Page 49 - 《中国药房》2025年13期

2.2 分组、造模与给药 采用BCA法测蛋白浓度；将蛋白变性处理后，进行十二
将 64 只适应性喂养 7 d 后的大鼠随机分成 8 组，分 烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，用 5% 脱脂奶
别为空白组（K组）、模型组（M组）、阳性对照组（Y组，多 粉室温封闭 2 h，加入 SCF、c-Kit、β-actin 一抗（稀释度分
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潘立酮，2.7 mg/kg ）、枳实组（Z 组，9 g/kg ，以生药量 别为 1∶500、1∶1 000、1∶5 000），于 4 ℃孵育过夜；次日，
计）、嗜酸乳杆菌组（R组，5×10 cfu/kg）、枯草芽孢杆菌 用 TBST 洗膜 10 min，重复洗膜 3 次，加入相应二抗（稀
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组（B 组，5×10 cfu/kg）、嗜酸乳杆菌+枳实组（RL 组，嗜 释度为 1∶10 000）室温孵育 1 h，洗膜；经显影处理后，
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酸乳杆菌5×10 cfu/kg+枳实9 g/kg）、枯草芽孢杆菌+枳 采用凝胶成像仪成像，使用 Image J 软件分析蛋白条带
实组（BL 组，枯草芽孢杆菌 5×10 cfu/kg+枳实 9 g/kg）， 灰度值，以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度值比值
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每组8只。除K组外，其余各组大鼠参考文献[15]方法， 表示目的蛋白表达水平。另外，同上述方法检测大鼠十
采用夹尾刺激+饥饱失常+游泳力竭应激干预法建立FD 二指肠组织中 TLR4、MyD88、NF-κB 蛋白（稀释度均为
模型，即用止血钳夹住大鼠尾巴远端 1/3 处，每次 30
1∶5 000）表达水平。
min，每日 2 次（间隔 6 h），并于每日下午夹尾结束 1 h 后 2.8 统计学分析
进行强迫游泳至大鼠力竭，隔日禁食禁水，连续造模 21
采用GraphPad Prism 9软件进行统计分析。所有数
d。当大鼠出现活动减少、反应呆滞、毛发枯燥、粪便软
据均符合正态分布，故均用 x±s 表示，多组间比较采用
溏、进食量减少时，表示造模成功。造模成功后，K组、M
组大鼠灌胃生理盐水，其余各组大鼠灌胃相应药液/益生 单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验（方差
菌混悬液（RL组、BL组在灌胃相应益生菌4 h后，灌胃枳 齐时）或 Dunnett’s T3 检验（方差不齐时）。检验水准
实药液），每天1次，连续14 d。 α＝0.05。
2.3 大鼠胃排空率及小肠推进率的检测 3 结果
末次给药后，大鼠禁食不禁水24 h后灌胃黑色营养 3.1 大鼠胃排空率及小肠推进率检测结果
半固体糊（质量为 m0 ），灌胃体积 2 mL；30 min 后用 3% 与 K 组比较，M 组大鼠胃排空率、小肠推进率均显
戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血 10 mL，室温下静置 30 著降低（P＜0.05）。与 M 组比较，各给药组大鼠胃排空
min 后，以 3 000 r/min 离心 15 min，取上层血清保存备 率、小肠推进率均显著升高（P＜0.05）。与 Z 组、R 组、B
用。取血完成后，处死各组大鼠，取出胃组织、小肠、盲 组分别比较，BL 组大鼠小肠推进率均显著升高（P＜
肠，称取胃全重（m），洗净胃内容物后吸干水分称取胃净 0.05）。结果见表1。
重（m1 ），计算胃排空率：胃排空率＝[1－（m－m1 ）/m0]× 表1 各组大鼠胃排空率及小肠推进率比较（x±s，n＝
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100% 。用直尺分别测量黑色营养半固体糊自幽门向 8，%%）
盲肠的推进距离（L1 ）和肠管总长（L2 ），计算小肠推进率： 组别 胃排空率 小肠推进率
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小肠推进率＝L1/L2×100% 。检测结束后，收集大鼠胃 K组 63.76±2.91 56.99±2.29
组织、小肠、盲肠组织备用。 M组 50.00±0.62 a 34.90±2.36 a
Y组 61.43±1.68 b 47.31±1.18 b
2.4 大鼠血清中脑肠肽相关指标水平检测
Z组 58.38±2.31 b 43.56±2.06 b
取“2.3”项下各组大鼠血清样品，按照ELISA试剂盒说 B组 59.32±1.99 b 43.87±2.45 b
明书方法检测大鼠血清中GAS、SP、VIP、SS、CCK水平。 BL组 61.24±1.94 b 49.27±0.96 bcde
2.5 大鼠胃窦组织和十二指肠组织的病理学形态观察 R组 57.08±1.98 b 43.82±1.19 b
RL组 58.63±2.21 b 46.51±2.20 b
取“2.3”项下部分胃组织和十二指肠组织适量，置于
a：与K组比较，P＜0.05；b：与M组比较，P＜0.05；c：与Z组比较，
4%多聚甲醛中固定，经脱水、包埋、切片后进行苏木素-
P＜0.05；d：与R组比较，P＜0.05；e：与B组比较，P＜0.05。
伊红染色，经封片处理后，采用显微镜观察大鼠胃窦组 3.2 大鼠血清中脑肠肽相关指标水平检测结果
织和十二指肠组织的病理学形态特征。
2.6 大鼠肠道菌群检测 与K组比较，M组大鼠血清中GAS、SP水平均显著
取“2.3”项下各组大鼠盲肠内容物，根据粪便 DNA 降低，VIP、SS、CCK水平均显著升高（P＜0.05）；与M组
比较，各给药组大鼠血清中 GAS、SP 水平均显著升高，
分离试剂盒操作说明抽提肠道菌群总基因组DNA，使用
VIP、SS、CCK 水平均显著降低（P＜0.05）。与 Z 组、R
1%琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA的完整度，
使用 NanoDrop2000 型超微量分光光度计测定 DNA 浓 组、B 组分别比较，RL 组和 BL 组大鼠血清中 GAS、SP
度和纯度 ；经扩增、纯化后 ，使用 NEXTFLEX Rapid （RL 组对比 B 组除外）水平均显著升高（P＜0.05），VIP、
DNA-Seq Kit 试剂盒对纯化后的产物建库，再利用 Illu‐ SS、CCK水平均显著降低（P＜0.05）。结果见表2。
mina Nextseq2000测序平台测序。肠道菌群检测结果均 3.3 大鼠胃窦组织和十二指肠组织的病理学形态观察
在美吉生物云平台上进行分析。 结果
2.7 大鼠胃窦组织中 SCF、c-Kit 和十二指肠组织中 各组大鼠胃窦组织结构正常，黏膜上皮细胞排列整
TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平的检测 齐，黏膜层血管无明显充血，无炎症细胞浸润，胃窦组织
取“2.3”项下各组大鼠胃窦组织适量，提取总蛋白， 无器质性病变。K组、Y组大鼠十二指肠整体结构正常，

中国药房 2025年第36卷第13期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 13 · 1595 ·