Page 51 - 《中国药房》2025年17期

RNA 提取试剂盒（批号 R6934-01）购自美国 Omega 公 部皮下注射 D-半乳糖 125 mg/kg（每日 1 次，连续 5 周）；
司；苏木素-伊红（HE）染色试剂盒（批号 G1120）购自北 同时对小鼠持续限食（进食量为空白组小鼠进食量均值
京索莱宝科技有限公司；兔源磷酸化 RyR2（p-RyR2）、 的 30%），并让其负重游泳至力竭[负重约 5% 体重的重
RyR2、磷酸化 PLB（p-PLB）、PLB 多克隆抗体和鼠源 β- 物并游泳至疲倦（以鼻子持续低于水面 5 s 为标准），每
肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（批号分别为 ab2845459、 日1次，连续5周]，以建立气阴两虚型HF小鼠模型。造
ab302716、ab15000、ab219626、ab8226）均 购 自 英 国 模的同时，各给药组小鼠灌胃相应药液，空白组和模型
Abcam 公司；山羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗、山羊抗鼠免 组小鼠灌胃等体积水，每天1次，连续5周。本研究中部
疫球蛋白G二抗（批号分别为20001471、20001399）均购 分组别小鼠有死亡和造模不成功的情况，故每组选择 8
自武汉三鹰生物技术有限公司；B 细胞淋巴瘤 2（B-cell 只进行后续实验。
lymphoma 2，Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2-associated 2.3 小鼠一般状态及中医证候评分
X protein，Bax）、剪切型胱天蛋白酶 3（Cleaved-caspase- 造模前和末次给药后，记录各组小鼠体重及体温，
3）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate 观察小鼠一般状态；参照《慢性心力衰竭中医诊疗专家
[14]
[15]
dehydrogenase，GAPDH）的 PCR 引物由生工生物工程 共识》 及《中药新药临床研究指导原则（试行）》 中HF
（上海）股份有限公司合成并提供，具体引物序列及扩增 的中医症状分级量化评分表进行中医证候评分。
产物长度见表1。 2.4 行为学实验
表1 PCR引物序列及扩增产物长度 2.4.1 旷场实验
引物名称 引物序列（5′→3′） 扩增产物长度/bp 末次给药 0.5 h 后开始旷场实验。将旷场分析箱设
Cleaved-caspase-3 上游：TCTGACTGGAAAGCCGAAACTCTTC 84 置为大小相同的16格，并以从上到下、从左到右的顺序
下游：GTCCCACTGTCTGTCTCAATGCC
Bcl-2 上游：CCGTCGTGACTTCGCAGAGATG 97 编号，以中间的 6、7、10、11 格为中心格，以其余 12 格作
下游：ATCCCTGAAGAGTTCCTCCACCAC 为边缘格。每次测定时先开启拍摄与计时功能，再提起
Bax 上游：GCTACAGGGTTTCATCCAGGATCG 140 小鼠尾部将其轻柔地放入旷场分析箱中心，使其自由活
下游：TGCTGTCCAGTTCATCTCCAATTCG
GAPDH 上游：ACGGCAAGTTCAACGGCACAG 145 动，共拍摄 5 min。将小鼠木僵时间与总时间的比值记
下游：CGACATACTCAGCACCAGCATCAC 为木僵时间百分比，同时提取系统后台采集的旷场行动
1.3 实验动物 总距离。
本研究所用动物为健康 SPF 级雄性 BALB/c 小鼠， 2.4.2 游泳力竭实验
共 60 只，8 周龄，体重 18～22 g，购于河北伊维沃生物科 于旷场实验结束后2 h开始实验。在小鼠的尾端系
技有限公司，动物生产许可证号为SCXK（冀）2020-002。 上约5%体重的重物，然后将其放入25 ℃恒温水箱中游
购入后，动物饲养于河北中医药大学实验动物管理中 泳，保持水深 35 cm 左右。记录小鼠从入水到鼻子持续
心，环境温度为23～25 ℃、相对湿度为40%～60%、12 h 低于水面5 s所用的时间，即为游泳力竭时间。
光/12 h 暗交替，实验动物使用许可证号为 SYXK（冀） 2.5 小鼠心功能相关指标检测
2022-010。实验程序经河北省中医院医学伦理委员会 于游泳力竭实验2 h后，每组取5只小鼠进行心功能
批准，批准号为HBZY2022-YS-228-01。 检测。去除小鼠剑突至颈部间的毛发，以异氟烷（2%～
2 方法 3%）麻醉小鼠后，将其仰卧位固定在恒温操作台上，于
2.1 生脉散的制备 胸部涂抹耦合剂；采用高分辨率小动物超声成像系统获
将生脉散组方中各饮片的配方颗粒按照相应比例 取小鼠M型超声心动图和B型超声影像图，同时计算心
（人参、麦冬、五味子的质量比为10∶15∶6）调制成混合颗 率、左心室射血分数（left ventricular ejection fraction，
粒，加适量沸水搅拌溶解后备用。后续根据生药给药量 LVEF）、左心室收缩末内径（left ventricular end systolic
给予对应剂量药液。 diameter，LVESD）、左心室舒张末内径（left ventricular
2.2 分组、建模与给药 end diastolic diameter，LVEDD）、左心室质量指数（左心
使用随机数字表法将小鼠随机分为空白组、模型组 室质量指数＝左心室质量/体重×100%）和全心质量指
和生脉散低、中、高剂量组[2.61、5.22、10.44 g/kg（以生药 数（全心质量指数＝心脏质量/体重×100%）以评定小鼠
量计），剂量分别为临床等效剂量的 0.5、1、2 倍]以及阳 心脏的泵血、收缩功能及心室重塑情况。
性对照组（美托洛尔，30 mg/kg，剂量为临床等效剂量）， 2.6 小鼠血清中CK、LDH及AST含量检测
每组10只。所有小鼠适应性喂养3 d，除空白组外，其余 超声检测后对小鼠进行摘眼球取血，将全血常温下
各组小鼠均参考文献[11―13]中方法进行造模：小鼠颈 静置30 min后，以3 000 r/min离心15 min，取上层血清，

中国药房 2025年第36卷第17期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 17 · 2129 ·