Page 54 - 《中国药房》2025年13期
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an  liquid  chromatography-tandem  mass  spectrometry  method  for  the  determination  of  CLP  and  its  three  metabolites，  and  revealed
          their  pharmacokinetic  characteristics  in  rats.  Specifically，  the  parent  drug  CLP  was  rapidly  eliminated，  while  the  inactive
          metabolites CLP-C and CLP-G exhibited long half-lives， and active metabolite CAM displayed a transient exposure pattern.
          KEYWORDS     clopidogrel；  metabolites；  liquid  chromatography-tandem  mass  spectrometry  method；  pharmacokinetics；  plasma
          concentration



              氯吡格雷（clopidogrel，CLP）是一种噻吩并吡啶类                  CAM 衍生物（racemic CAM derivative，CAMD）对照品
          抗血小板药物，在急性冠脉综合征预防、经皮冠状动脉                           （批号5-MNZ-188-22，纯度98.0%）均购自加拿大Toronto
          介入治疗及缺血性脑卒中血栓防治中具有重要临床意                             Research  Chemicals 公 司 ；2- 溴 -3′- 甲 氧 基 苯 乙 酮（2-
          义。该药说明书指出，约85%的CLP通过羧酸酯酶Ⅰ水解                         bromo-3′-methoxyacetophenone，MPB；批 号 STBF4711
          为无活性代谢物氯吡格雷羧酸（clopidogrel carboxylate，              V，纯度 98.0%）购自美国 Sigma-Aldrich 公司；硫酸氢氯
          CLP-C），随后经Ⅱ相代谢生成氯吡格雷酰基-β-D-葡糖                       吡格雷片（批号 7A505，规格 75 mg）购自赛诺菲（杭州）
          醛酸（clopidogrel acyl-β-D-glucuronide，CLP-G），且只有      制药有限公司；质谱纯甲酸购自美国 J.T.Baker 公司；色
          约15%的CLP经过细胞色素P450酶（cytochrome P450，                谱纯甲醇和乙腈购自美国Thermo Fisher Scientific公司；
          CYP450）转化为含巯基的氯吡格雷活性代谢产物（clopi‐                     其余试剂均为分析纯。
          dogrel active metabolite，CAM）；后者通过与血小板表面            1.3 实验动物
          P2Y12 受体结合，抑制血小板聚集，从而发挥抗血小板                             本 研 究 所 用 动 物 为 SPF 级 雄 性 SD 大 鼠 ，体 重
          作用  [1―2] 。                                        （180±10）g，购自北京维通利华生物技术有限公司，动
              CLP的药动学特征非常复杂，其原型药物在血浆中                         物生产许可证号为 SCXK（京）2021-0006。所有大鼠均
                                                        [3]
          的浓度较低，其代谢产物CLP-C在血浆中的浓度较高 。                         饲养于中国中医科学院西苑医院动物室，实验期间自由
          虽然早期研究表明，CLP-C与CLP临床药效的相关性较                         进食、饮水。本研究经中国中医科学院西苑医院医学伦
          弱 [4―5] ，但另有研究指出，羧酸酯酶Ⅰ的活性变化会影响                      理委员会批准，伦理批件号为2024XLC005-2。
                                                  [6]
          CLP-C 的浓度，从而间接影响 CLP 的临床疗效 。由此                      2 方法与结果
          可见，对 CLP 原型药物及其活性/无活性代谢物的浓度                         2.1 溶液的配制
          变化进行同时监测，对于阐明其体内代谢规律、优化给                            2.1.1 对照品储备液
          药方案及评估临床疗效至关重要。目前，虽然已有关于                                精密称取CLP、CLP-C、CAMD对照品各1 mg，分别
          CLP 的代谢研究      [7―9] ，但是关于 CLP、CLP-C、CLP-G 及        加入乙腈溶解成质量浓度为 1 mg/mL 的单一对照品储
          CAM 的暴露特征及药动学参数的研究仍然缺乏，而这                           备液，置于－35 ℃冰箱中保存，待用。
          一研究对连接基础研究与临床转化具有重要作用。基                             2.1.2 内标溶液
          于此，本研究拟建立同时测定 CLP、CAM、CLP-C 及                           精密称取LTD对照品1 mg，加入乙腈溶解成质量浓
          CLP-G含量的液相色谱串联质谱（liquid chromatography-             度为 1 mg/mL 的内标储备液；取内标储备液适量，以乙
          tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法，并基于该方           腈稀释，制成质量浓度为25 ng/mL的内标溶液。
          法分析上述成分在大鼠体内的代谢特征，以期为CLP的                           2.2 标准血浆样品和质控血浆样品的制备
          临床应用提供实验参考。                                             分别取 CLP、CAMD 对照品储备液适量，以乙腈稀
          1 材料                                                释，得到质量浓度均为 20 μg/mL 的单一对照品溶液。
          1.1 主要仪器                                            取上述单一对照品溶液及CLP-C对照品储备液适量，置
              本研究所用质谱系统为 API 4000 QTRAP，配有                    于同一容量瓶中，以乙腈稀释，制成CLP、CAMD、CLP-C
          Turbo V 离子源仓、离子喷雾和大气压电离离子源以及                        质量浓度分别为 0.20、0.25、80 μg/mL 的标准混合工作
                 TM
          Analysis 1.4.2 数据处理系统，购自美国 Applied Biosys‐          液。取上述标准混合工作液适量，以空白血浆（提前加
          tems 公司；液相色谱系统为 Agilent 1200，配有 G1379B              入4%MPB）稀释10倍，混匀，得到各成分质量浓度分别
          脱气机、G1312A 二元泵等，购自美国 Agilent 公司；DW-                 为 20.00、25.00、8 000.00 ng/mL 的标准血浆样品。另取
          FL362 型超低温冰箱购自长虹美菱股份有限公司；                           空白血浆适量，加入不同质量浓度的标准混合工作液，
          MS205DU型电子分析天平购自瑞士Mettler Toledo公司。                 配制成各成分定量下限和低、中、高质量浓度的质控血
          1.2 药品与试剂                                           浆样品（即QC样品）。
              CLP 对照品（批号 100819-201504，纯度 99.9%）、氯            2.3 血浆样品的前处理
          雷他定（loratadine，LTD）对照品（内标，批号 100615-                    将血浆样品在 37 ℃下解冻，精密量取 50 μL，加入
          201404，纯度 99.9%）购自中国食品药品检定研究院；                      200 μL 内标溶液，涡旋 2 min，于 4 ℃条件下以 12 000
          CLP-C 对照品（批号 11-ZCA-53-1，纯度 98.0%）、外消旋              r/min离心5 min，取上清液进样分析。


          · 1600 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 13                            中国药房  2025年第36卷第13期
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