Page 51 - 《中国药房》2025年8期
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平静呼吸后记录 FEV0.3、FVC、PEF，并计算 FEV0.3 与                较，Bumetanide-L 组、Bumetanide-H 组大鼠上述指标均
          FVC的比值百分数。                                         显著升高（P＜0.05），且 Bumetanide-H 组大鼠上述指标
          2.4 支气管肺泡灌洗液中炎症因子水平检测                              均显著高于 Bumetanide-L 组（P＜0.05）；与 Bumetanide-
              肺功能指标检测结束后，处死各组大鼠，取右肺组
                                                             H 组比较，Bumetanide-H+PY-60 组大鼠上述指标均显著
          织，用生理盐水灌洗 3 次，每次 5 mL。回收支气管肺泡
                                                             降低（P＜0.05）。结果见表1。
          灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF），混合，按
          ELISA 试剂盒说明书方法操作，检测 BALF 中 TNF-α、                      表1 各组大鼠肺功能指标比较（x±s，n＝12）
                                                              组别          FEV0.3/（V/mL）  FVC/（V/mL）  （FEV0.3/FVC）/%  PEF/（mL/s）
          IL-6、IL-1β水平。
                                                              Control组    9.41±0.96  12.46±1.31  75.52±0.78  33.59±3.42
          2.5 肺组织病理形态观察                                       COPD组       4.52±0.53 a  7.12±0.72 a  63.48±0.69 a  20.71±2.16 a
              各组随机选择 6 个右肺组织，固定后用乙醇梯度脱                        Bumetanide-L组  6.73±0.74 b  9.53±0.97 b  70.62±0.72 b  26.38±2.75 b
          水，浸蜡包埋，切片（厚度5 μm），常规脱蜡至水，干燥后                        Bumetanide-H组  9.15±0.96 bc  12.21±1.28 bc  74.94±0.77 bc  32.76±3.38 bc
                                                              Bumetanide-H+PY-60组  7.04±0.76 d  9.84±1.01 d  71.54±0.74 d  27.05±2.81 d
          进行 HE 染色；乙醇梯度脱水，二甲苯透明，干燥密封后
                                                                a：与Control组比较，P＜0.05；b：与COPD组比较，P＜0.05；c：与
          用光学显微镜观察肺组织病理形态。同时分别从肺泡
                                                             Bumetanide-L组比较，P＜0.05；d：与Bumetanide-H组比较，P＜0.05。
          水肿、肺间质水肿、肺泡内充血、中性粒细胞浸润4个方
                                                             3.2 布美他尼对 COPD 大鼠 BALF 中炎症因子水平的
          面进行肺损伤评分：0分，正常，无损伤；1分，轻度受损；2
                                                             影响
          分，中度受损；3分，重度受损；4分，极重度受损；每项分
                                   [11]
          值均为0～4分，总分0～16分 。                                      与 Control 组比较，COPD 组大鼠 BALF 中 TNF-α、
          2.6 肺纤维化情况观察                                       IL-6、IL-1β 水平均显著升高（P＜0.05）；与 COPD 组比
              取“2.5”项下剩余右肺组织石蜡切片，脱蜡至水，进                      较 ，Bumetanide-L 组 、Bumetanide-H 组 大 鼠 BALF 中
          行Masson染色，清洗，脱水透明，干燥，用光学显微镜观                       TNF- α、IL-6、IL-1β 水 平 均 显 著 降 低（P＜0.05），且
          察蓝色胶原沉积情况，即肺纤维化情况。                                 Bumetanide-H 组 大 鼠 上 述 指 标 水 平 均 显 著 低 于
          2.7 肺纤维化相关因子表达检测                                   Bumetanide-L 组（P＜0.05）；与 Bumetanide-H 组 比 较 ，
              取“2.5”项下剩余右肺组织石蜡切片，常规处理后，                      Bumetanide-H+PY-60 组大鼠 BALF 中 TNF-α、IL-6、IL-
          进行抗原修复，再加入3%H2O2进行反应，随后进行血清
                                                             1β水平均显著升高（P＜0.05）。结果见表2。
