Page 76 - 《中国药房》2025年6期
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2.2 大鼠血清中脂肪酶、淀粉酶水平检测                                以 β-actin 为内参，采用 Image J 软件分析各目的蛋白的
              予各组大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（35 mg/kg）麻醉，                     条带灰度值，用各目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度
          以颈椎脱位法处死，于腹主动脉取血，血样以3 000 r/min                     值比值表示目的蛋白的表达水平。
          离心 15 min，分离上层血清，以全自动生化仪检测其脂                        2.7 统计学方法
          肪酶、淀粉酶水平。                                               采用SPSS 27.0软件对数据进行统计分析。计量资
          2.3 大鼠血清氧化应激指标及炎症因子水平检测                             料以 x±s 表示，以单因素方差分析进行多组间比较，以
              取“2.2”项下各组大鼠血清样品，按照相应试剂盒说                       SNK-q 检 验 进 行 进 一 步 的 两 两 比 较 。 检 验 水 准
          明书方法操作，使用酶标仪检测其血清氧化应激指标                             α＝0.05。
         （MDA、SOD）及炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）水平。                  3 结果
          2.4 大鼠结肠黏膜组织、胰腺组织病理学变化观察                            3.1 PLT对大鼠血清中脂肪酶、淀粉酶水平的影响
              取血后，分离各组大鼠结肠黏膜、胰腺组织。取适                              AP 组大鼠血清中脂肪酶、淀粉酶水平均较假手术
          量，用 4% 多聚甲醛溶液固定后，行乙醇梯度脱水、石蜡                         组显著升高（P＜0.05）；PLT 组、地塞米松组大鼠血清中
          包埋、切片（厚约 5 μm）。取部分切片，依次进行苏木                         脂肪酶、淀粉酶水平均较AP组显著降低，而抑制剂组上
          精、伊红染色，经乙醇梯度脱水、二甲苯浸泡后，以中性                           述指标则较AP组显著升高（P＜0.05）；PLT+抑制剂组大
          树脂封片，使用光学显微镜观察上述组织的病理学变                             鼠脂肪酶、淀粉酶水平较 PLT 组显著升高，但较抑制剂
          化。采用Chiu评分对结肠组织的黏膜绒毛、毛细血管扩                          组显著降低（P＜0.05）。结果见表2。
          张、炎症浸润及组织出血进行 0～5 分的评分（总分为 5                        表2 各组大鼠血清中脂肪酶、淀粉酶水平比较（x±s，
          分，与黏膜损伤程度成正比），具体标准为：无损伤，记 0                              n＝10，kU/L）
          分；组织出现间隙，记1分；组织间隙增加，且肠黏膜与黏                          组别      淀粉酶     脂肪酶    组别        淀粉酶      脂肪酶
                                                              假手术组   1.42±0.15  0.42±0.05  地塞米松组  2.81±0.30 b  0.94±0.10 b
          膜下层分离，记2分；肠黏膜与黏膜下层进一步分离，肠
                                                              AP组    6.04±0.62 a  2.16±0.23 a  抑制剂组  8.86±0.91 b  3.18±0.33 b
          绒毛两侧可见大量上皮隆起，记 3 分；大量炎症细胞浸                          PLT组   2.75±0.29 b  1.03±0.11 b  PLT+抑制剂组  5.42±0.56 cd  1.16±0.12 cd
          润，血管暴露，且绒毛变钝，记4分；组织形成溃疡，并伴                             a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与AP组比较，P＜0.05；c：与PLT组
                       [13]
          有出血，记5分 。采用Schmidt法对胰腺组织的腺泡坏                        比较，P＜0.05；d：与抑制剂组比较，P＜0.05。
          死、出血、炎症及水肿程度分别进行0～4分的评分（总分                          3.2 PLT对大鼠血清中氧化应激指标的影响
                                                      [14]
          为16分，分值越高胰腺损伤越严重），具体标准见表1 。                             AP组大鼠血清中MDA水平较假手术组显著升高，
