Page 31 - 《中国药房》2025年5期
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相应药物/生理盐水，每日 1 次，连续 7 d。在整个过程                      30 min，加入二抗（1∶5 000）室温孵育 1.5 h；以 TBST 洗
          中，使用激光散斑系统对大鼠梗死侧的脑灌注情况进行                           膜后，使用 ECL 试剂盒显影，再使用 Image Lab 3.0 软件
          监测，若造模大鼠出现明显缺血现象且肢体状态稳定，                           分析各条带灰度值，以目的蛋白与内参蛋白 Vinculin 的
          则表明造模成功。                                           灰度值比值表示目的蛋白的表达水平，然后以 Sham 组
          2.3 大鼠体重和运动功能评价                                    为标准进行归一化处理。
              术后第7天，测定大鼠体重，并采用Longa评分法评                      2.8 统计学分析
          估大鼠的神经功能损伤：0分，无神经功能缺损；1分，不                             使用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。符合正
          能完全伸展对侧前肢；2分，行走时向对侧转圈；3分，行                         态分布的数据以x±s表示，多组间比较采用单因素方差
                                                    [8]
          走时向对侧倾倒；4 分，无法自主行走，意识丧失 。随                         分析，组间两两比较采用 LSD-t 或 Tamhane’s T2 检验。
          后，使用小动物跑步机（刺激电流强度为 1.50 mA、跑道                      检验水准α＝0.05。
          速度为 10 m/min）评估 5 min 内大鼠运动距离。待大鼠                  3 结果
          休息30 min后，采用握力仪检测其四肢握力（测试时，操                       3.1 菊花水提物对大鼠体重及运动功能的影响
          作者以恒定速度将大鼠向后拉，使其抓紧握力仪的拉                                与 Sham 组比较，模型组大鼠体重、握力、运动距离
          环，确保动物体位与仪器平行）。各组取5只大鼠参加检                          均显著减小/缩短（P＜0.01），Longa 评分显著升高（P＜
          测，每只大鼠检测3次，取平均值。                                   0.01）。与模型组比较，ATP组和菊花水提物各剂量组大鼠
          2.4 大鼠骨骼肌电生理检测                                     体重、握力、运动距离均显著增大/增长（P＜0.05 或 P＜
              术后第 1、3、5、7 天，将大鼠水平固定，使其后肢悬                    0.01），Longa评分显著降低（P＜0.01）。结果见表1。
          空，使用针状电极刺入患侧后肢骨骼肌组织内，施加刺                              表1 各组大鼠体重及运动功能比较（x±s，n＝5）
          激电流，获得响应电信号振幅，测量波峰－波谷差值（即                           组别           体重/g    Longa评分/分   握力/g    运动距离/m
          峰间值），以评估骨骼肌组织对电刺激的反应。各组取3                           Sham组      251.00±7.40  0     1 426.67±162.39  49.30±0.00
                                                              模型组        144.60±10.53 a  4.00±0.00 a  638.60±115.03 a  14.44±2.46 a
          只大鼠参加检测，每只大鼠检测3次，取平均值。                              ATP组       199.20±29.29 b  1.40±0.55 b  886.40±167.98 c  46.06±5.11 c
          2.5 大鼠比目鱼肌病理形态学观察                                   菊花水提物高剂量组  190.80±24.01 b  1.50±0.58 b  1 014.80±187.73 b  45.64±2.84 b
              末次行为学检测后，麻醉大鼠，剥离其皮肤和肌肉                          菊花水提物低剂量组  205.00±23.34 b  1.50±0.58 b  1 091.60±181.15 b  41.20±3.60 b
          组织，暴露并分离比目鱼肌。取各组大鼠比目鱼肌适                               a：与Sham组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型
                                                             组比较，P＜0.05。
          量，固定于4%多聚甲醛溶液中72 h，脱水后包埋在石蜡
                                                             3.2 菊花水提物对大鼠骨骼肌电生理的影响
          中，切成 3 μm 薄片，脱蜡后按 HE 试剂盒说明书染色。
                                                                 与Sham组比较，模型组大鼠第1、3、5、7天的骨骼肌
