Page 48 - 《中国药房》2025年6期
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对照品储备液。临用前，取上述对照品储备液，用甲醇                            2.5.3 残留效应
          稀释，得系列质量浓度（3 种成分均依次稀释为 1 000、                           取“2.5.2”项下线性范围上限质量浓度的校正标样
          600、500、400、100、80、50、40、20 ng/mL）的混合对照品           （阿魏酸、芍药苷、迷迭香酸质量浓度均为500 ng/mL）和
          溶液，备用。                                              空白血浆样品，按“2.4”项下方法处理（处理空白血浆样
          2.3.2 内标溶液                                          品时，以同体积的甲醇代替内标溶液）后，依次按“2.1”
              精密称取内标对照品适量，置 10 mL 容量瓶中，加                     “2.2”项下条件进样，以估计各待测成分的残留效应（即
          甲醇充分溶解并定容，配成质量浓度为1 mg/mL的内标                         在各待测成分对应的保留时间处，空白血浆样品与
          储备液，于－20 ℃下保存。临用前，取上述内标储备液，                         LLOQ质控血浆样品中各色谱峰峰面积的比值）。结果
          用甲醇稀释，得质量浓度200 ng/mL的内标工作液。                         显示，在空白血浆样品中，阿魏酸、芍药苷、迷迭香酸的
          2.4 血浆样品处理                                          残留效应均符合2020年版《中国药典》（四部）通则的相
              精密吸取待测血浆样品50 μL，置1.5 mL离心管中，                    关要求。
                                                              2.5.4 精密度与准确度试验
          加入甲醇 50 μL，涡旋 30 s；依次加入 200 ng/mL 的内标
                                                                  按“2.3.1”项下方法配制相应质量浓度的阿魏酸、芍
          溶液 10 μL 和甲醇 90 μL，涡旋混匀 5 min；再以 13 000
                                                              药苷、迷迭香酸混合对照品溶液，再按“2.5.2”项下方法
          r/min离心10 min，吸取上清液进样分析。
                                                              配制上述 3 种成分 LLOQ、低、中、高质量浓度（均为 10、
          2.5 方法学考察
                                                              30、100、400 ng/mL，下同）的质控血浆样品，每质量浓度
              根据2020年版《中国药典》（四部）通则“生物样品定
                                                              平行6份，按“2.4”项下方法处理后，再按“2.1”“2.2”项下
          量分析方法验证指导原则”的相关要求，对定量方法的
                                                              条件进样测定，考察日内精密度；连续测定 3 d，考察日
          专属性、线性、精密度、准确度、提取回收率及基质效应
                                                              间精密度。精密度以相对标准偏差（RSD）表示；准确度
          等进行考察。
                                                              以实测质量浓度与理论质量浓度的比值表示。结果（表
          2.5.1 专属性
                                                              3）显示，各待测成分日内、日间精密度试验的 RSD 成分
              取空白血浆、定量下限（lower limit of quantitation，
                                                              均低于15%，准确度为85.8%～113.6%，提示该方法精密
          LLOQ）质量浓度的校正标样（阿魏酸、芍药苷、迷迭香酸
                                                              度和准确度均良好。
          质量浓度均为 10 ng/mL，配制方法见“2.5.2”项）及灌胃
                                                              表3 香芍散结口服液中3种入血成分的精密度与准确
          给药15 min后的HMG模型大鼠血浆样品，按“2.4”项下                           度试验结果
          方法处理（空白血浆不加内标）后，再按“2.1”“2.2”项下                                         日内（n＝6）          日间（n＝3）
                                                                    理论质量浓度/
          条件进样分析。所得色谱图提示，阿魏酸、芍药苷、迷迭                           待测成分          实测质量浓度  精密度 准确度/  实测质量浓度  精密度 准确度/
                                                                     （ng/mL）
          香酸和内标色谱峰峰形良好，血浆内源性物质无干扰，                                         （x±s）/（ng/mL） RSD/%  %  （x±s）/（ng/mL） RSD/%  %
                                                              阿魏酸      10    9.18±0.96  10.5  91.8  9.81±0.82  8.4  98.1
          表明方法专属性良好（限于篇幅，该图可扫描本文首页                                     30    30.04±0.78  2.6  100.1  31.49±1.00  3.2  105.0
          二维码链接页面中“增强出版”板块查看）。                                        100   102.57±3.59  3.5  102.6  98.25±2.09  2.1  98.3
                                                                      400   424.65±6.92  1.6  106.2  399.21±8.24  2.1  99.8
          2.5.2 标准曲线绘制
                                                              芍药苷      10    10.23±0.86  8.5  102.3  10.30±1.53  14.8  103.0
              精密吸取空白血浆 50 μL，分别加入“2.3.1”项下阿                            30    29.58±1.25  4.2  98.6  30.14±1.41  4.7  100.5
          魏酸、芍药苷、迷迭香酸系列质量浓度的混合对照品溶                                    100   100.26±6.38  6.4  100.3  95.12±3.56  3.7  95.1
                                                                      400   400.88±8.29  2.1  100.2  397.64±10.62  2.7  99.4
          液 50 μL，得质量浓度分别均为 500、300、250、200、50、               迷迭香酸     10    10.46±0.27  2.6  104.6  9.94±0.59  5.9  99.4
          40、25、20、10 ng/mL 的校正标样。取上述校正标样，按                            30    25.74±1.35  5.3  85.8  26.83±2.47  9.2  89.4
                                                                      100   102.56±5.56  5.4  102.6  91.36±4.04  4.4  91.4
         “2.4”项下方法处理后，再按“2.1”“2.2”项下条件进样分
                                                                      400   454.59±18.32  4.0  113.6  364.72±14.40  3.9  91.2
          析，记录峰面积。以 3 种待测成分的色谱峰峰面积（Y）
                                                              2.5.5 基质效应与提取回收率试验
          对其质量浓度（X）进行线性回归，得各成分的回归方程。
                                                                  按“2.5.4”项下方法配制阿魏酸、芍药苷、迷迭香酸
          结果（表 2）表明，阿魏酸、芍药苷、迷迭香酸检测质量浓
                                                              低、中、高质量浓度的质控血浆样品，按“2.4”项下方法处
                                            2
          度的线性范围均为 10～500 ng/mL（R 均超过 0.991），
                                                              理后，再按“2.1”“2.2”项下条件进样分析，记录峰面积
          LLOQ均为10 ng/mL。                                    （A）。取空白血浆，加3倍体积的甲醇沉淀蛋白，离心后
          表2 香芍散结口服液中3种入血成分的回归方程及线
                                                              取上清液（具体操作见“2.4”项）；以此上清液为基质，制
               性范围
                                                              备与前述质量浓度相同的样品溶液，按“2.1”“2.2”项下
           待测成分        回归方程           R  2     线性范围/（ng/mL）   条件进样分析，记录峰面积（B）。取阿魏酸、芍药苷、迷
           阿魏酸       Y＝0.002 4X+0.010 4  0.991 1  10～500
           芍药苷       Y＝0.002 2X+0.020 2  0.993 3  10～500      迭香酸对照品各适量，用甲醇溶解、稀释，制备与前述质
           迷迭香酸      Y＝0.001 6X+0.017 9  0.997 0  10～500      量浓度相同的样品溶液，按“2.1”“2.2”项下条件进样分


          · 682 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 6                               中国药房  2025年第36卷第6期
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