Page 41 - 《中国药房》2025年12期
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过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗                            结果显示，通过 GeneCards、OMIM、TTD 数据库获
         （批号分别为 EK0308、BM3877、BA1054）均购自武汉博                  得PMDD疾病靶点1 410个；通过SwissTargetPrediction、
          士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ；兔 抗 BDNF 抗 体（批 号              Super-PRED、SEA、PharmMapper、TargetNet、DrugBank
          ab108319）购 自 英 国Abcam 公 司 ；鼠 抗 突 触 核 蛋 白           等数据库获得芦丁作用靶点 844 个；取交集获得 PMDD
         （synuclein，Syn）抗体、兔抗突触后密度蛋白95（postsynaptic          和芦丁交集靶点 60 个。将上述交集靶点导入 STRING

          density protein 95，PSD95）抗体、兔抗酪氨酸激酶受体 B            数据库，所得 PPI 网络结果显示，肿瘤坏死因子（tumor
         （tyrosine kinase receptor type B，TrkB）抗体（批号分别为      necrosis factor，TNF）、单胺氧化酶 A（monoamine oxi‐
          2644、3450、4603）均购自美国CST公司。                         dase A，MAOA）、TrkB、羟色胺受体 2A（hydroxytrypta‐
          1.3 实验动物                                           mine receptor 2A，HTR2A）、BDNF 是核心靶点（节点度
              SPF级雌性未育Wistar大鼠60只，体重130～170 g，               值分别为 72、65、58、58、56）；此外，神经损伤标志物
          6～8 周龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，                         PSD95、Syn 在 PPI 网络中也较为重要（节点度值分别为
          生产许可证号为 SCXK（京）2021-0006。所有大鼠随机                    26、12）。GO功能富集分析结果（图1A）显示，交集靶点
          分笼（每笼 5 只）并昼夜颠倒（每天晚上 8：00 开灯，早上                    的生物过程（biological process，BP）包括化学突触传递、
          8：00 关灯）饲养，温度为 22～26 ℃，相对湿度为 40%～                  内皮细胞增殖的正向调控等；细胞组分（cellular compo‐
          70%，自由摄食、饮水。本研究方案经山东第一医科大                          nent，CC）主要涉及突触后膜、树突棘密度等；分子功能
          学附属中心医院实验动物福利伦理审查委员会批准（批                          （molecular function，MF）主要涉及神经递质受体活性、
          准文号 JNCHIACUC2021-79）。大鼠均适应性喂养 7 d                 类固醇结合等。KEGG通路富集分析结果（图1B）显示，
          再进行后续实验。                                           钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、神经营养素
          2 方法与结果                                            信号通路、5-羟色胺能突触信号通路是交集靶点的主要

          2.1 网络药理学分析                                        富集通路。
              以“premenstrual dysphoric disorder”为关键词，检索      2.2 分子对接
          GeneCards 数据库（https：//www.genecards.org/）、OMIM         根据网络药理学结果，本研究选取关键核心靶点
          数据库（https：//www.omim.org/）、TTD 数据库（http：//         TNF、BDNF、TrkB、MAOA、HTR2A 和神经元损伤标志
          bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/），获得 PMDD 疾病靶点。通       物 Syn、PSD95 进行分子对接验证，具体操作如下：从
          过 SwissTargetPrediction 数据库（http：//www.swisstarget‐  PDB数据库（https：//www.rcsb.org）中获取关键靶点的蛋
          prediction. ch/）、Super-PRED 数 据 库（https：//prediction.  白模型，种属选择“人源”；采用Schrödinger Maestro 12.8
          charite. de/index. php）、SEA 数 据 库（https：//sea. bkslab.  软件的“Protein Preparation Wizard”板块对蛋白模型的
          org/）、PharmMapper 数据库（https：//lilab-ecust.cn/pharm‐  结构进行优化，即对蛋白模型加氢并在优化液体模拟全
          mapper/index. html）、TargetNet 数 据 库（http：//targetnet.  原子势场4.0版力场下分配蛋白模型质子化状态和形式
          scbdd. com/）、DrugBank 数 据 库（https：//go. drugbank.  电荷。从 PubChem 数据库（https：//pubchem.ncbi.nlm.
          com/）等获取芦丁的作用靶点。取上述疾病靶点和成分                         nih. gov/）获 取 芦 丁 的 小 分 子 结 构 ，使 用 Schrödinger
          作用靶点，经 UniProt 数据库（https：//www.uniprot.org/）       Maestro 12.8 软件的“LigPrep”板块对其进行结构优化，
          转换为标准名称，再导入欧易云生信分析平台（https：//                      使用“Receptor Grid Generation”板块定义结合位点，格
          cloud.oebiotech.com/）以获取交集靶点并绘制韦恩图。                点的产生均保持默认设置。使用“标准精度打分模式”
          将 交 集 靶 点 导 入 STRING 数 据 库（https：//string-db.      进行分子对接，对接得分越小表示亲和力越大、结合能
          org/），构建蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interac‐         力越强 。结果显示，Syn、BDNF、TrkB、PSD95、MAOA
                                                                   [13]
          tion，PPI）网络，隐藏网络中无关联的节点，导出“TSV”                    与芦丁的分子对接得分分别为－6.099、－5.936、－5.940、
          文件，并利用Cytoscape 3.10.1软件进行可视化展示。以                  －5.887、－3.184 kcal/mol（1 kcal＝4.19 kJ），表明结合能
          节点度值来评估靶点的重要性，取度值排前5位以及与                           力较强；而TNF、HTR2A与芦丁无结合位点。
          神经元损伤相关的靶点作为关键靶点。利用欧易云生                                综合网络药理学和分子对接结果可知，芦丁可以通
          信分析平台对交集靶点进行基因本体（gene ontology，                    过作用于核心靶点 BDNF、TrkB 和神经损伤标志物
          GO）功能、京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclope‐                 PSD95、Syn（结合能均小于－5 kcal/mol）来改善 PMDD
          dia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。              症状。


          中国药房  2025年第36卷第12期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 12    · 1451 ·
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