Page 47 - 《中国药房》2025年23期
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胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤，死亡率高居第三                        （批号 HY-P1860，纯度≥98.5%）购自美国 MCE 公司；微
          位，其发生与幽门螺杆菌感染、不良饮食习惯及遗传易                           管 相 关 蛋 白 1 轻 链 3（microtubule-associated  protein  1
                      [1]
          感性密切相关 。尽管早期胃癌通过手术可根治，但多                           light chain 3，LC3）酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒
          数患者确诊时已是晚期，治疗效果差，生存率低。当前                          （批号061619461740616）购自上海江莱生物科技有限公
                                               [2]
          胃癌治疗以化疗、靶向药物和免疫治疗为主 ，而肿瘤细                          司；细胞自噬染色（MDC）试剂盒（批号K2287）购自美国
          胞对化疗药物[如顺铂（cisplatin，简写为“DDP”）]产生的                 APExBIO 公司；兔抗 Bcl-2 单克隆抗体、兔抗 Bcl-2 相关
          耐药性，是肿瘤复发转移和治疗失败的核心难题。                             X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）多克隆抗体（批
              研究表明，细胞自噬和凋亡途径异常与胃癌化疗耐                         号分别为4223、2772）均购自美国CST公司；兔抗磷酸化
                    [3]
          药密切相关 。在化疗药物作用下，肿瘤细胞可通过激                           NF-κB p65（p-NF-κB p65）多克隆抗体、兔抗SNAIL多克
          活自噬途径维持能量代谢来促进自身存活，并可通过调                           隆抗体、兔抗 β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体和辣根过
          控 B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）等蛋白家           氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二
          族抑制细胞凋亡，从而逃避药物杀伤 。另有研究表明，                          抗（批号分别为 AF2006、AF6032、AF7018、S0001）均购
                                         [4]
          核因子 κB（nuclear factor-κB，NF-κB）/SNAIL 信号通路         自美国 Affinity Biosciences 公司；兔抗甘油醛-3-磷酸脱
          的异常激活在肿瘤细胞耐药过程中发挥着关键作用，其                           氢酶（GAPDH）多克隆抗体（批号 AC2111013A）购自武
          可打破自噬-凋亡平衡，进一步加剧细胞耐药                 [5―6] 。因此，    汉赛维尔生物科技有限公司。
          靶向该信号通路以恢复细胞自噬-凋亡平衡，可能为逆                           1.3 动物与细胞
          转细胞耐药提供新策略。                                            本研究所用动物为 SPF 级雄性 SD 大鼠，共 30 只，
              本课题组前期研究发现，密点麻蜥能抑制由DDP耐                        6～8 周龄，体重 220～280 g，购自宁夏医科大学实验动
          药性胃癌细胞 MKN45/DDP 构建的裸鼠移植瘤的生                        物中心，动物使用许可证号为SYXK（宁）2020-0001。动
            [7]
          长 。复方蜥蜴散是以密点麻蜥为君药的用于治疗脾胃                           物饲养环境为光照、黑暗各 12 h 循环，相对湿度为
          病的临床经验方，具体由密点麻蜥、黄芪、白术、半枝莲、                         40%～60%，温度为 20～25 ℃；动物在饲养期间自由摄
          延胡索、山楂、白芍、乌梅、鹿角胶、甘草等组成，具有益                         食和饮水。本研究动物实验通过了宁夏医科大学实验
          气补阴、扶正抗癌、解毒通络的作用              [8―9] 。本课题组前期        动物中心实验动物福利伦理审查委员会审核（编号为
          研 究 已 证 实 该 方 可 通 过 调 节 上 皮 - 间 充 质 转 化            IACUC-NYLAC-2022-165）。
         （epithelial-mesenchymal transition，EMT）进程增强胃癌           DDP 耐药性胃癌细胞 MKN45/DDP（货号 CTCC-
          细胞对 DDP 的敏感性 。本研究旨在阐明复方蜥蜴散                         0520-NY）购自浙江美森细胞科技有限公司。
                             [10]
          含药血清逆转MKN45/DDP细胞耐药性的作用机制，即                        2 方法
          重点验证其是否通过抑制 NF-κB/SNAIL 信号通路，诱                     2.1 复方蜥蜴散水煎液、含药血清的制备
          导细胞凋亡及自噬性死亡，从而发挥逆转DDP耐药性的                          2.1.1 复方蜥蜴散水煎液的制备
          效应，为胃癌的临床治疗提供新策略。                                      取复方蜥蜴散组方药材（密点麻蜥 30 g、黄芪 30 g、
          1 材料                                               白术 15 g、半枝莲 30 g、延胡索 10 g、山楂 20 g、白芍 20
          1.1 主要仪器                                           g、鹿角胶15 g、乌梅5 g、甘草6 g），加水至总体积为1 000
              本研究所用的主要仪器有：HF100型二氧化碳细胞                       mL，浸泡30 min；以大火煮沸后转小火煎煮30～40 min，
          培养箱[力新仪器（上海）有限公司]，EVOS XL Core型倒                   煎煮至体积为 500 mL，过滤取药液；药渣加 800 mL 水，
          置显微镜、Multiskan GO 型酶标仪（美国 Thermo Fisher            同法再煎 20～30 min；合并 2 次滤液，小火煎煮，浓缩成
          Scientific 公司），Mini-PROTEAN Tetra 型蛋白电泳系统          质量浓度为6.88 g/mL（以生药量计，下同）的水煎液。根
         （美国Bio-Rad公司），Amersham Imager 680 RGB型超灵            据大鼠给药剂量需求，复方蜥蜴散17.2 g/kg组对应的药
          敏多功能成像仪（美国GE医疗公司），ECLIPSE C1型倒                     物质量浓度为1.72 g/mL（用生理盐水稀释），复方蜥蜴散
          置荧光显微镜（日本Nikon公司）。                                 68.8 g/kg 组直接使用母液（6.88 g/mL）。放凉后分装，
          1.2 主要药品与试剂                                        4 ℃冷藏备用。
              复方蜥蜴散的组方药材密点麻蜥、白术、黄芪、半枝                        2.1.2 复方蜥蜴散含药血清的制备
          莲、白芍、鹿角胶、乌梅、延胡索、山楂、甘草均购自宁夏                             将30只SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组
          医科大学附属中医医院（批号分别为2208036、1804052、                   和复方蜥蜴散17.2、68.8 g/kg组（分别相当于临床等效剂
                                                                        [10]
          1808123、2303340、1809146、2305020、1809011、2307204、   量的 1、4 倍） ，每组 10 只。复方蜥蜴散组大鼠灌胃相
          2206048、2305057），其中君药密点麻蜥经宁夏医科大学                   应剂量的复方蜥蜴散水煎液，灌胃体积为5 mL/kg；空白
          药学院刘艳华教授鉴定为密点麻蜥 Eremias multiocel‐                 对照组大鼠灌胃等体积生理盐水。每天给药2次，连续
          lata Günther的干燥全体，其余中药均由该单位中医学院                    7 d。末次灌胃1 h后，麻醉大鼠，心尖取血；将血样在冰
          李卫强教授鉴定为真品。                                        上静置3 h，离心取上清，56 ℃恒温水浴锅灭活30 min后
              肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）        于超净台上过滤，分装于无菌EP管中，保存于－80 ℃冰


          中国药房  2025年第36卷第23期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 23    · 2925 ·
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