Page 60 - 《中国药房》2025年15期

2.2.4 单味饮片对照溶液、缺味阴性样品溶液制备 谱峰，分别是 1 号峰腺嘌呤、7 号峰 5-羟甲基糠醛、10 号
取处方量的饮片，按“2.2.1”项下方法制备单味饮片 峰延胡索乙素、15 号峰柚皮苷、16 号峰脱氢紫堇碱、17
对照溶液和缺味阴性样品溶液。 号峰新橙皮苷和 19 号峰甘草酸。将健脾和胃方供试品
2.3 指纹图谱的建立及分析 溶液（编号S3）图谱与单味饮片对照溶液图谱、缺味阴性
2.3.1 方法学考察 样品溶液图谱（分别取“2.2.4”项下单味饮片对照溶液、
（1）精密度：取健脾和胃方样品（编号S3），按“2.2.3” 缺味阴性样品溶液按“2.1”项下色谱条件进样测定所得）
项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进 进行比对可知，1～4号峰为各饮片水煎液共有；7号峰和
样测定6次。以15号峰（柚皮苷）为参照峰，计算各特征 8号峰归属于焦三仙（焦麦芽、焦神曲、焦山楂）；9号峰归
峰相对保留时间和相对峰面积，其RSD分别小于0.61% 属于莪术；10、11、13、14 和 16 号峰归属于延胡索；12 和
和1.94%（n＝6），表明方法精密度良好。 19号峰归属于甘草；15、17和18号峰归属于枳壳；5号峰
（2）稳定性：取健脾和胃方样品（编号S3），按“2.2.3” 归属于白术和木香；6 号峰归属于党参和白术。结果见
项下方法制备供试品溶液，在室温下分别放置0、2、4、6、 图2、图3。
8、10、12、24 h时，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以15
3 000
号峰（柚皮苷）为参照峰，计算各特征峰相对保留时间和 供试品溶液
2 500 混合对照品溶液
相对峰面积，其RSD分别小于1.10%和2.93%（n＝8），表 延胡索
2 000 焦三仙
明供试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。 1 500 枳壳
（3）重复性：取健脾和胃方样品（编号S3），按“2.2.3” U/mV 木香
1 000 甘草
项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条 莪术
500 党参
件进样测定。以15号峰（柚皮苷）为参照峰，计算各特征 白术
0
峰相对保留时间和相对峰面积，其RSD分别小于0.61% 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
t/min
和1.71%（n＝6），表明方法重复性良好。
1：腺嘌呤；7：5-羟甲基糠醛；10：延胡索乙素；15：柚皮苷；16：脱氢
2.3.2 指纹图谱建立及相似度评价 紫堇碱；17：新橙皮苷；19：甘草酸。
取 15 批健脾和胃方样品（编号 S1～S15），分别按 图2 供试品溶液、混合对照品溶液及各单味饮片对照
“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件 溶液的HPLC叠加图
进样测定，记录 HPLC 色谱图。将相关色谱数据导入
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，选取编 2 500 供试品溶液
号 S3 样品的图谱为参照图谱，设置时间窗宽度为 0.1 2 000 缺延胡索阴性样品溶液
缺木香阴性样品溶液
min，采用中位数法，进行多点校正和全峰匹配，生成 15 1 500 缺焦三仙阴性样品溶液
批样品的叠加指纹图谱及其对照谱图 R，详见图 1。以 U/mV 缺甘草阴性样品溶液
缺白术阴性样品溶液
对照图谱R为参照，计算15批健脾和胃方样品图谱的相 1 000 缺枳壳阴性样品溶液
500 缺莪术阴性样品溶液
似度。结果显示，15批样品共标定出19个共有峰；15批样
缺党参阴性样品溶液
品图谱与对照图谱 R 的相似度在 0.956～0.998 之间，均 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
大于0.95，表明不同批次样品间具有高度相似性。 t/min
图3 供试品溶液和各缺味阴性样品溶液的 HPLC 叠
5 000
4 500 加图
4 000
3 500 2.4 化学模式识别分析
3 000 2.4.1 HCA
U/mV 2 500
2 000 将 15 批样品的共有峰峰面积导入 SPSS 22.0 软件，
1 500 采用组间连接、平方欧氏距离法进行HCA。结果（图4）
1 000
500 显示，当平方欧氏距离为15时，15批样品可聚为3大类：
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 编号为 S4～S5、S7～S8、S11～S12、S15 的样品聚为第 1
t/min 类；编号为S9的样品为第2类；编号为S1～S3、S6、S10、
图1 15批样品的HPLC叠加指纹图谱及其对照图谱R
S13～S14的样品聚为第3类。该结果表明，各批次样品
2.3.3 共有峰的指认及归属 的成分有一定差异。
将健脾和胃方供试品溶液（编号 S3）图谱与混合对 2.4.2 PCA
照品溶液图谱（取“2.2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1” 以 15 批样品的共有峰峰面积为变量，将其导入
项下色谱条件进样测定所得）进行比对，共指认出7个色 SIMCA 14.1软件进行PCA。以特征值＞1为筛选标准，

· 1878 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 15 中国药房 2025年第36卷第15期