Page 76 - 《中国药房》2025年15期

－NIR

+NIR

A.空白组 B. PDA纳米粒组 C. VH组 D. VH@PDA纳米粒组
－NIR：无近红外激光照射；+NIR：有近红外激光照射。
图3 琼脂平板法考察结果
2.6.2 活/死细菌染色法考察 5）显 示 ，与 空 白 组 相 比 ，PDA 纳 米 粒 组 、VH 组 、
将金黄色葡萄球菌按“2.6.1”项下方法分组、给药， VH@PDA纳米粒组金黄色葡萄球菌的生物膜形态均被
以近红外激光照射300 s后，以5 000 r/min离心5 min，取 破坏；其中VH@PDA纳米粒组的破坏作用最明显，与琼
沉淀；经生理盐水洗涤3次后，用500 μL生理盐水重悬， 脂平板法、活/死细菌染色法考察结果相一致。
加入 1.5 μL 混合染料（DAPI 与 PI 以 1∶1 混合），每隔 5 2.7 VH@PDA纳米粒的生物相容性考察
4
min 振荡混匀，于室温下避光培养 30 min；取 5 μL 滴在 将 L929 细胞按 1×10 个/孔接种于 96 孔板中，分为
载玻片上，盖上盖玻片静置 10 min 后，使用倒置荧光显 不同质量浓度（0、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μg/mL，
微镜观察，统计死细菌和活细菌的荧光强度（死细菌被 以VH@PDA纳米粒计）VH@PDA纳米粒组，每组设置3
染成红色），并计算死细菌比例（死细菌比例＝死细菌数/ 个复孔；孵育 24 h 后，采用 CCK8 检测试剂盒测定各组
细菌总数×100%）。每组重复 3 次。采用 GraphPad 细胞活力。结果（图6）显示，随着VH@PDA纳米粒质量
Prism 9.5.1软件进行统计学分析，数据以x±s表示，多组 浓度的增加，L929 细胞存活率虽略有下降，但均高于
间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 80%，表明VH@PDA纳米粒具有较好的生物相容性。
LSD-t检验，检验水准α＝0.05。结果（图4）显示，与空白 3 讨论
组（5.29±1.27）% 相 比 ，PDA 纳 米 粒 组 、VH 组 和 目前，治疗细菌感染最大的挑战是细菌耐药，因此，
VH@PDA 纳 米 粒 组 死 细 菌 比 例 [ 分 别 为（17.90± 为了避免细菌耐药及提高疗效，临床上常使用多种药物
6.53）%、（24.86±6.13）%和（57.93±0.64）%]均显著升高 联合治疗细菌感染 ；除此之外，相关研究也报道了抗
[13]
（P＜0.05）；与 PDA 纳米粒组、VH 组相比，VH@PDA 纳 生素联合其他方法治疗细菌感染，如活性纳米载体联合
[14]
米粒组死细菌比例显著升高（P＜0.05）。 抗生素、PTT联合抗生素等治疗策略 。
2.6.3 结晶紫染色法考察 PTT作为一种新兴的非抗生素抗菌疗法，其利用高
将金黄色葡萄球菌按“2.6.1”项下方法调整浓度后， 光热转化效率的材料在近红外激光诱导下将光能转化
加入96孔板中，再按“2.6.1”项下方法分组、给药，每组设 为热能，通过产生局部高温而破坏细菌细胞壁以达到抗
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3个复孔，以近红外激光照射300 s后，于37 ℃条件下培 菌效果 。PDA作为黑色素之一，其吸收波长从紫外光
养 48 h；待孔板中形成生物膜后用磷酸盐缓冲液洗涤， 到可见光并一直延伸至近红外区域，相关研究发现，
以去除游离菌；加入甲醇固定并自然风干后，每孔加入 PDA纳米粒的光热转化效率高达40%，已超过公认的金
[16]
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1% 结晶紫溶液染色 15 min；洗净多余的结晶紫并置于 纳米棒的转化效率 。Liu等 通过合成Fe3O4@PDA纳
37 ℃烤箱中烘干，采用倒置荧光显微镜观察生物膜形态 米粒，再负载热休克蛋白 70 抑制剂 2-苯乙炔磺酰胺，形
结构（紫色越深表明细菌生物膜越完整，药物抑制作用 成新型协同抗菌纳米复合物；将该纳米复合物置于近红
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越小；紫色越浅则表明药物抑制作用越强 ）。结果（图 外激光下照射，可释放 2-苯乙炔磺酰胺，并特异性干扰

· 1890 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 15 中国药房 2025年第36卷第15期