Page 29 - 《中国药房》2025年10期
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dia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析 ,对 3 结果
富集通路的-lgP 进行比较,以筛选变化显著的共同代 3.1 SGHWT对抑郁大鼠体重及行为学的影响
谢通路。 与空白组相比,模型组大鼠的体重、糖水偏好率、总
2.6.4 机制验证实验 移动距离、穿越中心次数均显著降低或缩短,不动时间
根据“2.6.3”项下结果和PFC-NAc-VTA神经环路具 显著延长(P<0.05);与模型组相比,各药物组大鼠的体
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体作用过程 ,采用Western blot法对代谢通路的相关蛋 重、糖水偏好率(SGHWT-H 组除外)、穿越中心次数、总
白表达进行检测。取“2.4”项下空白组、模型组、SGHWT 移动距离均显著升高或延长(P<0.05),不动时间均显
组另3只大鼠和氟西汀组3只大鼠的NAc区组织[(30± 著缩短(P<0.05)。结果见表 1。这提示抑郁大鼠造模
5)mg],加入含 1% 蛋白酶抑制剂和 1% 磷酸酶抑制剂的 成功,SGHWT可改善其抑郁状况。
蛋白裂解液 250 μL,提取组织总蛋白,然后于 4 ℃下匀 表1 SGHWT 对抑郁大鼠体重及行为学的影响(x±s,
浆 3 min 后裂解 30 min,再于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 n=12)
15 min,取上清液,以BCA法定量后,进行变性处理。取 组别 体重/g 糖水偏好率/% 总移动距离/cm 穿越中心次数 不动时间/s
空白组 412.33±30.89 88.15±5.10 1 311.30±432.15 46.67±20.02 153.78±32.72
变性蛋白适量,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶
模型组 326.99±17.08 a 65.41±13.64 a 461.37±197.20 a 5.17±2.85 a 212.23±33.23 a
电泳分离,再转膜、封闭;洗膜后,加入相应蛋白一抗(稀 SGHWT-L组 343.71±12.28 b 84.06±7.71 b 1 294.15±471.91 b 46.50±20.62 b 163.34±40.66 b
释比例均为1∶1 000),于4 ℃下孵育过夜;洗膜后,加入 SGHWT-M组 356.07±15.98 b 85.40±7.91 b 1 430.37±389.40 b 71.67±36.70 b 145.52±20.31 b
SGHWT-H组 338.56±17.20 b 64.72±21.89 1 033.87±426.16 b 34.42±23.34 b 160.60±31.07 b
相应二抗(稀释比例为 1∶1 000),于室温下孵育 1 h;洗 氟西汀组 356.63±19.65 b 80.58±10.10 b 872.59±433.63 b 26.08±23.02 b 176.05±29.57 b
膜后,以 ECL 法显影后成像。以 β-actin 为内参,使用 a:与空白组相比,P<0.05;b:与模型组相比,P<0.05。
Image J 软件分析条带灰度值,以目的蛋白与内参蛋白 3.2 SGHWT 对抑郁大鼠 PFC-NAc-VTA 神经环路组
(β-actin)的灰度值比值表示目的蛋白的相对表达量,以 织形态学的影响
磷酸化蛋白与原型蛋白的灰度值比值表示该蛋白的磷 空白组大鼠 3 个脑区的神经元细胞排列均较为整
酸化水平。 齐,结构完整,形态充盈。与空白组相比,模型组大鼠 3
2.7 统计学方法 个脑区的神经元细胞部分溶解,结构受损严重,细胞形
采用Graph-Pad Prism 8.0软件作图,采用SPSS 27.0 态萎缩,细胞核偏移或溶解消失。与模型组相比,
软件对数据进行统计分析。实验数据以x±s表示,多组 SGHWT组及氟西汀组大鼠3个脑区的神经元细胞均不
间比较采用单因素方差分析,进一步两组间比较采用 同程度地恢复,结构相对完整,萎缩状况有所改善,形态
LSD-t检验。检验水准α=0.05。 恢复至充盈状态。结果见图1。
PFC区
NAc区
VTA区
A.空白组 B.模型组 C. SGHWT组 D. Fluoxetine组
黑色箭头:溶解且结构受损的细胞;黄色箭头:萎缩的细胞;白色箭头:细胞核偏移或溶解消失的细胞。
图1 SGHWT对抑郁大鼠PFC-NAc-VTA神经环路组织形态学影响的显微图(HE染色)
中国药房 2025年第36卷第10期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 10 · 1175 ·