Page 56 - 《中国药房》2025年13期

2.5.2 线性关系考察 表4 大鼠血浆中各待测成分的基质效应考察结果
取“2.2”项下标准血浆样品适量，逐级稀释后，获得 待测成分 质量浓度/（ng/mL） 基质因子（x±s） 变异系数/%
系列浓度的线性标准血浆样品，然后按“2.4”项下条件进 CLP 0.51 0.67±0.06 8.47
样分析，以待测成分质量浓度为横坐标（x）、待测成分与 3.20 0.63±0.06 10.23
20.00 0.64±0.07 10.26
内标的峰面积比值为纵坐标（y）进行回归分析，结果见 CLP-C 512.00 1.22±0.11 8.90
表 2。结果显示，各待测成分均在各自质量浓度范围内 1 280.00 1.00±0.04 3.52
具有良好的线性关系（r≥0.990），CLP、CLP-C和CAMD 8 000.00 1.00±0.06 5.72
的定量下限分别为0.08、205.00、0.04 ng/mL。 CAMD 0.10 0.88±0.11 12.61
4.00 0.77±0.05 6.99
表2 CLP及其代谢产物的线性关系考察结果 25.00 0.68±0.06 8.58
待测成分 标准曲线 r 线性范围/（ng/mL） 的QC样品，每一质量浓度平行制备3份，按“2.3”项下方
CLP y＝0.010 60x+0.000 334 0.996 0.08～20.00
CLP-C y＝0.003 03x+0.000 430 0.990 205.00～8 000.00 法处理，考察处理后的 QC 样品在室温放置 2 h、进样器
CAMD y＝0.010 81x+0.000 308 0.991 0.04～25.00 放置24 h、－35 ℃下反复冻融3次及－35 ℃下储存7周
2.5.3 精密度和准确度考察 的稳定性。结果显示，样品中CLP、CLP-C和CAMD在上
取“2.2”项下各成分定量下限和低、中、高质量浓度 述条件下的RSD均小于15%，满足生物样本分析的要求。
的QC样品，按“2.3”项下方法处理，平行制备5份，测定3 2.6 大鼠体内 CLP、CAM、CLP-C 和 CLP-G 的药动学
日，根据当日标准曲线，分别计算QC样品的实测质量浓 研究
度，以相对标准偏差（RSD）评价测定方法的日内和日间 2.6.1 给药与样品收集
精密度，以实际质量浓度与理论质量浓度的相对误差 实验前大鼠禁食不禁水 1 d。取 6 只大鼠单次灌胃
[10]
（RE）考察准确度 ，结果见表 3。结果显示，除定量下 CLP（10 mg/kg，剂量根据临床等效剂量设置），分别于给
限 QC 样品外，各成分低、中、高质量浓度的 QC 样品的 药前和给药后 0.08、0.33、0.66、1、2、4、6、10、23、35 h 时，
日内、日间精密度的 RSD 均小于 15%，准确度的 RE 为 从大鼠眼眶后静脉丛取血约0.1 mL至肝素化离心管（管
－11.68%～14.40%，符合生物样品分析要求。 中预先加入3 μL质量浓度为500 mmol/L的MPB），立即
表3 大鼠血浆中待测成分的精密度和准确度结果 摇匀，于4 ℃条件下以3 500 r/min离心10 min，取上清液
日内（n＝5） 日间（n＝3） 冻存，待分析。
待测 理论质量浓度/
实测质量浓度 实测质量浓度 2.6.2 药动学数据处理与分析
成分 （ng/mL） RSD/% RE/% RSD/% RE/%
（x±s）/（ng/mL） （x±s）/（ng/mL） 采用 WinNonlin 6.1 软件中的非房室模型计算各待
CLP 0.08 0.09±0.01 8.23 6.73 0.08±0.01 9.08 5.49 测成分的药动学参数，并绘制药-时曲线，具体见图2；采
0.51 0.53±0.05 8.73 4.35 0.54±0.04 7.10 6.30
3.20 3.16±0.20 6.19 －1.31 3.08±0.18 5.71 －3.75 用半衰期（t1/2 ）、峰浓度（cmax ）、达峰时间（tmax ）、药-时曲线
20.00 19.26±1.23 6.41 －3.70 18.94±0.87 4.61 －5.30 下面积（AUC0-t ）描述药动学行为，结果以x±s表示，具体
CLP-C 205.00 172.40±7.40 4.29 －15.90 185.07±12.53 6.77 －9.72 见表5。
512.00 582.20±31.61 5.43 13.71 579.87±24.52 4.23 13.26
1 280.00 1 440.00±44.72 3.11 12.50 1 443.33±52.33 3.63 12.76 0.6 8 000
0.5
8 000.00 7 102.00±134.80 1.90 －11.23 7 066.00±191.56 2.71 －11.68 （ ng/mL ） 0.4 （ ng/mL ） 6 000
CAMD 0.04 0.04±0.01 18.61 6.13 0.04±0.01 15.81 1.52 0.3 4 000
0.2
0.10 0.11±0.01 7.18 14.40 0.11±0.01 9.56 9.80 质量浓度/ 0.1 质量浓度/ 2 000
4.00 4.08±0.53 13.00 1.90 3.96±0.35 8.93 －1.07 0 0 5 10 15 20 25 0 0 5 10 15 20 25 30 35
25.00 22.90±3.25 14.19 －8.40 23.38±2.23 9.53 －6.48
t/h t/h
2.5.4 基质效应 12 A. CLP 18 B. CLP-C
取来自6只不同大鼠的空白血浆，按“2.3”项下方法 （ ng/mL ） 10 （ ng/mL ） 15
处理后（不加内标）得到空白基质样品，再加入内标溶液 8 6 12 9
和不同质量浓度的标准混合工作液，制得低、中、高质量 质量浓度/ 4 2 质量浓度/ 6 3
浓度的基质样品，然后按“2.4”项下条件进样分析，测得 0 0 5 10 15 20 25 30 35 0 0 5 10 15 20 25
待测成分与内标的峰面积；同法进样分析含相同待测成 t/h t/h
C. CLP-G D. CAMD
分和内标的纯溶液，通过计算基质样品与纯溶液中各成
图2 大鼠血浆中CLP及其代谢产物的药-时曲线（n＝6）
分的峰面积比值，计算待测成分和内标的基质因子，经
内标归一化后评价基质效应，结果见表 4。结果显示， 由图2可见，单次灌胃CLP后，大鼠血浆中原型CLP
低、中、高质量浓度的各待测成分经内标归一化后，其基 暴露量极低，其AUC0-35 h、cmax均小于或低于各代谢物；活
质因子的变异系数均小于 15%，说明基质效应较小，符 性代谢物CAM（以CAMD计）的AUC0-35 h约为CLP的43
合生物样品分析方法要求。 倍，但t1/2较短（2.53 h）；无活性代谢物CLP-C的暴露量最
2.5.5 稳定性考察 高，但达峰最迟且清除缓慢；CLP-G 的 AUC0-35 h 约为
按照“2.2”项下方法配制各待测成分低、高质量浓度 CAM的4倍，其t1/2与CLP-C近似。

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