Page 39 - 《中国药房》2025年8期
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量体表面积法换算），每天1次。实验第21、28、35天，空                      兔，沿双侧后膝关节中心纵向切开表面皮肤，分离髌骨
          白组和模型组大耳兔均双后膝关节注射生理盐水 0.5                          和胫骨，剥离滑膜组织，多聚甲醛固定。同法采集另一
          mL，每天1次。                                           侧膝关节滑膜组织，液氮冷冻后，－80 ℃保存。取出大
          2.2.2 类叶牡丹关节注射液对RA大耳兔膝关节的影响                        耳兔滑膜组织，进行脱水、浸蜡、包埋、切片、苏木素-伊
              以关节炎指数评分、膝关节直径和痛阈值变化反映                         红染色、封片，观察其形态变化并进行图像分析。
          类叶牡丹关节注射液对RA大耳兔膝关节的影响。（1）关                             结果显示，空白组大耳兔膝关节滑膜排列规整，滑
          节炎指数评分：在实验第0、7、14、21、28、35、42天对大耳                  膜下层结缔组织无增生和水肿，未见炎症细胞浸润与毛
          兔关节进行评分。（2）膝关节直径：大耳兔膝关节周围剃                         细血管扩张。与空白组比较，模型组大耳兔膝关节滑膜
          毛后，伸直后肢后沿髌骨下缘进行标记作测量点。在实                           明显增厚且排列紊乱，滑膜下层结缔组织明显增生，可
          验第 0、7、14、21、28、35、42 天分别测量大耳兔膝关节直                 见大量的炎症细胞浸润、毛细血管增生并扩张充血。与
          径。（3）痛阈值：使用压力测痛装置对大耳兔的外膝眼部                         模型组比较，各给药组大耳兔膝关节滑膜上述病理变化
          位施加压力，以大耳兔出现弹腿动作作为疼痛反应指                            均有不同程度的改善，表现为滑膜层增生减轻，下层结缔
          标。信号出现时，记录压力值作为痛阈值，在实验第 0、                         组织增生减少，炎症细胞和毛细血管数量减少，以类叶牡
          7、14、21、28、35、42 天分别检测大耳兔痛阈值，重复 3                  丹高剂量组和阳性对照组改善最为明显。结果见图3。
          次，每2次间隔5 min，取均值。                                  2.2.4 类叶牡丹关节注射液对RA大耳兔血清及关节滑
              实验数据采用 SPSS 26.0 软件进行统计分析，采用                   液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影响
          GraphPad Prism 10.1.2软件绘图。计量资料满足正态分                    取“2.2.3”项下血液和关节滑液的上清液，按ELISA
          布，以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一                         试剂盒提供的操作流程，分别检测血清及关节滑液中
          步两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。                         TNF-α、IL-1β 及 IL-6 水平。参考“2.2.2”项下方法进行
              结果显示，在实验第21天，与空白组比较，其他组大                       统计分析，结果显示，与空白组比较，模型组大耳兔血清
          耳兔的关节炎指数评分和膝关节直径均显著增加，痛阈                           和关节滑液中 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平均显著升高（P＜
          值均显著降低（P＜0.01）。在实验第 42 天，与空白组比                     0.01）；与模型组比较，各给药组大耳兔血清和关节滑液
          较，模型组大耳兔的关节炎指数评分和膝关节直径均显                           中 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜
          著增加，痛阈值显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，各                       0.01）。结果见表2。
          给药组大耳兔关节炎指数评分（类叶牡丹低剂量组除                            2.2.5 类叶牡丹关节注射液对RA大耳兔膝关节滑膜组
          外）、膝关节直径均显著降低（P＜0.01或P＜0.05），痛阈                    织中JAK2和STAT3磷酸化的影响
          值均显著增加（P＜0.01）。结果见图2。                                  采用 Western blot 法检测。取“2.2.3”项下滑膜组
          2.2.3 类叶牡丹关节注射液对RA大耳兔膝关节滑膜组                        织，将每个样本置于裂解液中进行蛋白提取，提取后按
          织形态的影响                                             照 BCA 蛋白浓度测定试剂盒步骤操作进行蛋白定量，
              在实验第42天，将大耳兔麻醉，颈总动脉取血；双侧                       在制胶后上样进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
          膝关节腔内注射 2 mL 生理盐水，局部轻揉后抽取关节                        泳；电泳结束后转至 PVDF 膜，将 PVDF 膜进行封闭，封
          腔内滑液，将血液和关节滑液分别以3 000 r/min离心15                    闭后进行一抗、二抗抗体孵育（JAK2、p-JAK2、STAT3、p-
          min，取上清液，分装于 EP 管，－80 ℃保存。处死大耳                     STAT3、GAPDH一抗稀释比例均为1∶1 000，二抗稀释比

            8        a                                 a                       7                    空白组
                        a  a  a  空白组                     a  a      空白组
                                 模型组                          a    模型组         6                 c  模型组
                                                                                                    阳性对照组
            6
           关节炎指数评分  4        b c c  类叶牡丹低剂量组  膝关节直径/mm  20    b c c  类叶牡丹低剂量组  痛阈值/ibf  5 4      c c c  类叶牡丹低剂量组
                                 阳性对照组
                                                                   阳性对照组
                                 类叶牡丹中剂量组
                                                                                                    类叶牡丹中剂量组
                                                                   类叶牡丹中剂量组
                                 类叶牡丹高剂量组
                                                                                                    类叶牡丹高剂量组
                                                                   类叶牡丹高剂量组
            2
                                                               c
                                                                               3
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            0                                15                                2
              0    7  14  21  28  35  42        0    7  14  21  28  35  42       0    7  14  21  28  35  42
                    天数                                天数                                天数
                A.关节炎指数评分                          B.膝关节直径                            C.痛阈值
             a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05，c：与模型组比较，P＜0.01；ibf：压力单位。
                      图2 各组大耳兔在不同时间点关节炎指数评分、膝关节直径和痛阈值比较（x±±s，n＝6）
               A.空白组           B.模型组           C.阳性对照组       D.类叶牡丹低剂量组       E.类叶牡丹中剂量组      F.类叶牡丹高剂量组
             红色箭头：血管增生；蓝色箭头：炎症细胞浸润。
                         图3 各组大耳兔膝关节滑膜组织形态显微图（苏木素-伊红染色，标尺为50 μm）


          中国药房  2025年第36卷第8期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 8    · 929 ·
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