          封片后，于显微镜下观察并拍照，采用病理切片扫描仪
                                                             电生理峰间值均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。与模
          分析骨骼肌细胞横截面积。
                                                             型组比较，ATP 组（第 1 天除外）和菊花水提物各剂量组
          2.6 大鼠血清和比目鱼肌中TNF-α水平的检测
                                                             大鼠第 1、3、5、7 天的骨骼肌电生理峰间值均显著升高
              对大鼠剥离比目鱼肌后，再对其腹主动脉取血，待
                                                            （P＜0.01）。结果见表2。
          全血室温静置 30 min 后，以 3 500 r/min 离心 15 min，收
                                                             表2 各组大鼠骨骼肌电生理峰间值比较（x±s，n＝3，
          集血清，置于－80 ℃保存备用。取大鼠比目鱼肌 50
                                                                  mV）
          mg，加入200 μL组织匀浆缓冲液，匀浆后以2 500 r/min
                                                              组别            第1天      第3天      第5天      第7天
          离心20 min，收集上清液。按照试剂盒说明书方法测定                         Sham组        11.84±0.91  11.72±0.51  11.14±0.61  12.00±1.40
          大鼠血清和比目鱼肌中 TNF-α 水平。各组分别取 4 只                       模型组          6.29±1.03 a  4.96±1.34 a  5.90±0.57 b  5.61±1.32 a
          大鼠的血清和比目鱼肌进行检测。                                     ATP组         6.00±1.58  7.89±0.69 c  9.39±0.21 c  10.32±1.70 c
                                                              菊花水提物高剂量组    7.39±0.86 c  8.83±0.65 c  8.12±0.23 c  10.85±1.33 c
          2.7 大鼠比目鱼肌中 TNF-α/JNK/MAPK 信号通路相                    菊花水提物低剂量组    9.22±0.15 c  8.47±0.64 c  9.75±1.50 c  11.21±1.23 c
          关蛋白表达水平的检测                                            a：与Sham组比较，P＜0.01；b：与Sham组比较，P＜0.05；c：与模型
              各组分别取 4 只大鼠的比目鱼肌 50 mg，加入 RIPA                 组比较，P＜0.01。
          裂解液提取蛋白，采用 BCA 试剂盒测定蛋白浓度。蛋                         3.3 菊花水提物对大鼠比目鱼肌病理形态学的影响
          白样品经 10% 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳                             与 Sham 组[骨骼肌细胞横截面积为（2 361.71±
          后，转至PVDF膜，加入5%牛血清白蛋白，室温封闭2 h；                      158.35）μm ]比较，模型组大鼠比目鱼肌的骨骼肌细胞明
                                                                      2
                                                                                               2
          加入TNF-α（稀释度为1∶1 000）、JNK（稀释度为1∶2 000）、             显萎缩，横截面积[（1 397.40±66.36）μm ]显著减小（P＜
          p-JNK（稀释度为 1∶2 000）、MAPK（稀释度为 1∶1 000）、            0.01）。与模型组比较，ATP 组和菊花水提物高、低剂量
          p-MAPK（稀释度为 1∶1 000）、MuRF-1（稀释度为 1∶                组大鼠比目鱼肌的骨骼肌细胞明显增大，横截面积[分
          5 000）、Atrogin-1（稀释度为 1∶2 000）、Vinculin（稀释度        别为（1 769.83±120.24）、（1 933.24±140.01）、（2 017.26±
                                                                      2
          为1∶3 000）一抗，4 ℃孵育过夜；以TBST洗膜5次，每次                   164.95）μm ]显著增大（P＜0.01）。结果见图1。

          中国药房  2025年第36卷第5期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 5    · 537 ·
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