          封闭。与 TGF-β、α-SMA 一抗（稀释比例分别为 1∶50、
          1∶500）低温反应过夜，次日与二抗（稀释比例 1∶200）室                    表2 各组大鼠 BALF 中炎症因子水平比较（x±s，n＝
                                                                  12，pg/mL）
          温摇床 1 h，最后加入 3，3′-二氨基联苯胺四盐酸盐显
          色，苏木精复染，光学显微镜采集图像并用Image J软件                        组别              TNF-α         IL-6       IL-1β
                                                              Control组      45.83±4.61    92.67±9.42  30.82±3.15
          分析TGF-β、α-SMA平均光密度（TGF-β、α-SMA阳性表                   COPD组         109.62±11.05 a  302.49±31.24 a  96.74±9.73 a
          达呈棕褐色、褐色）。                                          Bumetanide-L组  83.71±8.64 b  229.63±23.68 b  69.53±7.11 b
          2.8 肺组织中YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达检测                         Bumetanide-H组  55.49±5.72 bc  137.51±14.52 bc  38.26±3.96 bc
                                                              Bumetanide-H+PY-60组  80.27±8.13 d  205.74±21.47 d  65.33±6.75 d
              将各组剩余 6 只大鼠的右肺组织冰冻研磨，与蛋白
                                                                a：与Control组比较，P＜0.05；b：与COPD组比较，P＜0.05；c：与
          裂解液充分反应，提取组织中总蛋白并定量。根据蛋白
                                                             Bumetanide-L组比较，P＜0.05；d：与Bumetanide-H组比较，P＜0.05。
          样品进行沸水浴变性，随后电泳、转膜、封闭，加入 p-
                                                             3.3 布美他尼对COPD大鼠肺组织病理形态的影响
          YAP、YAP、TAZ、β-actin一抗（稀释比例分别为1∶1 000、
          1∶1 000、1∶1 000、1∶20 000），在4 ℃下反应过夜；次日与                Control 组大鼠肺组织及细胞结构、形态正常；与
          二抗（稀释比例1∶2 000）在室温下反应1 h，再与ECL反                    Control 组比较，COPD 组大鼠肺组织结构遭到破坏，肺
          应，最后收集图像并用 Image J 软件分析蛋白条带灰度                      上皮细胞大量脱落，管壁增厚，炎症细胞浸润明显，肺损
          值。以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）条带灰度值的比值                      伤 评 分 显 著 升 高（P＜0.05）；与 COPD 组 比 较 ，
          表示目的蛋白的表达水平，以p-YAP与YAP的蛋白表达                        Bumetanide-L 组、Bumetanide-H 组大鼠肺组织病理损伤
          水平比值表示YAP蛋白磷酸化水平。                                  均减轻，肺上皮细胞脱落及管壁增厚情况均得到改善，
          2.9 统计学方法                                          炎症细胞浸润均减少，肺损伤评分均显著降低（P＜
              采用 SPSS 20.0 软件进行统计分析。实验数据以
                                                             0.05），且 Bumetanide-H 组大鼠肺损伤评分显著低于
          x±s 表示，多组间样本均数间比较采用单因素方差分
                                                             Bumetanide-L 组（P＜0.05）；与 Bumetanide-H 组 比 较 ，
          析，组间两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
          3 结果                                               Bumetanide-H+PY-60组大鼠肺组织病理损伤加重，肺上
          3.1 布美他尼对COPD大鼠肺功能的影响                              皮细胞脱落严重，管壁明显增厚，炎症细胞浸润明显增
              与 Control 组 比 较 ，COPD 组 大 鼠 FEV0.3、FVC、        多 ，肺 损 伤 评 分 显 著 升 高（P＜0.05）。 结 果 见 图 1
          FEV0.3/FVC、PEF 均显著降低（P＜0.05）；与 COPD 组比             和表3。


          中国药房  2025年第36卷第8期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 8    · 941 ·
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