Page 50 - 《中国药房》2025年23期

表2 各组MKN45/DDP细胞的自噬水平及细胞中LC3 活保护性自噬途径来减弱化疗药物诱导的细胞死亡效
含量比较（x±s，n＝3） 应，进而产生细胞耐药 。适度的自噬在应激初期可能
[3]
组别 自噬体荧光强度 LC3/（pg/mL） 通过清除受损细胞器、提供能量而暂时保护细胞；然而，
模型组 51.70±5.92 605.48±14.38 持续或过度的自噬则可能通过降解关键生存蛋白、促进
DDP组 75.12±3.87 a 856.74±29.83 a [14]
复方蜥蜴散低剂量含药血清+DDP组 91.29±2.78 ab 1 049.24±32.51 ab 凋亡相关因子释放等，最终导致细胞死亡 。
复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP组 146.43±5.35 abc 1 211.49±14.97 abc 中医认为耐药性源于“毒瘀互结，邪毒深伏”。复方
a：与模型组比较，P＜0.05；b：与DDP组比较，P＜0.05；c：与复方蜥 蜥蜴散以密点麻蜥为君药，咸寒入络，善解“瘀毒”，能破
蜴散低剂量含药血清+DDP组比较，P＜0.05。 积聚、通瘀滞，取其“虫类搜剔”之性，直达病所；加以半
Bcl-2 26 kDa p-NF-κB p65 65 kDa 枝莲共同祛瘀毒以恢复自噬清除功能，激活异常细胞凋
Bax 21 kDa SNAIL 29 kDa 亡；再配以黄芪、白术、白芍、乌梅等通过扶正养阴来调
β-actin 42 kDa β-actin 42 kDa 控自噬适度激活、抑制过度自噬，避免正常细胞损伤；延
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
A. Bcl-2、Bax蛋白 B. p-NF-κB p65、SNAIL蛋白 胡索、甘草能通络调和。
Ⅰ：模型组；Ⅱ：DDP 组；Ⅲ：复方蜥蜴散低剂量含药血清+DDP 自噬是一种细胞降解和回收自身组分的过程，通过
组；Ⅳ：复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP组。 形成自噬小体包裹受损或不再需要的细胞组分，然后与
图3 各组 MKN45/DDP 细胞中 Bax、Bcl-2、p-NF-κB
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溶酶体融合，降解内容物 。LC3 是自噬小体的标志蛋
p65和SNAIL蛋白表达的电泳图
白，以LC3Ⅰ（细胞质形式）和LC3Ⅱ（膜结合形式）的形
表3 各组 MKN45/DDP 细胞中 Bax、Bcl-2、p-NF-κB 式存在。LC3 的前体首先被半胱氨酸蛋白酶 ATG4 切
p65和SNAIL蛋白的相对表达量比较（x±s，n＝3） 割，暴露出C末端的甘氨酸残基，形成可溶性的LC3Ⅰ；
组别 Bax/β-actin Bcl-2/β-actin p-NF-κB p65/β-actin SNAIL/β-actin 在自噬起始阶段，LC3Ⅰ与磷脂酰乙醇胺通过泛素化反
模型组 0.59±0.06 1.08±0.05 0.46±0.01 1.03±0.02 应结合，形成脂溶性的 LC3Ⅱ；自噬活性增强时，LC3Ⅰ
DDP组 0.71±0.03 0.97±0.08 0.35±0.04 a 0.79±0.02 a
复方蜥蜴散低剂量含药血清+DDP组 0.94±0.07 ab 0.75±0.06 a 0.21±0.04 ab 0.61±0.02 ab 向LC3Ⅱ的转化增加，使LC3Ⅱ的含量升高，LC3Ⅱ/LC3
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复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP组 1.08±0.12 abc 0.50±0.04 abc 0.12±0.01 abc 0.24±0.03 abc Ⅰ的比值也随之升高 。本研究结果显示，复方蜥蜴散
a：与模型组比较，P＜0.05；b：与DDP组比较，P＜0.05；c：与复方蜥 联合 DDP 干预可使 MKN45/DDP 细胞中自噬体荧光增
