Page 50 - 《中国药房》2025年8期
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慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary          Masson 染色试剂盒（批号 60532ES58）购自翌圣生物科
          disease，COPD）是以持续性不完全可逆的气流受限为主                      技（上海）股份有限公司；兔源转化生长因子 β（transfor-
          要特征的常见肺部疾病，其发病与季节变化相关，好发                            ming growth factor-β，TGF-β）一抗（批号3711）购自美国
          于秋冬季节寒冷时，常表现为胸闷气短、呼吸困难、慢性                           CST 公 司 ；兔 源 磷 酸 化 YAP（phosphorylation YAP，p-
                     [1]
          咳嗽、咳痰等 。COPD发病率逐年增长，预计2030年将                        YAP）、YAP 一抗（批号分别为 ab76252、ab81183）均购自
          成为全球第三大死亡的主要原因，给患者家庭及社会带                            英国 Abcam 公司；兔源 α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth
                        [2]
          来沉重经济负担 。COPD发病机制为气流持续受阻引                           muscle actin，α-SMA）一抗（批号K10885）购自北京百奥
          发气道炎症及氧化应激反应，导致气道重塑、肺纤维化，                           莱博科技有限公司；兔源 TAZ 一抗（批号 sc-518026）购
          肺损伤加剧，若不及时治疗，将进一步发展为肺心病、呼                           自美国 Santa Cruz Biotechnology 公司；兔源 β-肌动蛋白
                                  [3]
          吸衰竭等，甚至危及生命 。虽然常用的化学药对                             （β-actin）一抗、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗（批
          COPD有一定改善，但其副作用较大，使用有限。因此，                          号分别为 abs132001、abs20002）均购自爱必信（上海）生
          寻求安全、高效的 COPD 治疗药物已成为目前的研究                          物科技有限公司。
          重点。                                                 1.3 动物
              肺病患者往往表现出肺水肿现象，而利尿剂对于消                              SPF级SD雄性大鼠66只，7周龄，体重（200±20）g，
          除水肿效果良好，适当、谨慎选择利尿剂将有助于肺相                            购自湖北贝恩特生物科技有限公司，生产许可证号为
          关疾病的治疗。布美他尼是一种主要用于治疗心力衰                             SCXK（鄂）2021-0027。大鼠饲养条件：温度 20～25 ℃，
          竭、肝病、肾病等水肿性疾病的利尿药。研究显示，布美                           相对湿度50%～65%，每12 h昼夜交替，自由摄食、饮水。
          他尼可减弱脂多糖诱导的小鼠组织炎症和急性肺损                              动物实验在湖北贝恩特生物科技有限公司进行，且已通
            [4]
          伤 ，但其作用机制尚不清楚。Yes 相关蛋白/含有 PDZ                       过该公司动物伦理委员会审核批准（批准号：BNT-
          结合基序的转录共激活因子（Yes-associated protein/tran‐           2023417）。
          scriptional  coactivator  containing  PDZ-binding  motif，  2 方法
          YAP/TAZ）信号通路作为高度保守的信号级联通路，在                         2.1 COPD大鼠模型构建
          多种细胞及生物中发挥作用，参与包括肺相关疾病在内                                取 66 只大鼠适应性喂养 1 周后，除对照组（Control
                                        [5]
          的多种炎症相关疾病的发生发展 。研究发现，YAP/                           组）15只大鼠外，剩余大鼠于实验第1～15天进行麻醉，
          TAZ 信号通路异常激活可加剧炎症反应，增加胶原沉                           沿颈中部切口，分离气管，头皮针穿刺气管并沿气管注
                                          [6]
          积，引发肺泡上皮失调促进肺纤维化 。本研究主要基                            入2 mg/kg脂多糖溶液，随后将大鼠直立旋转2 min以便
          于YAP/TAZ信号通路，探索布美他尼对COPD大鼠肺损                        药物充分流入肺内，缝合伤口后正常饲养 。造模给药
                                                                                                  [7]
          伤的影响及机制，以期为COPD的治疗寻求新策略。                            结束次日，Control组与造模组各选择3只大鼠使用肺功
          1 材料                                                能检测仪检测大鼠0.3 s用力呼气容积（forced expiratory
          1.1 主要仪器                                            volume  in  0.3  seconds，FEV0.3）、用 力 肺 活 量（forced
              本研究所用主要仪器包括PFT-MR型小动物肺功能                        vital  capacity，FVC）及 呼 气 流 量 峰 值（peak  expiratory
          检 测 仪（上 海 塔 望 智 能 科 技 有 限 公 司）、SuPer‐               flow，PEF）并处死后取肺组织进行病理观察，若上述肺
          Max3000FL型多功能酶标仪（上海闪谱生物科技有限公                        功能指标明显下降且肺组织病理损伤严重，则表示
                                                                           [8]
          司）、RX50 型光学显微镜[思科诺思生物科技（北京）有                        COPD造模成功 。
          限公司]、DM IL LED 型荧光显微镜（德国 Leica 公司）、                 2.2 分组与处理
          4200SF型凝胶成像分析系统（上海天能科技有限公司）。                            将 COPD 造模成功的 48 只大鼠随机分为模型组
          1.2 主要药品与试剂                                        （COPD 组），布美他尼低、高剂量组（Bumetanide-L 组、
              布美他尼对照品（纯度≥98%，批号 B129942）购自                    Bumetanide-H组），布美他尼高剂量+YAP/TAZ信号通路
          上海阿拉丁生化科技股份有限公司；脂多糖（纯度≥                             激 活 剂 组（Bumetanide-H+PY-60 组），每 组 12 只 。
          99%，批号 L8880）购自北京索莱宝科技有限公司；YAP/                     Bumetanide-L组、Bumetanide-H组大鼠分别于造模前30
                                                                                              [9]
          TAZ 信 号 通 路 激 活 剂 PY-60（纯 度 ≥98%，批 号 HY-            min单次吸入布美他尼0.15、0.3 mg/kg ；Bumetanide-H+
          141644）购自美国MCE公司；肿瘤坏死因子α（tumor ne‐                  PY-60 组大鼠于造模前 30 min 单次吸入布美他尼 0.3
                                                                                                  [10]
          crosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-    mg/kg，并单次尾静脉注射 PY-60 16 mg/kg ；Control 组
          6）、IL-1β 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别                    与COPD组大鼠吸入和尾静脉注射等体积的生理盐水。
          为ER006、ER003-48、ER008-16）均购自上海吉泰依科赛                 2.3 肺功能指标检测
          生物科技有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（批号                             造模给药结束次日，麻醉并固定大鼠，颈中部消毒
          E-IR-R117）购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司；                       切口，分离气管，然后连接气管插管与肺功能检测仪，待


          · 940 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 8                               中国药房  2025年第36卷第8期
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