Page 59 - 《中国药房》2025年9期
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PTN 虽然在淋巴细胞恶性肿瘤治疗领域具有广阔                        时，分别采集血液约 0.2 mL 到 EDTA-K2抗凝管中，离心
          的应用前景，但目前其在体内的代谢产物及代谢途径尚                           后取上层血浆。同时，分别收集各组大鼠给药前12 h以

          不十分清楚。而开展药物的体内代谢产物和代谢途径                            及给药后24 h的尿液和粪便。
          研究对于探索药物作用机制以及指导临床应用具有重                            2.3 样本前处理
          要意义   [6―7] 。高分辨质谱是一种用于未知化合物结构鉴                        血浆：合并后混匀各时间点每只大鼠的血浆，取
          定的有效工具，在药物代谢产物鉴定领域得到了广泛应                           200 μL，按照4∶1的体积比加入冷甲醇（－20 ℃）沉淀蛋
          用 [8―9] 。鉴于此，本研究采用 UHPLC-Orbitrap Exploris         白，以14 000 r/min离心15 min后取上清，氮气吹干后用
          240 系统，结合质谱解析软件及未知化合物结构鉴定策                         100 μＬ的 50% 甲醇复溶。尿液：取各时间点每只大鼠
          略，对大鼠血浆、尿液和粪便中 PTN 代谢产物进行分析                        的尿液20 μL，混匀后处理方法同血浆。粪便：粪便自然
          与鉴定，并推测其在大鼠体内的代谢途径，以期为 PTN                         干燥后研磨成粉末，取各时间点每只大鼠均质化后的粪
          的体内代谢和药效物质基础研究提供有效参考。                              便粉末 100 mg，混匀后加入 5 倍体积的 50% 甲醇，超声

          1 材料                                               30 min，以14 000 r/min离心30 min后取上清，氮气吹干，
          1.1 主要仪器                                           用50%甲醇100 μL复溶。
              本研究所用的主要仪器有：Vanquish 型超高效液相                    2.4 检测条件
          色 谱 仪 、Orbitrap  Exploris  240 高 分 辨 质 谱 仪（美 国         色谱条件：采用 Waters XSelect HSS T3（100 mm×
          Thermo Fisher Scientific 公司），XPE205DR 型十万分之        2.1 mm，2.5 μm）色谱柱，以水（含 0.1% 甲酸）为流动相
          一天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。                           A、乙腈（含 0.1% 甲酸）为流动相 B 进行梯度洗脱（0～
          1.2 主要药品与试剂                                        1.5 min，5%B；1.5～9.0 min，5%B→60%B；9.0～12 min，
              本研究所用的主要药品与试剂有：PTN 对照品（上                       60%B→100%B；12～14  min，100%B；14～14.3  min，
          海东苍生物科技有限公司，批号 DC500200，纯度＞                        100%B→5%B；14.3～15 min，5%B）；柱温为 40 ℃；流速

          98%），二甲基亚砜（北京百灵威科技有限公司，批号                          为0.5 mL/min；进样体积为8 μL。
          LO50V115，纯度99.8%），羧甲基纤维素钠（CMC-Na，国                     质谱条件：采用电喷雾离子源，在正、负离子模式下
          药集团化学试剂有限公司，批号 20210402），甲醇、乙腈                     扫描；电喷雾电压分别为3.5、－2.5 kV；碰撞能梯度参数
         （美国Thermo Fisher Scientific公司，色谱级）。                 为15、20、25 eV；毛细管温度为350 ℃；辅助气流速为10
          1.3 动物                                             arb；扫描范围为质荷比（m/z）50～1 000 Da（Full MS）、
                                                                                        2
              6 只 8 周龄 SD 雄性大鼠，体重（230±10） g，购自北              m/z 50～500 Da（Full MS/dd MS）。
          京华阜康生物技术有限公司[生产许可证号：SCXK（京）                        2.5 样本检测及数据处理
          2024-0003]。将大鼠置于代谢笼中，实验前在 SPF 条件                       取“2.3”项下样本按“2.4”项下条件进样分析。使用

          下饲养 1 周，饲养期间自由摄食、饮水（给药前 12 h 禁                     Xcalibur 2.0数据处理系统采集和处理质谱数据，同时使
          食）。本研究通过首都医科大学附属北京友谊医院实验                           用 Compound Discoverer 3.0 软件对实验样品和给药前
          动物管理与使用伦理委员会审查批准，伦理审查号：24-                         的血浆空白样品进行二元比对；设置质量偏差小于 5
          1003。                                              ppm，并根据同位素丰度比、氮规则解析等发现可能的代
          2 方法                                               谢产物。然后根据精确分子质量、元素组成、保留时间
          2.1 PTN混悬液的配制                                     （retention time，RT）等信息确定可能的潜在代谢产物，再
              先使用纯净水配制 0.5%CMC-Na 溶液，磁力搅拌                    针对性采集这些代谢产物的二级谱图，并对其二级碎片
          48 h 使其形成稳定的溶液，再精密称取 PTN 对照品                       离子进行解析，确定代谢位点。
          19.92 mg加入溶液中，超声混匀，配制成质量浓度为 1.0                    3 结果
          mg/mL的混悬液。                                         3.1 PTN的体内代谢产物分析结果

          2.2 动物实验样本采集                                           通过对大鼠给药前后的血浆、尿液和粪便图谱进行
              6只大鼠按照10 mg/kg（根据前期预实验结果确定）                    分析，并结合精确分子质量、RT、二级碎片离子等参数，
          灌胃PTN混悬液，灌胃体积约为2.3 mL。所有大鼠在给                       共初步鉴定出29种代谢产物。其中，在血浆、尿液、粪便
          药前 30 min 以及给药后 0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24 h         中分别检测到17、19、22种代谢产物；仅在血浆中检测到


          中国药房  2025年第36卷第9期                                                China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 9    · 1077 ·
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