Page 43 - 《中国药房》2025年12期

直径 20 cm 的透明圆筒。旷场实验结束后，将大鼠放入 而氟西汀组大鼠血清BDNF水平无显著变化（P＞0.05）。
加有（23±1）℃水的圆筒中，让其进行 6 min 的适应练 在 R 期，各组大鼠血清 BDNF 水平比较，差异无统计学
习。正式实验时，使用动物行为采集分析系统记录其开 意义（P＞0.05）。

始实验后2～6 min内的悬浮不动时间。 2.3.6 神经元形态观察与相关指标检测
（3）Y迷宫实验：Y迷宫箱体由相邻夹角为120°的3 采用高尔基染色法观察。取“2.3.4”项下各组NR、R
个等长支臂组成。强迫游泳实验结束后，将大鼠置于Y 期大鼠脑组织，洗去表面血液后浸泡于 4% 多聚甲醛溶
迷宫任一支臂末端，使用动物行为采集分析系统记录其 液，固定 24 h 后，将脑组织置于高尔基染色液中避光染
8 min内自由探索的视频图像，统计最大轮流次数、顺序 色 14 d，浸泡 48 h 后转移至新的高尔基染色液中，之后
轮流次数，并计算自发轮流行为得分：自发轮流行为得 每3 d更换1次染色液；取出脑组织，依次进行梯度乙醇
分＝顺序轮流次数/最大轮流次数×100%。 脱水、二甲苯透明；脱水后使用振动切片机切取100 μm
结果（表 1）显示，在 NR 期和 R 期旷场实验中，各组 厚的切片，以甘油明胶封片。使用光学显微镜观察其脑
大鼠的运动总距离、中央区域运动距离、中央区域停留 海马组织神经元形态并拍照（神经元呈黑褐色）。采用
时间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。在NR期强 Image J软件统计神经元树突棘数量和树突长度，并计算
迫游泳实验中，与正常组比较，模型组大鼠的悬浮不动 平均每10 μm树突上的树突棘密度。
时间显著延长（P＜0.05）；与模型组比较，氟西汀组和芦 结果（表 2、图 2）显示，在 NR 期，与正常组比较，模

丁组大鼠的悬浮不动时间均显著缩短（P＜0.05）。在 型组大鼠脑海马组织神经元突触结构减少，树突棘密度
NR期Y迷宫实验中，与正常组比较，模型组大鼠的自发 显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，氟西汀组和芦丁组
轮流行为得分显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，氟西 大鼠脑海马组织神经元突触结构增多，树突棘密度均显
汀组和芦丁组大鼠的自发轮流行为得分均显著升高 著升高（P＜0.05）。在R期，各组大鼠脑海马组织神经元
（P＜0.05）。在R期强迫游泳实验和Y迷宫实验中，各组 突触结构相似，其树突棘密度比较的差异无统计学意义
大鼠相关指标比较的差异均无统计学意义（P＞0.05）。 （P＞0.05）。
2.3.4 样本采集 2.3.7 相关蛋白表达检测
行为学测试结束后，分别取正常组 NR 期和 R 期大 采用 Western blot 法检测。取“2.3.4”项下各组 NR、
鼠5只，取模型组、氟西汀组、芦丁组NR期和R期大鼠6 R 期大鼠冻存的脑海马组织适量，匀浆后离心，取上清
只，予戊巴比妥钠麻醉后于腹主动脉采血5 mL。血样静 液；以 BCA 法测定蛋白浓度后作变性处理。取变性蛋
置30 min后，于4 ℃下以3 000 r/min离心15 min，取上层 白，经电泳分离后转膜，以封闭液于室温下封闭 2 h；用
血清，于－80 ℃下保存，备检。采血后，迅速将大鼠断头 TBST 洗膜30 min后，分别加入BDNF、PSD95、Syn、TrkB、
处死，在冰上钝性分离其全脑和海马组织，进行高尔基 β-tubulin一抗（稀释度分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶2 000、
染色；脑海马组织称重后，于－80 ℃下保存，备检。 1∶2 000、1∶2 000），于４ ℃下孵育过夜；用TBST洗膜30

2.3.5 血清BDNF水平检测 min 后，加入相应二抗（稀释度均为 1∶5 000），于室温下
采用 ELISA 法检测。取“2.3.4”项下各组 NR、R 期 孵育 2 h；显色后，于凝胶成像仪下曝光、显影。使用
大鼠血清样品适量，参照相应试剂盒说明书操作，使用 Image J软件，以目的蛋白与内参蛋白（β-tubulin）的条带
多功能酶标仪检测其血清BDNF水平。 灰度值比值表示目的蛋白的相对表达量。
结果（表2）显示，在NR期，与正常组比较，模型组大 结果（表 3、图 3）显示，在 NR 期，与正常组比较，模
鼠的血清 BDNF 水平显著降低（P＜0.05）；与模型组比 型组大鼠脑海马组织中BDNF、Syn、TrkB蛋白的表达均
较，芦丁组大鼠的血清 BDNF 水平显著升高（P＜0.05）， 显著下调（P＜0.05）；与模型组比较，氟西汀组和芦丁组
表1 各组大鼠行为学评价指标比较（x±s）
运动总距离/m 中央区域运动距离/m 中央区域停留时间/s 悬浮不动时间/s 自发轮流行为得分/%
组别 n
NR期 R期 NR期 R期 NR期 R期 NR期 R期 NR期 R期
正常组 10 26.06±4.09 31.87±3.08 2.13±0.49 2.41±0.46 7.76±2.22 8.99±1.81 13.40±3.88 12.34±3.29 64.40±2.22 51.50±3.24
模型组 12 30.15±4.69 34.95±4.78 1.64±0.71 3.28±0.72 5.54±1.36 10.35±4.28 29.92±5.39 a 11.74±3.07 53.24±2.41 a 51.66±2.74
氟西汀组 12 25.63±4.52 26.53±4.41 2.16±0.52 2.01±0.12 9.89±0.15 9.87±3.43 15.15±3.33 b 14.18±4.12 68.46±4.33 b 53.75±4.18
芦丁组 12 29.46±4.91 32.27±2.68 3.16±0.15 2.80±0.47 17.61±10.36 12.41±2.39 13.48±2.61 b 12.37±3.71 66.26±3.28 b 53.13±4.05
a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。

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