Page 25 - 《中国药房》2026年1期
P. 25
STAT1、磷 酸 化 STAT1 （phosphorylated STAT1，p- 2.3 CSF中白细胞计数及炎症因子含量测定
STAT1）、ASC、GSDMD、caspase-1 前体（pro-caspase-1）、 完成神经功能评分后，将各组大鼠麻醉，抽取其
IL-1β、IL-18、β-肌动蛋白（β-actin）抗体和山羊抗兔免疫 CSF。一部分以血细胞分析仪进行白细胞（white blood
®
球蛋白 G（IgG）H&L（Alexa Fluor 647）、山羊抗兔 IgG cell，WBC）计数；另一部分经离心后，采用ELISA法检测
®
H&L（Alexa Fluor 488）二抗（批号分别为 ab178846、 TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18含量，严格按照相应试剂盒说
ab263899、ab230428、ab109461、ab307560、ab219800、 明书操作。
ab179515、ab283818、ab191860、ab8227、ab150079、 2.4 脑含水量检测
ab150077）均购自英国 Abcam 公司；兔抗 caspase-1 抗 随后，每组随机选择 5 只大鼠，麻醉后处死，分离其
体、山羊抗兔辣根过氧化物酶（HRP）标记的IgG二抗（批 新鲜脑组织并称重，即为湿重；将脑组织于 100 ℃下干
号分别为 83383、7074）均购自美国 Cell Signaling Tech‐ 燥至恒重，即为干重；按下式计算脑含水量：脑含水量
nology 公司；RIPA 裂解液、BCA 蛋白定量试剂盒、ECL （%）＝（脑组织湿重－脑组织干重）/脑组织湿重×
化学发光检测试剂盒（批号分别为 abs9229、abs9232、 100%。
abs920）均购自爱必信（上海）生物科技有限公司。 2.5 血脑屏障通透性检测
1.3 实验动物 每组随机另选 5 只大鼠，尾静脉注射 0.5%EB 染色
随母鼠的新生SD大鼠90只，雌雄各半，10日龄，体 液（4 mL/kg），1 h 后将其处死，收集脑组织，匀浆后，于
重 18～20 g，购自北京希诺因生物科技有限公司，动物 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 20 min；取上清液，加入丙酮
生产许可证号为 SCXK（京）2022-0006。所有动物均饲 孵育 24 h（上清液与丙酮的体积比为 3∶7），于 4 ℃下以
养于 SPF 环境（温度 22～24℃，相对湿度 50%～60%，每 12 000 r/min离心20 min；收集上清液，用紫外-可见分光
12 h明暗循环）中，自由摄食、饮水。本研究方案经新乡 光度计在620 nm波长下测定脑组织中EB含量，以反映
市中心医院伦理委员会批准（意见号2024-013）。 血脑屏障通透性（二者成正比）。
2 方法 2.6 海马及皮质组织染色观察
2.1 造模、分组与给药 2.6.1 HE染色
将新生 SD 大鼠随机分为对照组（control 组）、模型 取每组剩余 5 只大鼠，麻醉后处死，收集其脑组织，
组（model 组）、姜黄素低剂量组（Cur-L 组）、姜黄素中剂 一部分迅速放入液氮中冻存，另一部分以 4% 多聚甲醛
量组（Cur-M 组）、姜黄素高剂量组（Cur-H 组）和姜黄素 溶液固定。取已固定的脑组织适量，制备常规石蜡切片
高剂量+STAT1 转录增强剂组（Cur-H+2-NP 组），每组 （厚约 5 µm）。取上述切片适量，经二甲苯脱蜡、乙醇复
15 只（雌鼠 7 只、雄鼠 8 只，或雌鼠 8 只、雄鼠 7 只）。除 水后，依次用苏木精染色 10 min、盐酸乙醇分化液分化
control 组外，其余各组大鼠根据相关文献 建立细菌性 30 s、伊红染色2 min，再经乙醇脱水、二甲苯透明后以中
[11]
脑膜炎模型：大鼠经 1% 戊巴比妥钠（20 mg/kg）腹腔注 性树脂封片，使用显微镜观察大鼠海马及皮质组织的病
射麻醉，以俯卧位固定于脑立体定位仪上，从小脑延髓 理变化，并基于细胞形态结构及细胞周围条件对 HE 染
池垂直进针，抽弃脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）10 色结果进行评分，具体标准为：正常，记0分；少量细胞损
μL，再缓慢注入 GBS 菌悬液（1×10 cfu/mL，以生理盐 伤，细胞周围无空泡，记1分；细胞损伤明显，细胞周围有
4
水为溶剂）10 μL（于 5 min 内完成注射，并留针 1 min）； 少量空泡，记2分；细胞损伤明显，细胞周围有明显空泡，记
[13]
若大鼠出现精神萎靡、毛发竖立、共济失调（步态不稳）、 3分；细胞大量受损，细胞周围可见大量空泡，记4分 。
震颤、抽搐等症状且改良 Loeffler 评分≤3 分，即为模型 2.6.2 尼氏染色
[12]
构建成功 。control 组大鼠同法抽弃 CSF 10 μL，再缓 取“2.6.1”项下各组大鼠脑组织切片适量，经脱蜡、
慢注入等体积生理盐水。 水化后，依次用亚甲基蓝染色10 min、酸性分化液分化1
[8]
造模后，参考既往研究 ，Cur-L、Cur-M、Cur-H 组大 min、钼酸铵溶液处理5 min，再经乙醇脱水、二甲苯透明
鼠分别腹腔注射姜黄素 1.25、2.5、5 mg/kg，Cur-H+2-NP 后封片，使用显微镜观察染色结果并统计海马及皮质组
组大鼠腹腔注射姜黄素 5 mg/kg 和 2-NP 0.5 mg/kg，con‐ 织中的尼氏小体数。
trol组和model组大鼠腹腔注射等体积生理盐水，每天1 2.6.3 FJC染色
次，连续3周。 取“2.6.1”项下各组大鼠经冻存的脑组织适量，用包
2.2 神经功能评分 埋剂包埋后，制作冷冻切片（厚约20 µm）。取上述切片，
[12]
末次给药 24 h 后，以改良的 Loeffler 评分法 评估 经乙醇复水后浸入 0.06% 高锰酸钾溶液中振摇 10 min，
大鼠神经功能，具体标准为：可正常活动，仰卧时可在5 s 加入 FJC 工作液避光孵育 20 min，以 DAPI 染液复染细
内翻身，记5分；自主活动减少，但5 s内能翻身，记4分；翻 胞核10 min；经乙醇脱水、二甲苯透明后，以抗荧光淬灭
身时间＞5 s，记3分；不能翻身，记2分；不能活动，记1分。 封片剂封片，使用荧光显微镜观察并记录海马及皮质组
中国药房 2026年第37卷第1期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 1 · 19 ·
