Page 26 - 《中国药房》2026年1期

织中的退化神经元数（以呈绿色荧光的FJC阳性细胞数 3 结果
表示）。 3.1 姜黄素对模型大鼠神经功能和CSF中WBC计数、
2.7 海马及皮质组织中细胞凋亡检测 炎症因子含量的影响
采用TUNEL法进行检测。取“2.6.1”项下各组大鼠 与control组比较，model组大鼠改良Loeffler评分显
脑组织切片适量，经脱蜡、水化后，加入 1×蛋白酶 K 工 著降低，CSF 中 WBC 计数及 TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18
作液100 μL，于37 ℃下反应20 min；加入TdT平衡缓冲 水平均显著升高（P＜0.05）；与 model 组比较，姜黄素各
液 100 μL，于 37 ℃下平衡 30 min；加入标记工作液 50 剂量组大鼠改良 Loeffler 评分均显著升高，CSF 中 WBC
μL，于 37 ℃下避光孵育 1 h；加入 DAPI 染液适量，于室 计数及各炎症因子含量均显著降低（P＜0.05）；与Cur-H
温下避光孵育5 min；以抗荧光淬灭封片剂封片后，使用 组比较，Cur-H+2-NP 组大鼠改良 Loeffler 评分显著降
荧光显微镜观察染色结果并定量分析凋亡细胞百分比
低，CSF 中 WBC 计数及各炎症因子含量均显著升高
（以绿色荧光 TUNEL 阳性细胞数占细胞总数的百分比
（P＜0.05）。结果见表1。
表示）。
表1 各组大鼠改良Loeffler评分和CSF中WBC计数、
2.8 海马及皮质组织中Iba-1阳性表达和Iba-1、NLRP3 炎症因子含量比较（x±s，n＝15）
共定位检测
改良Loeffler WBC计数/ TNF-α/
采用免疫荧光法进行检测。取“2.6.1”项下各组大 组别 评分/分 （×10 L ） （pg/mL） IL-6/（pg/mL） IL-1β/（pg/mL） IL-18/（pg/mL）
－1
9
鼠脑组织切片适量，经脱蜡、水化后，以柠檬酸钠缓冲液 control组 4.93±0.25 0.16±0.03 28.95±2.88 17.57±2.41 44.49±5.58 56.14±6.50
a
a
a
a
进行抗原修复，再以5%BSA封闭1 h；加入Iba-1、NLRP3 model组 1.20±0.40 a 1.68±0.16 144.52±15.67 150.55±16.53 176.44±16.40 195.31±12.99 a
b
b
b
b
Cur-L组 2.27±0.57 b 1.02±0.11 104.59±12.96 103.46±12.68 117.16±12.19 148.63±13.69 b
一抗（稀释比例分别为1∶10、1∶30），于4 ℃下孵育过夜；
b
Cur-M组 3.00±0.52 b 0.48±0.08 b 85.76±9.70 b 81.17±6.05 b 83.91±7.36 117.61±9.41 b
加入 Alexa Fluor 647（用于检测 Iba-1 表达）和 Alexa Cur-H组 4.00±0.63 b 0.31±0.08 b 45.08±3.37 b 31.05±2.75 b 59.04±5.83 b 68.01±7.55 b
®
Fluor 488（用于检测 NLRP3 表达）标记的荧光二抗（稀 Cur-H+2-NP组 2.47±0.50 c 0.87±0.09 126.21±14.90 121.94±10.90 155.60±13.01 168.16±13.49 c
®
c
c
c
c
释比例均为 1∶50），于 37 ℃下避光孵育 1 h；加入 DAPI a：与control组比较，P＜0.05；b：与model组比较，P＜0.05；c：与Cur-
染液避光染色8 min，使用荧光显微镜观察并使用Image H组比较，P＜0.05。
J软件计算Iba-1阳性表达（以红色阳性表达区域的平均 3.2 姜黄素对模型大鼠脑含水量和血脑屏障通透性的
荧光强度表示）和Iba-1、NLRP3共定位阳性细胞百分比 影响
[以Iba-1（红色）和NLRP3（绿色）双阳性细胞数占细胞总 与 control 组比较，model 组大鼠的脑含水量、EB 含
数的百分比表示]。 量均显著升高（P＜0.05）；与 model 组比较，姜黄素各剂
2.9 海马及皮质组织中通路相关蛋白表达检测 量组大鼠的脑含水量、EB含量均显著降低（P＜0.05）；与
采用 Western blot 法进行检测。取“2.6.1”项下各组 Cur-H组比较，Cur-H+2-NP组大鼠的脑含水量、EB含量
3只大鼠经冻存的脑组织适量，以RIPA裂解液提取总蛋 均显著升高（P＜0.05）。结果见表2。
白，经BCA法定量后作变性处理。取变性蛋白适量，进 表2 各组大鼠的脑含水量和EB含量比较（x±s，n＝5）
行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并转移至 组别 脑含水量/% EB含量/（µg/g）
聚偏二氟乙烯膜上，以快速封闭液封闭 1 h；洗膜后，加 control组 71.40±2.23 1.80±0.10
入 STAT1、p-STAT1、NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1、 model组 88.88±2.29 a 6.19±0.41 a
Cur-L组 83.65±2.29 b 4.51±0.32 b
pro-caspase-1、IL-1β、IL-18、β-actin（内参）一抗（稀释比 Cur-M组 78.71±2.79 b 3.26±0.28 b
例分别为 1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、 Cur-H组 73.67±2.18 b 2.73±0.27 b
1∶500、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶2 000），于4 ℃下孵 Cur-H+2-NP组 84.72±2.52 c 5.08±0.36 c
育过夜；洗膜后，加入 HRP 标记的二抗（稀释比例为 1∶ a：与control组比较，P＜0.05；b：与model组比较，P＜0.05；c：与Cur-
H组比较，P＜0.05。
2 000），于37 ℃下孵育1 h；以ECL化学发光检测试剂盒
显色后，再于化学发光成像仪下成像。使用 Image J 软 3.3 姜黄素对模型大鼠海马及皮质组织病理学损伤的
件对蛋白条带灰度值进行分析，以 p-STAT1 与 STAT1、 影响
NLRP3与β-actin、ASC与β-actin、GSDMD与β-actin、cas‐ control组大鼠海马及皮质组织神经元结构完整，细
pase-1 与 pro-caspase-1、IL-1β 与 β-actin、IL-18 与 β-actin 胞丰富、排列整齐有序、形态规则、染色均匀；神经元内
的灰度值比值作为 p-STAT1、NLRP3、ASC、GSDMD、 含有丰富的尼氏小体，且未见退化神经元。与control组
caspase-1、IL-1β、IL-18的表达水平。 比较，model 组大鼠海马及皮质组织神经元形态明显异
2.10 统计学方法 常、呈不规则梭形，大量神经元水肿坏死，细胞核深染固
采用 GraphPad Prism 9.5.0 软件对数据进行统计分 缩、结构不清，并伴有明显的炎症细胞浸润；HE 染色评
析。实验数据以x±s表示，多组间比较采用单因素方差 分显著升高，尼氏小体数显著减少，退化神经元数显著
分析，进一步两两比较采用 Tukey’s 多重检验。检验水 增多（P＜0.05）。与model组比较，姜黄素各剂量组大鼠
准α＝0.05。 海马及皮质组织上述病理学损伤有不同程度改善，且

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