Page 51 - 《中国药房》2026年5期
P. 51

2 方法                                               述细胞数均显著减少(P<0.05)。
          2.1 QDP的制备
              准确称量冬青叶480 g、丹参320 g、北沙参320 g、甘
          草 160 g、沙棘 160 g、苦杏仁 160 g、天竺黄 80 g,混合后
          用10倍量80%乙醇煎煮1 h,过滤;滤渣再用8倍量80%
          乙醇煎煮1 h,过滤;合并2次滤液,减压浓缩得七味冬青
          叶散浸膏(得率为12.33%)。                                        A.空白组           B.模型组         C. QDP低剂量组
          2.2 分组、造模、给药与取材
              将84只小鼠适应性饲养7 d后,随机分为空白组、模
                                          [13]
          型组、地塞米松组(阳性对照,2 mg/kg )和QDP低、中、
          高剂量组(200、400、800 mg/kg,以生药量计,剂量分别相
          当于临床等效剂量的0.5、1、2倍),每组14只。除空白组
          外,其余各组小鼠于第 1 天和第 14 天腹腔注射 0.2 mL                      D. QDP中剂量组      E. QDP高剂量组       F.地塞米松组
                                                                注:黑色箭头所指为淋巴细胞;蓝色箭头所指为巨噬细胞;红色箭
          OVA 致敏液(将 100 mg OVA、2 mg 氢氧化铝溶于 200
                                                             头所指为中性粒细胞。
          mL生理盐水中制备而成)致敏;再于第27天至第34天,                        图1 小鼠BALF中的细胞染色观察结果(瑞氏-吉姆萨
          将小鼠置于含有1% OVA(将500 mg OVA溶于50 mL生                       染色)
          理盐水制备而成)的超声雾化器中气道刺激 30 min,以
                                                             表1 小鼠 BALF 中不同细胞数量比较(x±s,n=8,
                              [13]
          此复制支气管哮喘模型 。空白组则同步腹腔注射与
                                                                  ×10  mL )
                                                                     4
                                                                         -1
          雾化吸入等体积的生理盐水。若气道刺激过程中造模
                                                              组别         总细胞数      淋巴细胞     中性粒细胞     巨噬细胞数
          小鼠出现搔鼻、腹部惊厥等症状,则表明造模成功。造
                                                              空白组        5.11±0.58  3.13±0.58  1.01±0.24  0.97±0.30
          模同时,于第21天至第34天,QDP各剂量组小鼠灌胃相                         模型组        17.41±0.54 a  7.30±0.74 a  5.32±0.45 a  4.79±0.51 a
          应药液;地塞米松组小鼠腹腔注射相应药液,空白组和                            QDP低剂量组    11.38±1.09 b  5.34±0.82 b  3.22±0.55 b  2.82±0.52 b
                                                              QDP中剂量组    7.71±0.92 b  4.36±0.41 b  2.12±0.32 b  1.23±0.37 b
          模型组小鼠灌胃和注射等体积生理盐水;每天给药1次。
                                                              QDP高剂量组    6.02±0.64 b  3.66±0.25 b  1.26±0.36 b  1.11±0.13 b
          整个过程中,模型组死亡3只小鼠,QDP低剂量组死亡2                          地塞米松组      6.13±0.65 b  4.02±0.31 b  1.18±0.48 b  0.93±0.11 b
          只小鼠,地塞米松组死亡1只小鼠,其余组无死亡。                               a:与空白组比较,P<0.05;b:与模型组比较,P<0.05。
              末次给药后次日,麻醉各组小鼠,尾静脉采血并制                         2.4.2 气管和肺组织的病理学形态观察
          备血清。取血完成后,暴露小鼠颈部气管,经气管向肺                               取“2.2”项下固定于 4% 多聚甲醛中的气管和肺组
          部注射0.4 mL生理盐水,重复3次,收集到1 mL肺泡灌                      织(每组取6只小鼠的气管和肺组织)适量,经脱水处理
          洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF);然后处死小
                                                             后包埋于石蜡中,再进行切片(厚度为5 μm);取部分切
          鼠,剖取气管和肺组织,取部分气管和肺组织以4%多聚
                                                             片(剩余切片进行免疫组化染色)进行苏木素-伊红(HE)
          甲醛固定 24 h,用于病理学形态观察,剩余肺组织置于
                                                             染色,再置于显微镜下观察气管和肺组织的病理损伤及
          液氮中保存备用。                                           炎症细胞浸润情况。结果(图2)显示,与空白组相比,模
          2.3 统计学方法
                                                             型组小鼠肺组织细胞排列紊乱,伴随大量炎症细胞浸
              采用 GraphPad Prism 9.5 软件进行统计学分析,数
                                                             润;肺部血管和气管壁明显增厚,支气管单层柱状上皮
          据以 x±s 表示,多组间比较采用单因素方差分析,进一
                                                             细胞脱落增多;与模型组相比,QDP 各剂量组和地塞米
          步两两比较采用LSD-t检验。检验水准α=0.05。
          2.4 常规指标检测和肺组织、气管病理学形态观察                           松组小鼠肺组织细胞排列趋于正常,炎症细胞浸润减
                                                             轻,支气管单层柱状上皮细胞脱落减少。
          2.4.1 BALF中的细胞观察
                                                             2.4.3 肺组织中MDA、NO、T-SOD、GSH-Px水平检测
              各组分别取 8 只小鼠的 BALF 适量,于 4 ℃条件下
                                                                 各组取 8 只小鼠的肺组织适量,加入适量生理盐水
          以 3 000 r/min 离心 10 min;取沉淀物用生理盐水重悬,
                                                             用组织研磨机研磨,得肺组织匀浆;于 4 ℃下以 3 500
          吸取10 μL混悬液置于显微镜下观察并进行BALF中总
          细胞计数。另吸取20 μL混悬液均匀涂于载玻片上,根                         r/min 离心 10 min,取上清液;根据相应试剂盒说明书方
          据试剂盒说明书方法操作进行瑞氏-吉姆萨染色,然后                           法操作,检测小鼠肺组织中 MDA、NO、T-SOD、GSH-Px
          置于显微镜下观察,对细胞(包括中性粒细胞、淋巴细                           水平。结果(表2)显示,与空白组比较,模型组小鼠肺组
          胞、巨噬细胞)进行分类并计数。结果(图1、表1)显示,                        织中 MDA、NO 水平均显著升高,T-SOD、GSH-Px 水平
          与空白组比较,模型组 BALF 中总细胞数、中性粒细胞                        均显著降低(P<0.05);与模型组比较,QDP 中、高剂量
          数、淋巴细胞数和巨噬细胞数均显著增加(P<0.05)。                        组和地塞米松组小鼠肺组织中MDA、NO水平均显著降
          与模型组比较,QDP各剂量组和地塞米松组BALF中上                         低,T-SOD、GSH-Px水平均显著升高(P<0.05)。


          中国药房  2026年第37卷第5期                                                 China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 5    · 597 ·
   46   47   48   49   50   51   52   53   54   55   56