                       表1 Schmidt法评分标准                        SOD水平显著降低（P＜0.05）。PLT组、地塞米松组大鼠
           分值 腺泡坏死       出血        炎症             水肿          血清中 MDA 水平较 AP 组显著降低，SOD 水平显著升
           0  无坏死        无出血       无炎症细胞浸润        无水肿         高；而抑制剂组血清中大鼠 MDA 水平较 AP 组显著升
           1  坏死面积1%～10%  实质性出血面积≤25% 高倍视野内白细胞有2～10个 区域性水肿    高，SOD 水平显著降低（P＜0.05）。PLT+抑制剂组大鼠
           2  坏死面积＞10%～20% 出血面积＞25%～50% 高倍视野内白细胞有11～20个 弥散性水肿
           3  坏死面积＞20%～30% 出血面积＞50%～75% 高倍视野内白细胞有21～30个 可见小叶间隙增加  血清中 MDA 水平较 PLT 组显著升高，SOD 水平显著降
           4  坏死面积＞30%   出血面积＞75%  高倍视野内白细胞＞30个   可见小叶分离      低（P＜0.05）；而 MDA 水平较抑制剂组显著降低，SOD
          2.5 大鼠结肠黏膜组织细胞凋亡情况观察                                水平显著升高（P＜0.05）。结果见表3。
              取“2.4”项下各组大鼠的剩余结肠黏膜组织切片，脱                       表3 各组大鼠血清中氧化应激指标水平比较（x±s，
          蜡后，于 37 ℃下以蛋白酶 K 溶液处理，加入 TUNEL 反                         n＝10）
          应试剂于 37 ℃下孵育，用磷酸盐缓冲溶液洗涤后，用                          组别    MDA/（μmol/L）  SOD/（U/mg）  组别  MDA/（μmol/L）  SOD/（U/mg）
          4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染液于室温下复染细                      假手术组   86.06±8.71  45.63±4.66  地塞米松组  102.06±10.34 b  35.06±3.61 b
                                                              AP组   186.24±18.76 a  16.85±1.71 a  抑制剂组  264.85±26.75 b  10.24±1.08 b
          胞核，使用显微镜观察细胞凋亡（凋亡细胞呈棕色）情                            PLT组   97.82±9.88 b  34.76±3.57 b  PLT+抑制剂组  165.26±16.61 cd  15.06±1.53 cd
          况，并以凋亡细胞/总细胞×100%计算凋亡率。                                a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与AP组比较，P＜0.05；c：与PLT组
          2.6 大鼠结肠黏膜组织中通路相关蛋白表达检测                             比较，P＜0.05；d：与抑制剂组比较，P＜0.05。
              取“2.4”项下各组大鼠的结肠黏膜组织适量，提取总                       3.3 PLT对大鼠血清中炎症因子水平的影响
          蛋白，以 BCA 法测定浓度后于 100 ℃下煮沸 5 min 使变                      AP组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均较假手
          性。取变性蛋白适量，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰                            术组显著升高（P＜0.05）；PLT 组、地塞米松组大鼠血清
          胺凝胶电泳并转膜，以封闭缓冲液封闭 2 h；洗膜后，加                         中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平均较 AP 组显著降低，而抑制
          入 Keap1、Nrf2、HO-1、β-actin 一抗（稀释比例分别为 1∶             剂组上述指标则均较AP组显著升高（P＜0.05）；PLT+抑
          1 000、1∶500、1∶1 000、1∶1 000），于 4 ℃下孵育过夜；洗           制剂组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平均较 PLT 组
          膜后，加入相应二抗（稀释比例为1∶2 000），于室温下孵                       显著升高，但较抑制剂组显著降低（P＜0.05）。结果
          育 2 h；以 ECL 试剂显色后，置于凝胶成像系统下成像。                      见表4。


          · 706 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 6                               中国药房  2025年第36卷第6期
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