Page 32 - 《中国药房》2025年8期
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2 方法 脱水、透明、封片后，使用显微镜观察其病理学变化情
2.1 造模、分组、给药与取样 况，并拍照。
所有家兔适应性喂养1周后开始正式实验。于实验 2.5 家兔心肌细胞凋亡情况检测
第 1 天经耳缘静脉取血 2 mL 后按随机数字表法分为空 采用TUNEL染色法观察。取“2.3”项下经固定的各
组家兔心肌组织适量，用 PBS 洗净后，以石蜡包埋后切
白组（blank 组）、模型组（CP 组）、UTI 低/高剂量组（UTIL
组/UTIH组）、JNK 抑制剂组（JNKi 组），每组 5 只。blank 片（厚约 4 μm）。取上述切片，参照试剂盒方法，加入
组家兔经右侧耳缘静脉注射生理盐水 2 mL，每天 1 次， TUNEL工作液孵育和4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）
连续7 d；同时于实验第1、4天经左侧耳缘静脉注射生理 染液染核，封片后，使用显微镜观察其心肌细胞凋亡情
盐水 2 mL。CP 组家兔经右侧耳缘静脉注射生理盐水 2 况（正常心肌细胞核呈蓝色荧光，凋亡心肌细胞核呈绿
mL，每天1次，连续7 d；同时于实验第1、4天经左侧耳缘 色荧光），并随机挑选5个视野记录视野内绿色荧光及蓝
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静脉注射 CP 150 mg/m（以生理盐水为溶剂，剂量参考 色荧光细胞数，以绿色荧光细胞数与蓝色荧光细胞数的
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前期预实验结果，并按 Meeh-Rubner 公式 根据家兔体 百分比表示细胞凋亡指数。
表面积换算而得）。UTIL组、UTIH组家兔分别经右侧耳 2.6 家兔心肌组织中相关蛋白表达检测
缘静脉注射UTI 2.5万单位/kg、5.0 万单位/kg（以生理盐 采用Western blot法检测。取“2.3”项下冻存的各组
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水为溶剂） ，每天 1 次，连续 7 d；同时于实验第 1、4 天 家兔心肌组织适量，经生理盐水洗净、研磨、离心后，收
注射 UTI 并观察 1 h 后，再经左侧耳缘静脉注射 CP 150 集上清液。经 BCA 法测定蛋白浓度后进行变性处理。
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mg/m 。JNKi组家兔于实验第1、4天经右侧耳缘静脉注 取变性蛋白适量，进行电泳分离、转膜、封闭；洗膜后，加
射SP600125 15 mg/kg（以二甲基亚砜溶解后再以生理盐 入 Bax、Bcl-2、p-JNK、JNK、Mff、Drp1、β-actin 一抗（稀释
水为溶剂，剂量参考其说明书）并观察 1 h 后，再经左侧 比例分别为1∶3 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶3 000、1∶1 000、
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耳缘静脉注射CP 150 mg/m ；同时，于其余5 d经右侧耳 1∶1 000、1∶5 000），4 ℃孵育过夜；洗膜后，加入相应二抗
缘静脉注射生理盐水2 mL，每天1次。实验第8天，各组 （稀释比例均为1∶5 000），室温孵育30 min；洗膜后，以显
家兔经任一耳缘静脉注射25%乌拉坦溶液（以生理盐水 色剂曝光并在化学发光凝胶成像系统下成像。使用Ima-
为溶剂）4 mL/kg麻醉，经颈静脉取血2 mL后开胸，快速 ge J 软件分析各蛋白条带的灰度值，以目的蛋白与内参
结扎心脏底部所有血管，摘取心脏，备用。 蛋白（β-actin）的灰度值比值作为目的蛋白的表达水平。
2.2 家兔血清中cTnⅠⅠ水平检测 2.7 统计学方法
采用 ELISA 法检测。取“2.1”项下实验第 1 天和实 使用SPSS 26.0软件对数据进行统计分析。计量资
验第8天的各组家兔静脉血样品，以3 000 r/min离心15 料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一
min，分离上层血清，使用酶标仪于 450 nm 波长处检测 步两两比较采用 LSD-t 检验（方差齐）或 Tamhane’s T2
其吸光度值并参照试剂盒说明书中的标准曲线法计算 检验（方差不齐）。检验水准α＝0.05。
血清中cTnⅠ水平。 3 结果
2.3 家兔心肌组织中SOD、GSH、MDA水平检测 3.1 UTI对家兔血清中cTnⅠⅠ水平的影响
采用 ELISA 法检测。取“2.1”项各组家兔的心脏， 实验第1天，各组家兔血清中cTnⅠ水平比较，差异
用4 ℃的磷酸盐缓冲液（PBS）清洗2～3次后，在垂直并 均无统计学意义（P＞0.05）。实验第 8 天，与 blank 组比
靠近于室间隔中心处将心脏切为两部分，一部分于 较，CP组家兔血清中cTnⅠ水平均显著升高（P＜0.05）；
－80 ℃下冻存，另一部分于4%多聚甲醛中固定，备用。 与 CP 组比较，UTIL组、UTIH组、JNKi 组家兔血清中 cTn
取冻存的各组家兔心肌组织适量，用 PBS 充分匀浆后， Ⅰ水平均显著降低（P＜0.05），而 UTIL组、UTIH组、JNKi
以3 000 r/min离心20 min，取上清液，使用酶标仪于450 组组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。
nm波长处检测其吸光度值并参照试剂盒说明书中的标 表1 各组家兔血清中cTnⅠ水平比较（x±s，n＝5）
准曲线法计算心肌组织中SOD、GSH、MDA水平。 组别 实验第1天 实验第8天
blank组 192.52±3.64 206.61±9.53
2.4 家兔心肌组织病理学变化观察 CP组 189.10±19.45 411.70±24.03 a
采用 HE 染色法观察。取“2.3”项下经固定的各组 UTI L组 182.56±6.55 298.41±25.24 b
UTI H组 190.83±11.89 277.53±3.54 b
家兔心肌组织适量，用 PBS 洗净后，以石蜡包埋后切片 JNKi组 187.43±11.41 280.08±6.53 b
（厚约2～3 μm）。取上述切片，经脱蜡、水洗、HE染色、 a：与blank组比较，P＜0.05；b：与CP组比较，P＜0.05。
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