达水平越高)。结果(图3、表2)显示,与 16S rRNA 测序结果(图 4)显示,与对照组比较,模
· 916 · China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 7 中国药房 2026年第37卷第7期

