Page 28 - 《中国药房》2025年19期
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由获取水和食物。本动物实验经浙江中医药大学动物                            （degree centrality，DC），分别以大于 CC、BC、DC 中位数
                                                                                    [11]
          管理与伦理委员会批准（批号：IACUC-20230130-03）。                   为阈值筛选得到关键靶点 。
          2 方法与结果                                                 结果显示，ZSD 治疗失眠的潜在靶点的 PPI 网络包

          2.1 网络药理学预测ZSD抗失眠的作用机制                              含295个节点和609条边，平均度值为4.13，平均局部聚
          2.1.1 ZSD中枢活性成分筛选及失眠相关靶点筛选                          类系数为 0.482。通过插件 Centiscape 2.2 计算得 CC、
              由于失眠与中枢神经系统密切相关，以血脑屏障                           BC、DC，选取 CC＞0.001 159、BC＞694.816 901、DC＞
         （blood-brain barrier，BBB）评分≥－0.3 分（BBB 评分越           5.586 854 的靶点作为关键靶点，结果共筛选出 35 个关
                                      [9]
          高，表明血脑屏障渗透性越好） 、口服生物利用度≥                            键靶点，包含Akt1等（图略）。
          30% 和药物相似度≥0.18 作为筛选标准，利用 TCMSP                     2.1.3 基因本体和京都基因与基因组百科全书通路富
                                                       [10]
          数据库（http：//tcmspnw.com）获取 ZSD 的活性成分 。               集分析
                                                                  将 筛 选 出 的 关 键 靶 点 输 入 Metascape 在 线 平 台
          同时，利用 TCMIP 数据库（http：//www.tcmip.cn/）补充
                                                             （http：//www.metascape.org/）用于基因本体（Gene Onto-
          ZSD 的化学成分信息，筛选出药物类特性（quantitative
                                                              logy，GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书
          estimate of drug-likeness，QED）评分为中等和良好（QED
                                                             （Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通
          评分≥0.49分）、BBB评分≥－0.3分的成分。将TCMIP
                                                              路富集分析，限定物种为“人”，以 P＜0.01、富集因子＞
          和 TCMSP 数据库获得的 ZSD 的有效成分进行合并，通
                                                                            [12]
                                                              1.5 为筛选标准 。通过在线绘图网站微生信平台
          过 PubChem 数据库（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）
                                                             （http：//www.bioinformatics.com.cn/）进行可视化分析。
          进行标准化处理，并删除重复和无效数据，得到 ZSD 的
                                                              结果显示，GO富集分析得到4 138个具有代表性的功能
          中枢活性成分。将这些中枢活性成分输入 SwissTarget‐
                                                              簇，保留前20个富集结果进行分析，这些功能簇主要富
          Prediction 数据库（http：//www.swisstargetprediction.ch/）
                                                              集于氧化应激、激素调控等通路。KEGG通路富集分析
          进行潜在靶点预测。以“insomnia”“sleep initiation dys‐
                                                              共得到 244 条信号通路（P＜0.01），前 20 条信号通路中
          function”“sleeplessness”“early awakening”为关键词，在
                                                              包括氧化应激通路，与 GO 富集分析结果一致。使用
          GeneCards（https：//www.genecards.org）、OMIM（https：//
                                                              Metascape在线平台对交集靶点进行KEGG通路富集分
          www.omim.org）和 DisGeNET（https：//www.disgenet.org）
                                                              析，结果显示，交集靶点主要富集于磷脂酰肌醇-3-激酶
          数据库中检索失眠相关靶点，汇总整理并去重后，获取
                                                             （phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/Akt 信 号 通 路
          失眠相关靶点。利用 Jvenn 在线平台（https：//www.bio‐
                                                             （图略）。
          informatics.com.cn/static/others/jvenn/index.html）对 ZSD
                                                              2.2 动物实验验证ZSD抗失眠的作用机制
          中枢活性成分的潜在靶点和失眠相关靶点取交集，得到
                                                              2.2.1 ZSD的制备
          两者的交集靶点。使用Cytoscape 3.7.2软件构建“药物-
                                                                  取酸枣仁15 g、知母10 g、川芎10 g、茯苓15 g、焦栀
          活性成分-作用靶点”网络。
                                                              子10 g、淡豆豉10 g、生地黄10 g、炙甘草6 g，混合，加10
              结果显示，通过检索 TCMSP 和 TCMIP 数据库共得
                                                              倍量水浸泡40 min，煎煮1 h后倒出；药渣再加5倍量水，
          到 103 个中枢活性成分，共对应 915 个潜在靶点。利用                      煎煮40 min后倒出。合并2次水煎液，抽滤后浓缩，分别
          GeneCards、DisGeNET、OMIM 数据库获得失眠相关靶                  制备成质量浓度为 11、22、33 g/kg（以饮片总量计）的
          点共2 516个，其中得到的交集靶点共296个（图略）。                        ZSD水煎液，备用。
          2.1.2 蛋白质-蛋白质相互作用网络构建与关键靶点                          2.2.2 分组与造模
          筛选                                                      小鼠适应性喂养 1 周后，将其随机分为假手术组
              将 交 集 靶 点 数 据 导 入 STRING 数 据 库（https：//        （Sham 组），模型组（OVX 组），ZSD 低、中、高剂量组

          string-db.org），限定物种为“人”，设置最低置信度分数为                 （ZSD-L、ZSD-M、ZSD-H 组）和右佐匹克隆组（阳性对
          0.9 分，构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein in‐             照，ESZ组），每组10只。除Sham组外，其余各组小鼠均
          teraction，PPI）网络。将 PPI 网络图导入 Cytoscape 3.7.2        采用卵巢切除术（ovariectomy，OVX）构建围绝经期失眠
          软件进行可视化分析，利用 Cytoscape 3.7.2 中的 Analy‐              模型，具体步骤如下：将小鼠固定在手术台上，用凡士林
          sisNetwork 模块对复杂网络关系进行分析，通过 Centi‐                  保护眼睛；用异氟烷将小鼠麻醉后，沿背部中线剃毛并
          scape  2.2 插 件 计 算 接 近 中 心 性（closeness  centrality，  消毒；在背部下方两侧剪开约 0.5 cm 的皮肤切口，分离
          CC）、中介中心性（betweenness centrality，BC）、度中心性           脂肪和肌层，小心摘除卵巢并结扎输卵管；伤口用青霉


          · 2374 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 19                            中国药房  2025年第36卷第19期
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