Page 28 - 《中国药房》2025年10期
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限公司；乙酸乙酯（分析纯，纯度≥99.5%）购自国药集团                        聚甲醛溶液中固定，备用。取每组余下9只大鼠，于腹主
          化学试剂有限公司；水为超纯水。                                     动脉取血后分离全脑；血样于室温下静置 30 min 后，于
          1.3 实验动物                                            4 ℃下以3 000 r/min离心15 min，吸取上层血清，经液氮
              SPF级雄性SD大鼠72只，体重（150±20）g，由湖北                   速冻后于－80 ℃下保存，备用；取全脑PFC、NAc、VTA 3
          省实验动物中心提供，生产许可证号为SCXK（鄂）2020-                       个脑区，经液氮速冻后于－80 ℃下保存，备用。
          0018。所有大鼠均饲养于湖北中医药大学中医基础理                           2.5 大鼠PFC-NAc-VTA神经环路组织形态学观察
          论研究所清洁级动物房[温度（24±2）℃，相对湿度                               取“2.4”项下各组大鼠经 4% 多聚甲醛溶液固定的
         （50±5）%，每 12 h 光暗循环]，自由摄食、饮水。本动物                     全脑组织，分离PFC、NAc、VTA 3个脑区，分别进行石蜡
          实验方案通过湖北中医药大学实验动物中心的伦理审                             包埋、切片、脱蜡、复水、苏木精染色、分化、伊红染色、脱
          查（批准号为HUCMS202202001）。                              水、封片后，使用显微镜观察各脑区的组织形态学变化。
          2 方法                                                2.6 SGHWT抗抑郁潜在机制挖掘与验证
          2.1 药物的制备                                           2.6.1 样本预处理
              称取 SGHWT 各饮片（柴胡、炒枳实、白芍、郁金、                          随机选取“2.4”项下冻存的空白组、模型组、SGHWT
          砂仁、广木香、焦白术、黄连、吴茱萸、炙甘草的质量比                           组各6只大鼠的PFC、NAc、VTA脑区样本[（30±5）mg]，
          为 10∶10∶10∶10∶10∶10∶10∶6∶6∶6），混匀，加 10 倍量水，          自然解冻后，加入含内标 L-2-氯苯丙氨酸（质量浓度 10
          浸泡 1 h 后，煎煮 2 h，以纱布过滤；取药渣，再重复煎煮                     μg/mL）的提取液Ⅰ（V 甲醇 ∶V 水＝7∶3）500 μL 及直径 0.5
          2 h×2次，以纱布过滤；合并3次滤液，经水浴浓缩、冷冻                        mm 的钢珠 4～6 颗，于 4 ℃下匀浆 3 min，静置 15 min
          干燥后，得SGHWT冻干粉（得率为41.97%）。                           后，于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 15 min，取上清液于
          2.2 分组、造模与给药                                        1.5 mL EP管中。在沉淀中加入预冷的提取液Ⅱ（V 乙酸乙酯 ∶
              将大鼠适应性喂养1周后，按体重分为空白组，模型                         V 甲醇＝1∶3）500 μL，涡旋3 min，静置15 min后，于4 ℃下
          组，SGHWT 低、中、高剂量组（SGHWT-L、SGHWT-M、                   以 12 000 r/min 离心 15 min，取上清液。将上述两次上
          SGHWT-H 组）以及氟西汀组（阳性对照），每组 12 只。                     清液混合，涡旋 1 min 混匀后，于 45 ℃下真空浓缩 50
          除空白组外，其余各组大鼠均采用CUMS结合单笼饲养                           min 后，加入提取液Ⅰ 250 μL 复溶，涡旋 3 min，于 4 ℃
          的方式建立大鼠抑郁模型（以行为学实验结果判断造模                            下以12 000 r/min离心15 min，取上清液，用于非靶向代
                                                     [7]
          是否成功），具体造模方法参考本课题组前期研究 。造                           谢组学分析。同时，取上述各组上清液 10 μL，混匀，作
          模同时，SGHWT-L、SGHWT-M、SGHWT-H组和氟西汀组                   为质控（quality control，QC）样本，用于检验系统的稳
          大鼠灌胃相应药液，其中 SGHWT-M 组和氟西汀组的                         定性。
          剂量根据 60 kg 成人临床剂量[每天 93 g/kg（以生药量                   2.6.2 色谱和质谱检测条件
          计）和 20 mg/kg]进行换算，分别为 7.34 g/（kg·d）和 1.58               取上述待测样本及 QC 样本，采用 UPLC-Q-TOF-
          mg/（kg·d），SGHWT-L、SGHWT-H 组 的 剂 量 分 别 为             MS/MS技术进行检测，具体的色谱与质谱条件参考本课
                                                                                        [9]
          SGHWT-M 组的 1/2 和 2 倍，即 3.67、14.68 g/（kg·d）。各        题组前期下丘脑代谢组学研究 。
          药物组灌胃药液均以水为溶剂，灌胃体积均为 0.01                           2.6.3 代谢组学分析
          mL/g；模型组和空白组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天1                             采集样本色谱/质谱数据后，将原始数据依次导入
          次，持续6周。                                             Profinder 软件及 MPP 软件进行数据预处理及差异统计
          2.3 行为学实验                                           分析，并使用 SIMCA-P 14.1 软件进行主成分分析（prin‐
              实验期间，于每周固定时间称定并记录各组大鼠的                          cipal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法-判
          体重。末次给药后，再次称定各组大鼠的体重，并进行                            别 分 析（orthogonal  partial  least  squares  discrimination
          糖水偏好实验、旷场实验。以糖水偏好实验的糖水偏好                            analysis，OPLS-DA）及200次置换检验分析，以进行代谢
          率，旷场实验的总移动距离、穿越中心次数、不动时间为                           轮廓分析。同时，计算各色谱峰的变量重要性投影
          指标，评估大鼠的行为学特点。上述各实验的具体操作                           （variable important in projection，VIP），将满足组间差异
                                    [7]
          参考本课题组前期行为学研究 。                                     倍 数（fold  change，FC）≥1.20 或 ≤0.83，对 应 色 谱 峰
          2.4 样本采集                                            VIP＞1 且 P＜0.05 的物质表征为内源性差异代谢物 ，
                                                                                                           [10]
              行为学实验完成后，鉴于其评估结果和前期研究结                          并 根 据 化 合 物 的 精 确 分 子 量 ，借 助 HMDB 数 据 库
            [8]
          果 ，本研究选择药效最好的 SGHWT 中剂量进行后续                        （https：//www.hmdb.ca/）对化合物的二级碎片离子信息
          研究，以SGHWT组表示。                                       进行分析、鉴定。利用 MetaboAnalyst 6.0 数据处理工
              取空白组、模型组、SGHWT 组、氟西汀组大鼠，麻                       具，以P＜0.05为筛选条件，对最终得到的内源性差异代
          醉，随机选取每组 3 只，取全脑，并将脑组织置于 4% 多                       谢物进行京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclope‐


          · 1174 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 10                            中国药房  2025年第36卷第10期
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