Page 44 - 《中国药房》2025年13期

响应面图： 等高线图： 3 桔梗和炒桔梗对小鼠急性肺损伤的药效学评价
OD值
12 3.1 药液制备
100
95 11 分别取适量桔梗和根据前文最佳工艺制备的炒桔
OD值 90 梗，粉碎，过二号筛，加入8倍量水煎煮2次、每次1 h，过
85
80 A/min 10
75 滤，合并滤液后浓缩至干。取干膏，用水溶解，制备成质
70
9 量浓度为0.5 g/mL的药液，备用。
12 140
11 130 3.2 动物分组与给药
10 9 110 120 8
A/min 8 100 B/℃ 100 110 120 130 140 小鼠先适应性喂养7 d。将56只小鼠称质量后随机
B/℃
A. A与B的交互图 分为空白对照组（Con组），模型组（Model组），地塞米松
OD值
24 组（阳性对照药，Dexa组），桔梗低、高剂量组（SL、SH组）
100 和炒桔梗低、高剂量组（FL、FH 组），每组 8 只。Dexa 组
95 21
OD值 90 （ r/min ） 小鼠灌胃5 mg/kg地塞米松，剂量参考文献[14]及预实验
85
80
75 18 结果设置；SL、SH 组和 FL、FH 组小鼠均分别灌胃 0.6、
70 C/ 1.2 g/kg（炒）桔梗药液，分别为人临床等效剂量的 0.5、1
15
24 12
21 11 倍；Con 组、Model 组小鼠灌胃等体积生理盐水，每天给
18 10 12
15 9 8 9 10 11 12 药1次，连续10 d。给药期间小鼠正常饮食。
C/（r/min） 12 8 A/min
A/min 3.3 动物造模
B. A与C的交互图
OD值 末次给药后对小鼠禁食不禁水24 h，参考文献[15－
24
100 16]方法并结合预实验的实际情况进行适当调整，采用
95 21
90 脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）气管滴注法建立急性肺
OD值 85 （ r/min ） 损伤模型：用异氟烷将小鼠麻醉后，对小鼠颈部剃毛、消
80
75 18
70 C/ 毒，然后剖开小鼠颈部并暴露气管，将留置针插进气管
15
24 140 后结扎；用注射器推入 LPS 溶液 0.1 mL（质量浓度为
21 130
18 120 12 2.4 mg/mL，造模剂量为6 mg/kg），将小鼠小心竖起停置
15 110
C/（r/min） 12 100 B/℃ 100 110 120 130 140
B/℃ 10 s，使LPS液在其肺中均匀分布；最后进行缝合并将其
C. B与C的交互图 放回笼中等待苏醒。造模过程中应使用空调适当升高
图1 各因素的响应面图和等高线图
室内温度，防止小鼠麻醉后体温过低。
情况吻合，误差较小、拟合度高。综合方差分析结果和 3.4 样本取材及指标检测
2D/3D 交互图可知，模型中一次项 A、C 有显著性，交互 造模2 d后，取小鼠眼球血，将血样在4 ℃下以3 500
项AC、BC有显著性且对结果影响较大；二次项A 、B 、C 2 r/min 离心 15 min，吸取上层血清，根据相应试剂盒说明
2
2
均有显著性。比较A、B、C的F值可知，其对炮制工艺影 书方法操作，检测血清中炎症因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）
响的重要程度顺序为A＞C＞B。综合以上结果，可认为 水平。取小鼠左肺上叶置于 4% 多聚甲醛中固定，常规
该二次回归模型拟合充分、实验方案设计可行，可用于 制作石蜡切片并行常规 HE 染色后，观察肺组织病理学
对桔梗炮制工艺进行预测。 变化；取小鼠左肺中、下叶组织，制作组织匀浆，按照相
Design-Expert 13软件预测出的最佳工艺为：炒制温度 应试剂盒说明书操作，检测肺组织中氧化应激指标
（SOD、MPO、MDA）水平；取小鼠右肺组织，称质量（湿
117.255 ℃，炒制时间12.020 min，翻动频率18.615 r/min。
重），烘干，再次称质量（干重），计算肺干湿重比（湿重/干
结合实际生产需要和可行性，将预测最佳工艺修正为：炒
重）；取小鼠胸腺组织，称质量，并计算胸腺指数（胸腺质
制温度 120 ℃，炒制时间 12 min，翻动频率 19 r/min。
量/体重）。整个实验过程中每天测量1次小鼠体重。
2.6.2 最佳工艺验证
3.5 体重变化测定结果
按修正后的最佳工艺炮制 3 批炒桔梗（每批 200 g）
结果（图2）显示，适应性喂养期间，各组小鼠体重增
进行验证实验。结果（表3）显示，3批样品的OD值均高
加；给药期间，各组小鼠体重稳定；造模后，除 Con 组外
于97分，RSD小于3%（n＝3），说明该工艺稳定可行。
其余各组小鼠体重均减轻，其中以Model组小鼠体重减
表3 最佳工艺的验证实验结果 轻幅度最大。
样品编号 外观性状评分/分 桔梗皂苷D含量/% 醇溶性浸出物含量/% OD值/分 3.6 肺干湿重比和胸腺指数测定结果
1 9 0.20 30.2 97.96
2 9 0.19 29.8 97.35 与 Con 组比较，Model 组小鼠肺干湿重比显著升高
3 9 0.20 30.1 97.78 （P＜0.01），胸腺指数显著降低（P＜0.01）；与Model组比

· 1590 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 13 中国药房 2025年第36卷第13期