Page 34 - 《中国药房》2025年12期
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protein kinase，AMPK）抗体、兔源磷酸化 AMPK（phos‐             15%B；4.0～5.0 min，15%B）；柱温为 40 ℃；流速为 0.4
          phorylated AMPK，p-AMPK）抗体、辣根过氧化物酶标记                 mL/min；进样量为1 μL。
          的羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗、辣根过氧化物酶标                             采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子
          记 的 羊 抗 小 鼠 IgG 二 抗（批 号 分 别 为 A00994-6、             检测；喷雾电压为5 500 V；离子化温度为550 ℃；雾化气
          BM4718、BA1054、BA1050）均购自武汉博士德生物工                    压力为 50 psi；辅助气压力为 55 psi；气帘气压力为 25
          程有限公司；鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克                        psi；碰撞气压力为9 psi。HGQZ各特征成分的多反应监
          隆抗体（批号62u0922）购自江苏亲科生物研究中心有限                        测质谱信息见表1。
          公司。                                                    表1 HGQZ各特征成分的多反应监测质谱信息
          1.3 实验动物与饲料                                         特征成分          母离子m/z   子离子m/z  去簇电压/V   碰撞电压/V
              SPF 级雄性 C57BL/6 小鼠 36 只，7 周龄，体重（20±             人参皂苷Rb 1       1 131.7  365.5    234.0    78.6
                                                              香蒲新苷           771.4    316.9    118.7    38.8
          2）g，购自珠海百试通生物科技有限公司，生产许可证号
                                                              异鼠李素-3-O-新橙皮苷  625.1    316.8    93.8     28.7
          为 SCXK（粤）2020-0051。所有小鼠饲养于深圳华腾生                     金丝桃苷           465.0    303.0    103.1    20.7
          物医药科技有限公司动物房内，温度为（22±1）℃，相对                         荷叶碱            296.3    265.2    104.6    12.8
          湿度为40%～70%，每12 h光照/黑暗循环。所有小鼠均                       23-乙酰泽泻醇B      515.2    437.3    30.4     22.5
          自由摄食、饮水。本研究饲养环境符合实验动物环境设                            2.1.3 方法学考察
          施要求，实验方案经深圳华腾生物医药科技有限公司实                               （1）取“2.1.1”项下配制的混合对照品储备液适量，
          验动物伦理委员会批准（编号B202312-1）。                            用 50% 甲 醇 逐 级 稀 释 ，制 成 各 成 分 质 量 浓 度 均 为
              高脂饲料（批号 20230826）购自戴茨生物科技（无                     285.74、142.87、71.44、35.72、7.14、1.43、0.72 μg/mL 的标
          锡）有限公司；普通维持饲料（批号 2024010101）购自江                     准曲线溶液。取上述标准曲线溶液，按“2.1.2”项下色谱
          苏省协同医药生物工程有限责任公司。                                   与质谱条件进样分析，记录峰面积。以各对照品峰面积
          2 方法                                                为纵坐标（y）、质量浓度为横坐标（x），使用最小加权二
          2.1 HGQZ饮片汤剂与配方颗粒的特征成分含量比较                          乘法进行线性回归。（2）按照 2020 年版《中国药典》（四
                                                                                          [10]
          2.1.1 溶液的制备                                         部）的相关要求，进行方法学考察 。
             （1）对照品溶液：精密称取人参皂苷Rb1、香蒲新苷、                       2.1.4 特征成分含量的测定及比较
          异鼠李素-3-O-新橙皮苷、金丝桃苷、荷叶碱、23-乙酰泽                           按“2.1.1”项下HGQZ饮片汤剂、配方颗粒供试品溶
          泻醇B对照品各10 mg，置于同一10 mL容量瓶中，加甲                       液，按“2.1.2”项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面
          醇溶解并定容至刻度，得质量浓度均为1 mg/mL的混合                         积并代入回归方程，计算样品中各成分的含量并进行比
          对照品储备液。（2）HGQZ饮片汤剂供试品溶液：取处方                         较。每样品平行检测3次。
          量药材 50 g（其中蒲黄 7.5 g、三七 2.5 g、荷叶 10 g、山楂             2.2 HGQZ饮片汤剂与配方颗粒的药效比较
          15 g、泽泻 15 g），加 8 倍量水，加热回流提取 1 h×3 次，               2.2.1 分组、造模与给药
          过滤，合并滤液。将滤液于 60 ℃下减压浓缩至 50 mL，                          将小鼠随机分为正常对照组（NC组）、模型组（HFD
          即得质量浓度为 1 g/mL（以生药量计）的 HGQZ 饮片汤                     组）、HGQZ饮片汤剂低剂量组（HGQZ-YP-L组）、HGQZ
          剂提取液。精密吸取上述提取液适量，用50%甲醇稀释                           饮片汤剂高剂量组（HGQZ-YP-H 组）、HGQZ 配方颗粒
          100 倍后经 0.22 μm 微孔滤膜过滤，即得 HGQZ 饮片汤                  低剂量组（HGQZ-KL-L 组）、HGQZ 配方颗粒高剂量组
          剂供试品溶液。（3）HGQZ配方颗粒供试品溶液：根据配                        （HGQZ-KL-H组），每组6只。根据本课题组前期研究，
          方颗粒包装袋内容可知，配方颗粒与饮片的换算比例分                            本实验将HGQZ饮片汤剂/配方颗粒的低、高剂量设置为
          别为泽泻 1∶4、山楂 1∶2、荷叶 1∶5、三七 1∶1.5、蒲黄 1∶               13、26 g/kg（以生药量计）。除 NC 组小鼠给予普通维持
          3.8，故按处方量称取配方颗粒适量（相当于饮片 50 g），                      饲料外，其余各组小鼠均给予高脂饲料 20 周以建立
                                                                         [11]
          加水 50 mL，涡旋振荡均匀，于 60 ℃水浴中加热 10 min                  NAFLD模型 。造模同时，各药物组小鼠灌胃相应剂量
          后冷却至室温，即得质量浓度为1 g/mL（以生药量计）的                        药液，其余各组小鼠灌胃等体积水，每天 1 次，共 20 周。
          HGQZ 配方颗粒提取液。精密吸取该提取液适量，用                           实验期间，每周记录各组小鼠的体重。
          50% 甲醇稀释 100 倍后经 0.22 μm 微孔滤膜过滤，即得                  2.2.2 小鼠空腹血糖的检测和葡萄糖、胰岛素耐量实验
          HGQZ配方颗粒供试品溶液。                                          于给药的第18周末，各组小鼠禁食12 h后进行葡萄
          2.1.2 色谱与质谱条件                                       糖耐量试验，具体操作如下：各组小鼠灌胃 10% 葡萄糖
                                  ®
              以 Phenomenex Kinetex  C18 （3.0 mm×100 mm，2.6    溶液（每 40 g 体重灌胃 200 μL），并于灌胃后 0、15、30、
          μm）为色谱柱，以 0.1% 甲酸溶液为流动相 A、乙腈为流                      60、90、120 min 时采集尾静脉血；使用血糖仪检测上述
          动相 B 进行梯度洗脱（0～0.8 min，15%B；0.8～2.5 min，             时间点的血糖值[其中，0 min时的血糖值即为空腹血糖
          15%B→85%B；2.5～3.5 min，85%B；3.5～4.0 min，85%B→       （fasting blood glucose，FBG）值]，绘制血糖浓度-时间曲


          · 1444 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 12                            中国药房  2025年第36卷第12期
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