蜴散低剂量含药血清+DDP组比较，P＜0.05。 强，并可使细胞中自噬蛋白 LC3 含量升高，诱导细胞自
LC3Ⅰ 15 kDa 噬性死亡。这提示复方蜥蜴散可能通过激活自噬途径，
LC3Ⅱ
Bax 21 kDa 增强DDP对胃癌耐药细胞的杀伤作用，这或许是其逆转
GAPDH 37 kDa
MKN45/DDP细胞对DDP耐药的重要机制之一。
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
细胞凋亡的失衡是化疗耐药的重要特征，耐药的肿
Ⅰ：模型组；Ⅱ：复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP组；Ⅲ：TNF-α
组；Ⅳ：复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP+TNF-α组。 瘤细胞可能通过上调抗凋亡蛋白表达或下调促凋亡蛋
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图4 机制验证实验中各组耐药细胞中 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 白表达来抵抗化疗药物诱导的细胞死亡 。Bcl-2 家族
比值及Bax蛋白表达的电泳图 蛋白是细胞凋亡调控的关键因素，其中 Bcl-2 蛋白是最
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早被发现的抗凋亡蛋白，主要定位在线粒体外膜上 。
表4 机制验证实验中各组耐药细胞中 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ
比值及Bax蛋白的相对表达量比较（x±s，n＝3） Bcl-2通过抑制线粒体膜透化来阻止细胞色素C释放，从
而抑制细胞凋亡；Bax是一种重要的促凋亡蛋白，通过形
组别 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ Bax/GAPDH
模型组 0.89±0.06 0.67±0.04 成跨膜通道促进细胞色素C释放，从而启动凋亡级联反
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复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP组 1.19±0.03 a 1.04±0.10 a 应 。本研究通过 CCK-8 实验和 TUNEL 凋亡实验发
TNF-α组 0.74±0.03 a 0.51±0.03 a 现，复方蜥蜴散联合DDP干预可抑制MKN45/DDP细胞
复方蜥蜴散高剂量含药血清+DDP+TNF-α组 0.95±0.09 b 0.80±0.03 b
增殖，诱导细胞凋亡；进一步的Western blot实验验证了
a：与模型组比较，P＜0.05；b：与TNF-α组比较，P＜0.05。
复方蜥蜴散联合DDP可下调MKN45/DDP细胞中Bcl-2
4 讨论
蛋白表达，并上调Bax蛋白表达。这提示复方蜥蜴散可
DDP是一种被广泛用于临床的抗肿瘤药物，主要通
能通过重塑凋亡相关蛋白平衡，恢复耐药细胞的程序性
过与细胞DNA上的碱基形成交联，干扰DNA的复制和
死亡应答能力，从而逆转MKN45/DDP细胞对DDP的耐
[13]
转录，进而抑制肿瘤细胞增殖 。胃癌在中医属“胃脘
药性。
痛”“积聚”范畴，其发生发展以脾肾亏虚为根、痰瘀毒结 NF-κB/SNAIL 信号通路是调控肿瘤恶性进展的关
为标。DDP 等“苦寒攻伐”化疗药物的长期使用易使患 键通路之一，广泛参与肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移及耐
者耗伤气血、损伤脾胃，致正气亏虚失于运药，病邪日久 药等过程 。该信号通路被激活后，NF-κB 能直接上调
[20]
成“癥瘕顽积”，故需结合辨证调补正气、祛邪通络以改 转录因子SNAIL表达，诱导EMT，这也是驱动肿瘤细胞
[20]
善耐药状况。近年来的研究发现，肿瘤细胞可能通过激 侵袭与转移的关键环节 。另外，SNAIL可抑制凋亡相

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